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灰枣成熟叶片DNA提取及ISSR反应体系构建 总被引:4,自引:1,他引:3
针对枣DNA提取须用幼嫩叶片或组织培养幼苗这一限制相关实验顺利进行的问题,对常用的DNA提取方法CTAB法进行了改良,在破碎细胞之后,先加入2%β巯基乙醇,3%PVP,100mmol/LEDTA以去除成熟叶片细胞质中的多酚等次生物质,再加核裂解液CTAB以释放DNA。改良的CTAB法提取灰枣成熟叶片基因组DNA,分光光度法检测该法提取的样品DNA得率为55.1~79.1μg/g,D260nm/280nm为1.78~1.87;琼脂糖凝胶电泳检测的结果表明,该法提取的样品DNA分子量为23kb左右;该法提取的样品DNA可以被EcoRI和HindⅢ限制性内切酶进行切割。在此基础上构建了方便快捷的灰枣ISSR反应体系。 相似文献
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板栗SSR和RAPD技术体系的建立 总被引:6,自引:1,他引:6
主要从板栗DNA提取、PCR条件的优化等环节对SSR和RAPD的反应条件进行了优化。结果表明,采用PVP和β-巯基乙醇联合除酚,用多次洗涤和高盐相结合进行除糖提取高质量板栗基因组DNA,所获得的DNA完整,无降解,分子量在23kb以上,可扩增、可酶切,D260nm/D230nm在2.0以上,D260nm/D280nm为1.8~2.0,产率为40~300μgDNA/g叶组织,完全满足SSR、RAPD、AFLP等分子标记技术分析的需要。采用单因素对PCR反应体系中各个影响因素进行优化,结果表明对PCR结果影响最为明显的是退火温度和Mg2+浓度的变化。对退火温度和Mg2+浓度进行优化,确定RAPD的PCR反应体系Mg2+浓度为2.0mmol/LMgCl2,退火温度38℃;SSR反应体系Mg2+浓度为2.0mmol/L,退火温度56℃。建立了一套完善的适用于板栗的SSR和RAPD分析的稳定技术体系。 相似文献
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以牡丹的叶片为材料,通过对扩增长度多态性(AFLP)反应体系中几个关键参数进行优化,建立了牡丹的AFLP荧光反应体系,首次在牡丹DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验过程取的成功,得到了清晰的部分牡丹品种的指纹图谱.为牡丹品种指纹图谱的绘制、亲缘关系的研究等奠定基础. 相似文献
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适于AFLP分析用的桃成熟叶片DNA提取方法 总被引:10,自引:2,他引:8
以多个野生桃秋季成熟叶片为材料,采用改进CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究,并与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明,从野生桃成熟叶片提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均为1.8~2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的野生桃成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。 相似文献
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一种从果树成熟叶片提取DNA的方法 总被引:11,自引:1,他引:10
针对果树成熟叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,以8个果树树种的秋季成熟叶片为材料,采用改进的CTAB法对其基因组总DNA进行了提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和AFLP分析。结果表明,该方法从8种果树的成熟叶片中均能提取出基因组总DNA,且DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均在1.8~2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物组合为EcoRI-TA/MseI-CTT,EcoRI-TT/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的果树成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。 相似文献
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木瓜属植物AFLP分析体系的建立与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
以29个木瓜属品种为试材,研究该属植物基因组AFLP反应体系的建立。通过检测AFLP分析中的DNA提取、酶切及连接、预扩增和选择性扩增的结果,对影响AFLP分析的主要因子进行探讨,建立了木瓜属植物的AFLP分析体系,并利用该体系筛选出E-AAG+M-CAA、E-ACA+M-CAA、E-AAG+M-CAC、E-AAG+M-CAG、E-AAG+M-CAT、E-AAG+M-CTG、E-ACA+M-CTT和E-ACG+M-CTT共8对引物组合,对供试品种进行扩增,获得的条带清晰可辩,说明所建立的反应体系适合于该属植物进行AFLP分析。 相似文献
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以"贡水白柚"为试材,采用盐乙醚处理法、苯酚氯仿处理法、基本CTAB处理法3种DNA提取方法来处理"贡水白柚"基因组DNA,研究不同提取方法对DNA样品的产率、外观、酶切电泳等方面的影响。结果表明:用盐乙醚法所提DNA外观呈纯白色,冷冻沉淀为纤维状,效果最好;用苯酚氯仿法处理幼穗期柚叶片基因组提取DNA产率最高,DNA浓度达118ng/μL;EcoRⅠ酶切图谱用CTAB处理法和盐乙醚处理法效果均较好,苯酚氯仿处理法则拖尾严重,效果差;RAPD引物PCR扩增效果图表明,3种方法均能扩增出清晰条带,均适合于有关"贡水白柚"基因组的相关研究。 相似文献
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金坪矮垂栗是从普通实生板栗中选出的变异类型, 其自交后代出现直立和垂枝性状的分离近似3∶1, 直立性与垂枝性呈显、隐性基因关系。金坪矮垂栗自然授粉有性后代矮化性仍有保存, 可利用其作为栗的矮化育种材料。嫁接结果表明, 以金坪矮垂栗实生苗为砧嫁接良种板栗, 可实现板栗的矮化密植与丰产栽培。 相似文献
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菠萝DNA的提取及AFLP反应体系的建立 总被引:12,自引:2,他引:12
为了应用AFLP分子标记对菠萝种资源进行种质鉴定、分类及亲缘关系等方面的研究,最重要的是要获得高质量的DNA,菠萝叶片革质化程度较高,且纤维、多糖、多酚等次生代谢物质含量较多,严重干扰DNA的抽提或影响其后的AFLP双酶切及其扩增反应,本研究以菠萝叶片为材料,利用改良CTAB法得到了39个高质量的菠萝分类群的DNA基因组,并进行了AFLP分析,得到了条带清晰、多态性好的菠萝品种指纹图谱,这为菠萝基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究提供理论依据。 相似文献
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山葡萄基因组DNA提取及RAPD鉴定 总被引:4,自引:1,他引:3
以雌花山葡萄(73064)冷藏幼叶、香妃葡萄新鲜幼叶为试材,分别采用修改的CTAB法、高盐法、SDS法提取基因组DNA。结果表明,三种方法所提的DNA纯度及产率有差别,从综合结果看,以CTAB法为好,所得DNA不需经氯化艳梯度离心或柱层析,可直接用于RAPD分析。 相似文献