捻转血矛线虫感染性三期幼虫gst基因的筛选及抗干燥功能分析

为研究干燥作用对捻转血矛线虫L3期幼虫mRNA表达的影响,筛选并分析干燥相关表达基因,本试验利用mRNA差异显示技术得到了捻转血矛线虫干燥相关基因,通过相对荧光定量PCR验证所获基因的表达情况,并在秀丽隐杆线虫中通过RNA干扰抑制相关同源基因的表达检测干燥后复苏虫体生存率以研究基因抗干燥功能。结果显示,差异表达序列GH-U02A与已知捻转血矛线虫谷胱甘肽-S-转移酶(GST)氨基酸同源性为94%。对秀丽隐杆线虫Ce-gst-7基因进行RNA干扰后,虫体在干燥后的生存率降低,证明gst基因在线虫中有抗干燥功能。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳银染斤法的改进

随着分子生物学的发展，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析技术在小分子量PCR产物的分离中的应用越来越多，但因操作步骤繁多、耗时长，不利于大量分析工作的开展。对聚丙烯酰胺凝胶电泳的银染方法做些改进，合并常规银染过程中的固定和银染两步骤。与常规方法相比，该方法具有操作简便、耗时短、条带清晰的特点，该方法适用于实验室大规模PCR产物的分离。     

PAGE凝胶电泳银染方法的改进

为改良DNA聚丙烯凝胶电泳（PAGE）银染方法,采用PCR方法扩增鸡基因组微卫星DNA序列后,经PAGE分离扩增产物和pBR322 DNA/BsuRI标准分子质量,利用2种银染法对微卫星位点进行检测,分析其灵敏度和可行性。结果表明,2种方法都能染出Marker的所有条带,灵敏度均为25 ng,但在染色所需时间和可操作性方面,改进的染色方法优于Sanguinetti等所建立的方法。改进的银染方法染色过程较快,仅需25 min左右,且染色液和显影液可回收利用。该方法能显著提高检测分辨率,在实际应用中提高了染色效率。     

甘薯AFLP扩增产物的PAGE胶快速银染方法

对目前6种常用的PAGE银染方法的成本、时间及染色效果等进行比较.结合笔者所在实验室的具体情况,用简易强碱法对甘薯AFLP扩增产物进行银染,分析银染过程中漂洗时间、次数,银染用水对银染效果的影响,建立了甘薯AFLP扩增产物的PAGE胶快速银染方法,可以批量生产银染AFLP扩增产物,银染效果较好.     

牛饲喂含鱼油的日粮后瘤胃外流的长链脂肪酸氢化中间产物的鉴定

本试验旨在研究牧草基础性日粮中添加250g/d鱼油(FO)后,牛皱胃中20～24碳脂肪酸的富集情况及瘤胃中长链不饱和脂肪酸的代谢。银染薄层色谱分析法和气质串联质谱方法用于分析样鱼油和皱胃食糜中酯化脂肪酸和4,4-二甲基唑烷的衍生物的量便于定性20～24碳脂肪酸。与对照组比较,FO处理组会引起20碳和22碳氢化中间体(包括至少一个反式双键脂肪酸)的积累,而在鱼油中未出现c-14C20:1、C20:2n-3、C21:4n-3和C22:3n-6。在对照组和处理组食糜中未检测到20碳以上共轭脂肪酸。总之,日粮中鱼油会引起泌乳奶牛皱胃中大量长链脂肪酸氢化中间体的积累。比较对照组和处理组奶牛摄食和皱胃外流的20、21、22碳脂肪酸量表明,C20:5n-3、C21:5n-3、C22:6n-3被证实在瘤胃中氢化第一步为近羧基端双键的还原和异构化。     

银染mRNA差异显示方法在致突变实验中的初步应用

为建立在药物致突变研究中应用银染 m RNA差异显示的方法 ,试验提取未经过 /经过环磷酰胺处理的 Balb/c小鼠肝组织的总 RNA ,并以此为模板 ,采用 d T1 2 CG、d T1 2 AG、d T1 2 GG为锚定引物 ,通过反转录、差异显示 PCR反应 ,以 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离差异条带 ,回收后将其再扩增。结果表明 ,RNA投入量为 3μg、镁离子浓度为 1.5～ 2 .0 mm ol/L、退火温度为 4 0℃时 ,扩增的片段条带清晰、背景低 ,差异条带明显 ,再扩增条带单一。银染 m RNA差异显示技术可成功应用于药物致突变的研究。     

mRNA差异显示技术研究进展

运用mRNA差异显示技术可以了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况,为研究生命活动过程提供重要信息.对差异显示技术的基本原理、优缺点以及近年来此方法的改进进行了论述和评价,并对其应用前景进行了简单分析.     

山西瘦肉型猪新品系（SD—Ⅰ）系染色体银染核仁组织区核型分析

（ＳＤ—Ⅰ）系猪银染核仁组织区具有较高的稳定性。其有效银染核仁组织区的位点分布集中在１０号和８号染色体的次缢痕处。当只有一个有效银染发生时，它一定出现在１０号染色体的一条单位上。在本次试验中。仅发现一例其有效银染发生在６号染色体上。有效银染核仁组织区的数量分布在１～４之间，优势银染数目为三。认为细胞悬液保存技术不适于核仁组织区银染处理。     

梅花基因组AFLP银染反应体系的建立和优化

采用改进的SDS DNA提取方法从梅花的嫩叶和老叶中提取获得总DNA .所得DNA样品的OD2 6 0 OD2 80 值在1 7～ 1 9之间 ,琼脂糖凝胶上主带清晰、较少降解、样品纯度高、蛋白去除干净且得率高 .该体系对原提取程序作了多处简化 ,使操作简便、快捷、高效 ,适合于梅花DNA提取 ,所提取的DNA样品不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂 ,可被限制性内切酶MseⅠ和EcoRⅠ完全酶切 ,适合AFLP PCR反应应用 ,得到清晰的指纹式样 .