猪结合珠蛋白基因的克隆、原核表达及单克隆抗体制备

本研究的目的在于利用重组猪结合珠蛋白(Haptoglobin,Hp)制备特异性单克隆抗体.以梅山猪肝脏总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增猪hp基因,将其克隆到原核表达栽体pGEX-KG和pET-32a上,转化至E.coli BL21中,IPTG诱导下高效表达重组GST-Hp和HIS-Hp蛋白.用纯化的重组GST-Hp免疫BALB/c小鼠,用纯化的HIS-Hp作为包被抗原进行间接ELISA检测,通过淋巴细胞杂交瘤技术筛选阳性细胞株,制备单克隆抗体.结果表明筛选到2株高效分泌抗猪Hp单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3B4和3C8.Western-blot和间接ELISA检测均表明制备的单克隆抗体具有良好的特异性.     

夹心ELISA方法检测生肉混合物中的猪肉成分的研究

肉品掺假的鉴别是影响食品安全的一个重要问题。采用抗猪IgG-Fc单克隆抗体作为捕获抗体,以猪IgG作为检测标志物,建立了检测猪肉成分的夹心ELISA方法。单抗最佳包被浓度为1μg/mL,酶标抗体最佳浓度为1∶5 000稀释。结果混合物中猪肉掺杂仅为1%时,有明显反应。该方法具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。