鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应     

抗鸡IgC单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

利用纯化鸡血清ＩｇＣ免疫的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合，用ＥＬＩＳＡ间接法和夹心法作阳性抗体检测，经有限稀释法克隆，结果筛选出１株可持续分泌抗鸡ＩｇＣ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株３Ｅ３，其培养上清和诱生Ｂｌａｂ／ｃ小鼠腹水的ＭｃＡｂ效价分别为１：４×１０＾２－１．２８×１０＾４和１：８×１０＾５－１×１０＾１０，经染色体分析可见到两种形态的染色体，该细胞株经体连续     

分泌抗BVDV McAb杂交瘤细胞株的建立

用牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）感染ＭＤＢＫ细胞,将感染细胞培养物冻融后离心取上汪经ＰＥＧ沉淀浓缩抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取血清抗体效价高遥免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合,产生杂交瘤细胞,用间接ＥＬＩＳＡ法检测杂交瘤细胞生长孔上清,筛选阳性杂交瘤细胞株。以有限稀法克隆２－３次,得到８ 泌抗ＢＶＤＶ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。８株ＭｃＡｂ对ＢＶＤＶ,猪瘟均呈阳性反应。杂交     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞发校瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ、４ＡＦ１、６ＤＨ及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ６２株单抗牧场卉性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩ     

新颖抗猪流行性腹泻免疫制剂

以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ），通过蔗糖密度梯度离心纯化，获得结构较为完整的病毒颗粒，病毒ＥＬＩＳＡ效价为１：３×１０＾５，蛋白含量为３．９６ｍｇ／ｍＬ。将提纯的ＰＥＤＶ免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合，融合率为９５．６％。用间接ＥＬＩＳＡ筛选并进行３次再克隆，阳性率达１００％，共获得１５株能稳定分泌特异性抗ＰＥＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。其染     

阻燃剂处理实木板材的耐燃性改善效应

两种商用木材（南洋乌心石及菲律宾贝壳杉）为试材,经阻燃剂加压注入后,探讨其耐燃性改善效应。耐燃性改善效应分别为,ＩＥｔｃ７．６％～３１２％;ＩＥｔｄθ２１２％～９７５％;ＩＥＣＡ６％～８４３％;ＩＥＡｆ２６８％～１００％;ＩＥＷｌｐ３２１％～６７６％。阻燃剂对试材的耐燃性改善效应以ＦＲ Ａ,ＦＲ Ｃ为佳,ＦＲ Ｂ最佳。阻燃剂吸收量与试材的重量减少率呈负相关。南洋乌心石的耐燃性改善效应优于菲律宾贝壳杉。药剂吸收量对试材各表面燃烧性质的抑制效果,着火性（Ｅｔｃ）：００６～１５８ｓｅｃ（ｋｇ／ｍ３）～１;发热性（Ｅｔｄθ）：０４９～３３０℃．ｍｉｎ（ｋｇ／ｍ３）－１;发烟性（ＥＣＡ）：００４～０５２（ｋｇ／ｍ３）－１;余焰时间（ＥＡｆ）：０１９～０８５ｓｅｃ（ｋｇ／ｍ３）－１;重最减少率（ＥＷｌｐ）：００６％～０２１％（ｋｇ／ｍ３）－１。欲通过耐燃３级时,试材对各药剂的最少推估吸收量,分别为ＦＲ Ａ：７８８～１７１４ｋｇ／ｍ３;ＦＲ Ｂ：４８０～１２５０ｋｇ／ｍ３;ＦＲ Ｃ：８３８～１４２６ｋｇ／ｍ３。     

副结核分枝杆菌McAb的某些特性鉴定

以超声波粉碎的副结核分枝杆菌地方株Ｃ２抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经与ＮＳ－１骨髓瘤细胞三次融合，获得了３株能稳定分泌抗副结核分枝ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系，其染色体数目为７８－１１０条，分别为ＩｇＭ和ＩｇＧ２。应用间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞培养液，腹水和血清效价为１０＾－２～１０＾－７。交叉试验证明，ＭｃＡｂＯ１与受试的各株副结核分枝杆菌反应强烈，与牛分枝杆菌和草分枝杆菌有微弱特异性抗原之一。ＳＤＳ－Ｐ     

嗜水气单胞菌HEC毒素单克隆抗独特型抗体研究

用嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，通过一次性杂交瘤融合，在筛选ＨＥＣ毒素单克隆抗体（ＭｃＡｂ１）的同时，用兔抗ＨＥＣ毒素血清（ＰＡｂ）包板的ＥＬＩＳＡ方法，筛选到两株抗ＨＥＣ毒素的单克隆抗独特型抗体（ＭｃＡｂ２）。两株ＭｃＡｂ２腹水ＥＬＩＳＡ效价分别为１：２０４８０和１：５１２０，属于ＩｇＧ１亚类。ＨＥＣ毒素的模拟抗原ＭｃＡｂ２不能溶解人的Ｏ型红细胞，但能与相应的ＰＡｂ反应，并能阻断ＰＡｂ与ＨＥＣ毒素的结合。将ＭｃＡｂ２连接到同源小鼠红细胞（ＭＲＢＣ）后免疫小鼠，用ＨＥＣ毒素包板的ＥＬＩＳＡ检测其血清，呈阳性结果，说明ＭｃＡｂ２能模拟ＨＥＣ刺激机体产生抗ＨＥＣ毒素的抗体（Ａｂ３）。     

兔出血症病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析

通过ＥＬＩＳＡ迭加试验对５株抗兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原表位进行了分析。抗体反应增值结果表明，６株单抗分别针对３类不同的抗原决定簇。ＣＧ４－１、ＣＨ３－１和ＡＡ８－１针对病毒结构多肽上的同一决定簇，ＣＦ２－１和ＲＭ－１７针对另一决定族，而ＲＭ－１４针对第３种决定簇；其识别表位可能与ＡＡ８－１非常接近。单抗的识别表位与其生物学活性密切相关。     

烟草叶组织培养再生系统的建立

将５ｍｍ×５ｍｍ左右的烟草叶片接种到２／３ＭＳ＋ＢＡ０５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０１ｍｇ／Ｌ的培养基中培养２周,从外植体的边缘产生芽点,４周后分化出大量丛生芽,继续培养到６周后,当芽长２～３ｃｍ时,转移到２／３ＭＳ＋ＢＡ０１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ１ｍｇ／Ｌ的培养基中分化出根,形成完整的再生植株。当株高３～４ｃｍ时,移栽到经过灭菌的营养土盆中。开始时先用１／３ＭＳ培养液浇苗３～４ｄ,以后正常管理,营养生长形成１０片叶时开始现蕾,１１～１２片叶时开花结出绿果。     

减蛋综合征病毒单克隆抗体的生物学特性鉴定

该研究在建立分泌减蛋综合征病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的基础上，鉴定了１０株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体（４Ｂ１，１Ｄ４，２Ｄ６，３Ｄ６，２Ａ１，３Ａ５，３Ｃ６，３Ｃ１，１Ｂ３和２Ｃ５）和生物学活性，这１０株杂交瘤细胞分泌的抗体有高度的特异性，只特异地作用于减蛋综合征病毒，微量血凝抑制试验（ＨＩ）发现４Ｂ１，３Ｃ１，２Ｃ５和３Ｃ６有血凝抑制活性，腹水效价分别为２４（ｌｏｇ２），４（ｌｏｇ２），７（ｌ     

甘薯青枯病菌单克隆抗体的分类及其血清型研究

用甘薯青枯病菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｏｌａｎａｃｅａｒｃｕｍ）免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤细胞杂交融合，建立了４株分泌抗甘薯青枯病菌的特异性、有鉴别力的杂交瘤细胞株：ＰＳＢ２４、ＰＳＢ２８、ＰＳＢ４６、ＰＳＢ５６。 交瘤细胞株染色体数范围为９８－１０４，ＥＬＩＳＡ试验培养液抗体滴度为保这ＭｃＡｂ的玫＃＃     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇     

单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究

利用 ２ 株特异性单抗,建立了检测蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ＥＬＩＳＡ 方法⒚经测定,ＭｃＡｂ 最适包被浓度为０４ μｇ／ｍ Ｌ,ＨＲＰＭｃＡｂ 最佳工作浓度为１∶２ ０００,该方法最小检出浓度为０１６ μｇ／ｍ Ｌ,与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 １４０ 多个样本进行了检测,发现蚕豆、豌豆中ＢＢＷ Ｖ 的阳性率达 ８０％ ⒚     

钩端螺旋体七日热血清型(56610)特异性单克隆抗体的研制

钩端螺旋体七日热血清型（５６６１０）培养物，经甲醛灭活后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合获得６株阳性杂交瘤，分别定名为１Ａ９、１Ｂ８、１Ｆ９、２Ｄ１０、２Ｅ４、３Ｅ８，其中１Ａ９、１Ｆ９、２Ｄ１０、２Ｅ４为特异性抗５６６１０杂交瘤．抑制试验结果表明，多抗血清能够有效地抑制这些特异性单抗，这些特异性单抗被鉴定为ＩｇＧ１亚类．     

苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1E的改造

利用ＰＣＲ片段延伸连接技术将ｃｒｙ１Ｅ的原启动子准确地更换与ｃｒｙ３Ａ启动子,重组ｃｒｙ１Ｅ经载体ＰＨＴ３１５克隆至枯草芽胞杆菌无芽胞突变株ＩＳ８和苏云金杆菌以色列亚种无晶体突变株４Ｑ７,获得重组菌３Ａ１ＥＢｓ和３Ａ１ＥＢｔ。聚丙烯酰胺凝胶电泳和生物测定表明,克隆改造后的ｃｒｙ１Ｅ可表达,表达的Ｃｒｙ１Ｅ对海灰翅夜蛾有毒。     

转Bt基因棉对棉铃虫生长发育及繁殖的影响

以转Ｂｔ（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）基因棉品系Ｒ９３－４为试验材料,以常规棉品种中棉所１２为对照,研究了转Ｂｔ基因棉对棉铃虫生长发育与繁殖的影响。结果表明：１～４龄棉铃虫幼虫连续取食转基因棉最终不能存活,５龄和６龄幼虫的存活率分别为３７９％～８５６％和６３４％～９６５％;５龄棉铃虫幼虫取食转基因棉后,体重和蛹重分别减轻１８７％～５７２％和３５％～３６２％,化蛹率和羽化率分别降低４８２％～８７５％和６６７％～１００％,产卵量和卵孵化率分别降低５０１％～６９７％和８０６％～８７８％;取食转基因棉的花粉后,成虫的产卵量和卵孵化率分别比对照降低５９８％和７２１％     

酿酒酵母与糖化酵母的核倍性融合株的构建

在探讨原生质体制备、融合及再生条件的基础上，采用聚乙二醇（ＰＥＧ）对耐高温的酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＨＵ－ＴＹ－１Ａ菌株和淀粉发酵力最强的糖化酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｄｉ－ａｓｔａｔｉｃｕｓ）５２０６－１Ｂ菌株进行种间或同株间的原生质体融合，获得了数株ＨＵ－ＴＹ－１Ａ和５２０６－１Ｂ的同株以及种间融合株，融合率为（１．３～９．０）×１０￣（－６）．通过测定融合株的细胞体积大小、ＤＮＡ含量、遗传稳定性和营养要求等表明：融合株细胞体积和ＤＮＡ含量约为两亲株之和；种间融会株具有双亲株的遗传特性；融合株的倍性为２ｎ，３ｎ，４ｎ及５ｎ。     

钩端螺旋体七日热血清型（56610）特异性单克隆抗体的研制

钩端螺旋体七日热血清型（５６６１０）培养物，经甲醛灭活后免疫ＢＡＬ Ｂ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合获得６株阳性杂交瘤，分别定名为１Ａ９、１Ｂ８、１Ｆ９、２Ｄ１０、２Ｅ４、３Ｅ８，其中１Ａ９、１Ｆ９、２Ｄ１０、２Ｅ４为特异性抗５６６１０杂交瘤。抑制试验结果表明，多抗血清能够有效地抑制这些特异性单抗，这些特异性单抗被鉴定为ＩｇＧ１亚类。     

禽成髓细胞性白血病病毒的繁殖及其杂交瘤细胞株的建立

用实验室￣２０℃条件下保存６年的禽成髓细胞性白血病病毒ＢＡＩ－Ａ株鸡传代血浆毒感染１￣３日龄的雏鸡，接毒后１５￣４５ｄ陆续发病。取其血浆毒，经差速离心和蔗糖密度梯度离心，获得较纯的ＡＭＶ抗原，用此抗原免疫８￣１０周龄ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，将其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ瘤细胞进行融合，经ＥＬＩＳＡ筛选、克隆、共获得６株阳性杂交瘤细胞株，分别采用传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、传染性喉气管炎病毒