澳洲鳗鲡的核型及银染

采用秋水仙素-低渗-空气干燥法、Howell(1980)的方法(银染),以肾细胞作为材料,对澳洲鳗鲡 (Anguilla australis)的核型及银染进行了研究,结果显示:澳洲鳗鲡2n=38,核型公式为2n=16m 4sm 18t,NF =58,其染色体经快速银染后表明,澳洲鳗鲡的sm2其中一条染色体短臂末端出现银染位点。     

板栗基因组AFLP银染反应体系的建立

为了建立准确、高效、实用的板栗品种鉴别体系和方法,采用改进的CTAB—DNA提取方法,从板栗的嫩叶和老叶中提取获得总DNA。所得DNA样品的D260nm/D280nm值为1.7～1.9,琼脂糖凝胶上主带清晰、较少降解、样品纯度高、蛋白去除干净且获得率高。该体系使用操作简便、快捷、高效,适合于板栗DNA提取,所提取的DNA样品不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂,可被限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切,适合AFLP-PCR反应应用,得到清晰的指纹式样,适宜用作板栗品种鉴别的有效方法。     

香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用及正交优化

变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种高效鉴定微卫星分子标记的方法,广泛应用于种质鉴定、遗传连锁图谱构建及分子标记辅助育种等研究中.该方法由于操作繁琐,目前在食用菌领域的应用尚不广泛.以香菇为研究对象,建立变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测流程,并利用正交试验对检测流程中涉及的加样缓冲液与PCR反应液的体积比、95℃变性时间、置于冰上冷却时间、银染时间、银染后胶板去离子水洗时间等5个操作节点进行优化.结果表明,加样缓冲液与PCR反应液体积比为1∶2,95℃变性2～5 min,置于冰上冷却15～20 min,银染7 min,银染后胶板用去离子水洗5～10 s是正交试验的较优处理组合.试验建立了香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测操作规程,该操作规程具有成本低、效率高、易批量化操作等优点,对其他食用菌微卫星标记的应用具有重要的参考价值.     

Ag─NOR染色技术在豌豆染色体研究中的应用

本文以山西省栽培的硬粒豌豆品种为实验材料，对豌豆个体之间细胞核仁的数目Ａｇ—ＮＯＲ的位置变化，及在实验过程中所观察到的染色体分化程度进行了研究。结果表明，该品种在问期核可见到１—４个核仁，核仁的大小随染色体的浓缩程度发生变化，在不同类型的细胞中，银染核仁的面积分布不同，说明ＲＮＡ与蛋白质的比例有颇大的变动。试验还证明，染色体标本的制备技术对银染的分化程度有较大的影响，只有在适当的条件下才能促使银染的正反应。     

马铃薯晚疫病菌SSR扩增产物的检测方法比较

对39份马铃薯晚疫病菌菌株的SSR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳后,分别用银染、溴化乙锭(EB)染色并统计清晰特征条带。实验结果表明银染分辨率高,但检测到较多的杂带,EB染色的灵敏度虽比银染差,仍能获得高质量的目的条带;理论计算的SSR目的条带的质量范围是147.5～226.7 ng,都超过了2种染色方法需要的最小理论质量。实验结果和理论分析同时表明2种染色方法皆可用于马铃薯晚疫病群体多样性的研究。     

利用cDNA-AFLP分析铜胁迫下紫鸭跖草基因差异表达(英文)

[目的]探讨紫鸭趾草在铜胁迫下部分基因的生物学功能,从分子生物学的角度研究植物的耐铜机理,拟通过该研究解决铜污染问题。[方法]以具有铜离子富集能力的植物紫鸭跖草(Setcreasea purpurea Boom)为试验材料。通过cDNA-AFLP以及银染技术,获得90个差异表达片段,扩增得到其中17个片段,经纯化鉴定最终获得6个差异片段的序列,并对其进行了BLASTX比对。[结果]6条差异表达片段可能在铜离子对紫鸭趾草的胁迫中产生作用。其中编号为E5MG-3的差异序列与拟南芥mRNA序列(登录号为AAM62956.1)同源性达49%;E4MB-2与马铃薯mRNA序列(登录号为A5A7I7.1)同源性达53%;E6MG-1与芋mRNA序列(登录号AAO62313.1)同源性达65%。由此推测差异表达基因与细胞信号传导、抗氧化、新陈代谢以及蛋白质修饰等有关。[结论]该研究为进一步揭示紫鸭趾草铜胁迫响应的调控网络奠定基础。     

合作猪染色体的研究

采用微量外围血淋巴细胞培养以及Ag—NoRs染色、C—分带技术,对合作猪体细胞染色体的核型、核仁组成区以及结构异染色质进行了研究。结果表明,合作猪二倍体细胞染色体组成为38xy(公)或38xx(母),NF=64;银染阳性核仁组成区为1、2、3和4的频率分别为0、0.22、0.47和0.31,平均有3.02条染色体的核仁组成区被正染,Ag—NoRs联会的频率为1.29％;合作猪染色体的C—带类型趋向一致。     

微卫星PCR产物PAGE与银染改良方法

对湘西黄牛的2个微卫星座位IDVGA44、IDVGA27 PCR,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染。结果表明,在凝胶制备时,采用3%和8%两层凝胶结合的方法,能使电泳条带更加清晰,容易判读。按本文的方法配置试剂和染色,条带清晰,背景着色浅,染色效果理想。     

鲤鱼AFLP-银染体系的建立与优化

以鲤科鱼类建鲤为材料,对扩增片断长度多态性(AFLP)反应体系进行优化,建立适合于鲤鱼的AFLP反应体系.通过对AFLP常规流程中基因组DNA提取、酶切.连接、预扩、选扩及电泳-银染过程的优化,初步建立了适合鲤鱼的AFLP分析体系:采用鲤血细胞DNA提取;MseI和EcoRI 37 ℃双酶切5 h;预扩引物为E+A和M+C;选扩引物E+3与M+3浓度配比为1:8,为提高引物与模板的结合效率,选扩程序均采用touch-down程序;最后结合经典AgNO3-Na2CO3银染显色.通过优化的AFLP程序,从64对引物中筛选出8对多态性引物,为进一步的鲤鱼种质资源研究奠定基础.     

13/17罗伯逊易位纯合子、杂合子猪及3个引进品种核仁组成区(Ag-NORs)的多态性

对 1 3/ 1 7易位纯合子猪、杂合子猪及杜洛克、长白、约克夏猪的核仁组成区 ( Ag-NORs)的多态性作了研究 ,结果表明 ,杜洛克、约克夏猪 Ag-NORs定位于 8号和 1 0号染色体的次缢痕区 ,而 1 3/ 1 7易位纯合子猪、1 3/ 1 7易位纯合子猪×约克夏猪 F1代 Ag-NORs的遗传方式符合孟德尔定律 ;Ag-NORs在细胞间、个体间及品种间数目均有差异 ,而且品种差异显著大于品种内个体间差异。 1 3/ 1 7易位纯合子猪、杂合子猪 ,以及长白、杜洛克、约克夏猪 Ag-NORs均数分别为 1 .99、1 .98、2 .0 0、2 .0 5、2 .0 6,说明 Ag-NORs在品种、个体及细胞间具有多态性。这种多态性与猪的起源和杂交育种时所用亲本品种的血缘成分有关 ,因此可作为遗传标记 ,用以分析家畜的亲缘关系