分泌抗BVDV McAb杂交瘤细胞株的建立

用牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）感染ＭＤＢＫ细胞,将感染细胞培养物冻融后离心取上汪经ＰＥＧ沉淀浓缩抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取血清抗体效价高遥免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合,产生杂交瘤细胞,用间接ＥＬＩＳＡ法检测杂交瘤细胞生长孔上清,筛选阳性杂交瘤细胞株。以有限稀法克隆２－３次,得到８ 泌抗ＢＶＤＶ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。８株ＭｃＡｂ对ＢＶＤＶ,猪瘟均呈阳性反应。杂交     

鸭源新城疫病毒和减蛋综合征病毒在同一鸭胚中增殖的观察

用鸭源新城疫病毒（ＮＤ）Ｄ１０株和减蛋综合征（ＥＤＳ—７６）病毒ＧＣ２株同时在同一鸭胚中复制增殖．结果表明：（１）两种病毒同时感染同一鸭胚后，鸭胚平均死亡时间（ＭＤＴ）７３．６ｈ，死亡率８８．２％（１５／１７）．胚体皮肤出血、淤血，绒毛尿囊膜水肿、增厚，尿囊液能凝集人和鸡红细胞．（２）尿囊液感染鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞，致细胞病变（ＣＰＥ），证实尿囊液中存在ＮＤＶ．用间接法Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ检测ＥＤＳ—７６病毒抗原，结果为阳性．（３）电镜观察经提纯浓缩后的尿囊液，可见到两种病毒粒子：ＮＤＶ形态不一，多数直径约１２０～１３０ｎｍ或更大．有囊膜；ＥＤＳ—７６病毒呈圆形，直径约７０ｎｍ，有囊膜．（４）用血凝试验（ＨＡ）测定两种病毒．其生长规律与单独接种时一致．（５）接种灭活的含毒尿囊液的雏鸡，在血清中出现抗两种病毒的ＨＩ抗体及抗ＥＤＳ－７６病毒的中和抗体，对ＮＤＶ强毒攻击有坚强的免疫力。     

花生病毒病研究：I.花生矮花叶病的病原鉴定

１９８７－１９９３年期间，在河北、河南、山东、辽宁、北京４省１市先后采集花生矮花叶病及斑驳病标样２９０个，冷干保存，经用鉴别寄主测定、间接ＥＬＩＳＡ、电镜观察证明，引起北方花生产区花生矮花叶病的病原是花生条纹病毒（轻斑驳病毒）（ＰＳＴＶ原ＰＭＭＶ）、花矮化病毒（ＰＳＶ）、花生黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ－ＣＡ）、花生斑驳病毒（ＰＭＶ）其发生频率依次为４７％，４１．３５，３３．３％，３．３％。在我国除台湾外     

传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白基因及其表达产物免疫学试验

用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡,免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价,并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示：（１）ＶＰ２基因重组质粒ＤＮＡ除可诱导产生较高的ＥＬＩＳＡ抗体外,还可明显降低仔鸡ＩＢＤＶ攻击所引起的急性发病率和死亡率;（２）ＶＰ３－ＧＳＴ融合蛋白表达产物全菌裂解液可较早地诱导产     

花生病毒病研究──Ⅰ．花生矮花叶病的病原鉴定

１９８７～１９９３年期间，在河北、河南、山东、辽宁、北京４省１市先后采集花生矮花叶病及斑驳病标样２９０个，冷干保存，经用鉴别寄主测定、间接ＥＬＩＳＡ、电镜观察证明，引起北方花生产区花生矮花叶病的病原是花生条纹病毒（轻斑驳病毒）（ＰＳＴＶ原ＰＭＭＶ）、花生矮化病毒（ＰＳＶ）、花生黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ—ＣＡ）、花生斑驳病毒（ＰＭＶ）其发生频率依次为４７％，４１．３％，３３．３％，３．３％．在我国除台湾省外，在北方花生产区第１次报道ＰＭＶ的发生。     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇     

苹果潜隐病毒快速检测

该文以优系短枝富士为主要试材，采用木本指示植物和间接酶联免疫（ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ）两种方法，对苹果褪绿叶斑病毒（ＣＬＳＶ）、苹果茎沟病毒（ＳＧＶ）和苹果茎痘病毒（ＳＰＶ）进行了检测．试验表明，俄罗斯苹果Ｒ１２７４０－７Ａ、司派２２７和弗吉尼亚小苹果３种指示植物可作为上述３种潜在病毒的鉴定植物．植物生长状况对鉴定结果有重大影响．间接酶联免疫检测速度快，准确度高．该试验所用最佳抗体工作浓度ＣＬＳＶ：第一抗体１／６０００，第二抗体１／２０００；ＳＧＶ：第一抗体１／５０００，第二抗体１／３０００．     

黄瓜花叶病毒（CMV）高效价抗血清的制备及其在FLISA中的应用

以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射、肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６）；在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或Ｚμｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密度值之比大于或等于３作为判断待测样本为阳性反应的标准，结果表明：间接ＥＬＩＳＡ试验的灵敏度比生物检测的灵敏度要高３２～１６０倍。用间接ＥＬＩＳＡ检测矮牵牛的病毒样本３０份，ＣＭＶ占７０％。     

ELISA技术检测马铃薯病毒的研究

应用ＤＡＳ ＥＬＩＳＡ方法对甘肃省种植的６个马铃薯品种老龄薯和幼龄薯及２个品种的茎尖组培苗进行了针对ＰＶＸ、ＰＶＹ及ＰＬＲＶ的病毒检测。结果表明,老龄薯块携带以上３种病毒,并以ＰＬＲＶ为主体的复合侵染为主,幼龄薯块仅带其中一种病毒,且带毒量少;茎尖剥离组培法可使陇薯３号和１６７ ４５脱毒率达２０％。以幼龄薯为脱毒基础材料可望进一步提高脱毒率。文中还对ＤＡＳ ＥＬＩＳＡ技术在马铃薯病毒检测中的优势进行了评价。     

禽成髓细胞性白血病病毒的繁殖及其杂交瘤细胞株的建立

用实验室￣２０℃条件下保存６年的禽成髓细胞性白血病病毒ＢＡＩ－Ａ株鸡传代血浆毒感染１￣３日龄的雏鸡，接毒后１５￣４５ｄ陆续发病。取其血浆毒，经差速离心和蔗糖密度梯度离心，获得较纯的ＡＭＶ抗原，用此抗原免疫８￣１０周龄ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，将其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ瘤细胞进行融合，经ＥＬＩＳＡ筛选、克隆、共获得６株阳性杂交瘤细胞株，分别采用传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、传染性喉气管炎病毒     

甜樱桃病毒病的ELISA检测研究

对陕西省甜樱桃病毒病发生情况进行了ＥＬＩＳＡ检测研究。查明了李属坏死环斑病毒（ＰＮＲＳＶ）、李矮缩病毒（ＰＤＶ）、苹果褪绿叶斑病毒（ＣＬＳＶ）和苹果花叶病毒（ＡｐＭＶ）在甜樱桃上的感染情况,即ＰＮＲＳＶ的感染率最高,ＣＬＳＶ和ＡｐＭＶ的发生也比较普遍,ＰＤＶ的感染率较少。老园的病毒感染率及混合感染类型比幼园高且复杂,说明病毒在樱桃园内可以相互传播。在较老的栽培园中,ＰＮＲＳＶ、ＰＤＶ、ＣＬＳＶ和ＡｐＭＶ的总感染率高达６４．５％。     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒提纯病毒粒子免疫ＢＡＬ Ｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有稀释法克隆,成功获得了２株ＢＢＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１：６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ ４４．７ｋＤ的外壳蛋白     

珍禽霉形体抗体检测方法的建立和应用

本试验经培养特性,形态特征,红细胞吸附试验和生长抑制试验等从８株珍禽霉形体中筛选出１株具有代表性的菌株ＭＧ－Ｐ,将ＭＧ－Ｐ和标准株ＭＧ－Ｓ０分别建立了ＨＩ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验,检测了３批１２０份共１００种珍禽动物的血清样本,ＭＧ－Ｐ的阳性检出率为ＨＩ１４．２％（１７／２０）,Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ１６．７％（２０－１２０）,两法阳性符合率为８５％（１７／２０）;ＭＧ－Ｓ０的阳性检出率为ＨＩ９．２％     

侵染绿花椰菜的黄瓜花叶病毒（CMV）研究

从杭州市郊菜园表现严重花叶、矮化症状的绿花椰菜病株上获得一病毒分离物Ｃ－９３１。汁液摩擦接种６科２１种植物，Ｃ－９３１可侵染其中的６科１９种；体外抗性测定表明Ｃ－９３１的稀释限点（ＤＥＰ）为１０￣（－２），致死温度（ＴＩＰ）为５５－６０℃，２５℃体外存活期（ＬＩＶ）为４ｄ；提纯病毒粒体球形，平均直径２８ｎｍ；在琼脂双扩散反应中Ｃ－９３１能与ＣＭＶ抗血清呈阳性反应；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其衣壳蛋白亚基分子量为２９ｋＤ；用ＣＦ－１１纤维素柱提取受侵植物组织中ｄｓＲＮＡ，电泳鉴定表明共有５个核酸组分，长度（ｋｂ）分别为３．３，３．０，２．２，０．９和０．３５．根据上述性状，Ｃ９３１被鉴定为黄瓜花叶病毒，且该分离物含卫星ＲＮＡ。     

用SPA—ELISA检测牛结核乳清抗体的研究

从用牛ＰＰＤ皮试阳性奶牛中采取１８头份牛乳，不稀释，做ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测，进行了ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ条件优选工作，建立了检测牛乳清中结核抗体的ＥＬＩＳＡ工作程序。检测结果表明：１８份ＰＰＤ皮试阳性牛乳，经ＳＰＡ－ＥＳＩＳＡ检测阳性为１５份，阴性为３份，结果附合率为８３．３３％。     

广东兰花病毒病的鉴定和检测研究

用建立的ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法，检测了来自广东省７市１８个场场或兰圃的２０种兰共１５９个感病兰花样本，建兰花叶病毒（ＣｙＭＶ）和齿兰环斑病毒（ＯＲＳＶ）以及ＣｙＭＶ和ＯＲＳＶ复合感染分别在４０，２６和６个样本中检测到，分别占所检测样品的２５．２％，１６．４％和３．８％，占所检测的２０个兰种的５０％（１０／２０），３５％（７／１０）和１５％（３／２０），感染ＣｙＭＶ的兰种有墨兰，文心兰，大花惠兰（组培     

Dot—ELISA在鸡IBD免疫检测及诊断中的应用研究

利用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）细胞适应株在鸡胚ＣＥＦ单层培养物上增殖后经超速冷冻离心制备抗原，以国产ＮＣ膜为载体建立了检测与诊断鸡ＩＢＤ的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。经与ＡＧＰ、ＶＮ、ＥＬＩＳＡ等方法进行比较，表明本方法灵敏，快速，简易，特异性强，重复性良好。对ＩＢＤ抗体的检测结果表明，采用首次以ＩＢＤ弱毒苗与灭能油乳剂苗同时免疫，再次用油乳剂苗加强免疫的接种程序，可获得显著而持久的抗体水平，带     

大麦黄矮病毒GAV株系通读蛋白基因的序列分析及其在大肠杆菌中的表达

以大麦黄矮病毒（ＢＹＤＶ）ＧＡＶ为模板,通过ＲＴ－ＰＣＲ护增获得通读蛋白（readthrough protein RTP)基因的目的版段,将其重组到pGEM-7zf( )并转化ＪＭ１０９利到了含有完整ＲＴＰ基因的重组子,采用又脱氧终上法进行序列分析。结果表明,ＲＴＰ基因为１３３７nt,与文献报道的血清学较密切的ＢＹＤＶ ＭＡＶ－ＰＳ１相比,核苷酸和氨其酸的同源性分别为８７．４％和８７．１％。将些ＲＴＰ基因克隆到原核表达质粒pET-5a上,在大肠植菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中用ＩＰＴＧ旅导表达,利用 分离包含体的方法结合ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳,利到了纯化的分子是为６６ku的非融合蛋白。     

用双夹心法ELISA检测兔轮状病毒的研究

建立了检测兔轮状病毒抗原的夹心法ＥＬＩＳＡ（ＤＳ－ＥＬＩＳＡ）。用此法检测了６７份兔腹泻粪便样品和腹泻死亡兔肠内容物样品。轮状病毒（ＲＶ）阳性检出率（３１．３４％）明显高于双抗体夹心法ＥＬＳＡ（２５．３７％）和对流免疫电泳（１６．４１％）。经阻断试验和重复性试验，证明了ＤＳ－ＥＬＩＳＡ具有特异性强和重复性好等优点。     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞发校瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ、４ＡＦ１、６ＤＨ及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ６２株单抗牧场卉性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩ