优球蛋白法纯化欧鳗免疫球蛋白

采用优球蛋白法与饱和硫酸铵分步盐析法纯化欧洲鳗鲡血清免疫球蛋白(Ig),利用SDSPAGE分析其纯度.试验结果显示:优球蛋白法纯化的欧鳗血清免疫球蛋白出现清晰2条带,纯度高于饱和硫酸铵分步纯化法;ELISA分析优球蛋白法纯化的欧鳗血清效价高于饱和硫酸铵纯化结果;Western-blot结果亦显示纯化的优球蛋白具有抗体免疫学活性.     

三七总皂甙对大黄鱼肾细胞生长及部分免疫相关基因表达的影响

本试验将三七总皂甙(PNS)体外作用于大黄鱼肾细胞,通过活细胞计数和荧光定量PCR检测,初步了解PNS对大黄鱼肾细胞生长及部分免疫相关因子表达的影响。结果显示,40~200μg/mL浓度的PNS对大黄鱼肾细胞生长无明显影响,但浓度达到1 mg/mL以上时,对细胞生长有负面影响;10~1 000μg/mL浓度的PNS对大黄鱼肾细胞Toll样受体5mRNA的表达有一定的上调作用,但对Toll样受体3的表达有一定的下调作用;PNS浓度为10~100μg/mL时对大黄鱼肾细胞碱性磷酸酶的表达无明显影响,但浓度达到1 000μg/mL时对该因子的表达有下调作用;PNS浓度为10μg/mL时对大黄鱼肾细胞溶菌酶的表达无明显影响,但浓度达到100μg/mL以上时对该因子的表达具有一定的下调作用。     

嗜水气单胞菌ZN1攻击鳗鲡后的组织病理观察

采用1/2半致死剂量的嗜水气单胞菌ZN1对鳗鲡进行腹腔注射,在第0 d、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d采集鳗鲡肝、脾、肾、肠,观察鳗鲡经嗜水气单胞菌活菌攻击后各脏器的组织病理变化及脏器的损伤修复情况。结果显示,嗜水气单胞菌活菌ZN1攻击后鳗鲡肝、肾、脾、肠等组织细胞均出现程度不同的病变,且持续时间长达14 d以上,同时血液中的血栓细胞急剧减少,甚至全部消失。上述结果表明嗜水气单胞菌攻击后可引发鳗鲡各脏器发生明显的病理变化,并提示在病原菌攻击引起鳗鲡血栓细胞的减少并恢复缓慢可能是嗜水气单胞菌导致宿主产生败血症状的重要病理机制。     

不同来源嗜水气单胞菌的抗菌素耐药性及耐药机制分析

分离、收集不同时期来源于俄罗斯及国内各地的40株嗜水气单胞菌,常规生理生化鉴定结果表明这些菌株均为嗜水气单胞菌。9种抗菌素药敏纸片对全部菌株的测定结果显示,菌株的耐药强度与原分离地是否使用抗菌素高度相关。质粒与菌株耐药相关性分析结果表明,12个具有1个以上多拷贝质粒的菌株中,有11株呈现高度耐药性,提示耐药性与多拷贝质粒存在相关性;但无质粒或仅有低拷贝质粒的菌株,其耐药性强弱与质粒无相关性。菌株耐药稳定性试验结果证明,4℃条件下长时间保存会降低菌株的抗性,而连续多次冻存、复苏传代对菌株的抗性无影响。     

Ⅱ耆水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物ISCOMs的研制

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质，并在pH2．5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区，经Mega-10裂解后与QuilA结合制备ISCOMMs，电镜下可观察到30～40nm的多面体的笼格状颗粒结构。经鳗鱼的免疫保护试验证实．ISCOMs组(每尾40～80μg)保护率高达100％，同剂量的溶血素 弗氏佐剂组可达62．5％，未加佐剂的溶血素只有50％。     

嗜水气单胞菌 β-hemA 重组菌的优化培养及其生长曲线的测定

用正交试验探讨温度、培养基、时间三个因素对嗜水气单胞菌β-hemA重组菌E.coliDH5α(PCB)基因产物表达量的影响,通过优化培养,选择最佳培养条件,显著提高了β的溶血素基因(β-hemolysisgene,β-hemA)产物的产量。实验结果表明:该重组菌株在100mlTSB(添加0.05%酵母浸提物,1.8μg/mlZnCl2),37℃培养30h收获,其毒素蛋白含量为3258μg,毒素溶血价为17.44hu/μg,而在LB(100ml)和营养肉汤(100ml)中最高蛋白量和溶血活性分别为1260μg,14hu/μg和1199μg,8.22hu/μg。所选择的三个因子中对毒素蛋白质含量影响最大的是培养基,其次是温度;而对溶血素影响最大的则是温度,其次为时间。最佳生长曲线测定结果表明,在培养基预热至37℃的情况下,PCB6h能进入对数期。     

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物ISCOMs的研制

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质,并在pH 2.5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区,经Mega-10裂解后与Quil A结合制备ISCOMs,电镜下可观察到30～40 nm的多面体的笼格状颗粒结构.经鳗鱼的免疫保护试验证实,ISCOMs组(每尾40～80 μg)保护率高达100%,同剂量的溶血素+弗氏佐剂组可达62.5%,未加佐剂的溶血素只有50%.     

关于几种海水鱼类的养殖技术之四大黄鱼瓣体虫病的诊治

大黄鱼病害以寄生虫病居多，时常并发细菌感染，若处理不当，则会造成大量经济损失。本文主要报道海水网箱养殖的大黄鱼受体外寄生虫侵害发病，通过实验室检查诊断为瓣体虫病，及时用锰酸钾等杀虫药处理，同时内服抗生素防止继发感染，取得良好的治疗效果。 一、病原与疫情： 瓣体虫病的病原为石斑瓣体虫（Ｐｅｔａｌｏｓｏｍａｅｐｉｎｅｐｈｅｌｉｓ），属于纤毛门、动片纲、腹口亚纲、管咽目、齿管科。虫体侧面观，背部隆起，腹部平坦，前部较薄，后部较厚；腹面观虫体为椭圆形或卵形，幼小的个体则近圆形。固定标本长约４５—ＳＯ卜ｍ，…     

表达PRRSV GP2a/GP2b、GP3、GP4、GP5和M蛋白重组腺病毒的构建

以PRRSV FJ-1a株为模板,采用RT-PCR法分别扩增出GP2a/GP2b-3、GP3、GP4、GP5和M蛋白基因片段,双酶切后插入穿梭质粒pDC316.利用AdMaxTM法,将5个重组穿梭质粒分别与腺病毒辅助质粒共转染293细胞,得到重组腺病毒Ad-GP2a/GP2b-3、Ad-GP3、Ad-GP4、Ad-GP5和Ad-M.重组腺病毒滴度为107.7～109.0TCID50·mL-1,而以Ad-GP5滴度最低,仅为107.7TCID50·mL-1.PCR检测第3、6、9代重组腺病毒稳定性,确证重组病毒均能稳定携带目的基因.对目的基因转录的RT-PCR鉴定结果显示,重组腺病毒分别感染293细胞后能转录产生目的基因mRNA.表达PRRSV主要囊膜蛋白基因重组腺病毒的获得,为进一步研制PRRSV基因工程疫苗,解析主要囊膜蛋白功能奠定基础.     

刺激隐核虫抑动抗原生物学信息及抗原特性分析

对刺激隐核虫抑动抗原基因进行生物学信息分析,利用抗原表位多肽制备了鼠源抗抑动抗原抗体,并研究其抗原特性.试验结果表明：利用表位串联多肽所制备的鼠源抗抑动抗原抗体包含有针对刺激隐核虫抑动抗原的特异性抗体,为刺激隐核虫单克隆抗体和疫苗的制备奠定了基础.