猪结合珠蛋白基因的克隆、原核表达及单克隆抗体制备

本研究的目的在于利用重组猪结合珠蛋白(Haptoglobin,Hp)制备特异性单克隆抗体.以梅山猪肝脏总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增猪hp基因,将其克隆到原核表达栽体pGEX-KG和pET-32a上,转化至E.coli BL21中,IPTG诱导下高效表达重组GST-Hp和HIS-Hp蛋白.用纯化的重组GST-Hp免疫BALB/c小鼠,用纯化的HIS-Hp作为包被抗原进行间接ELISA检测,通过淋巴细胞杂交瘤技术筛选阳性细胞株,制备单克隆抗体.结果表明筛选到2株高效分泌抗猪Hp单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3B4和3C8.Western-blot和间接ELISA检测均表明制备的单克隆抗体具有良好的特异性.     

流产嗜性衣原体病诊断的研究进展

流产嗜性衣原体(Chamydophila abortus)属于衣原体科嗜衣原体属,过去称鹦鹉衣原体-1型(Chlamydia psittaci 1,Cps-1),是一种介于细菌和病毒之间的专性细胞内寄生的革兰阴性微生物.流产嗜性衣原体主要寄生于猪、牛、羊等多种动物生殖道黏膜表面的上皮细胞,造成生殖道黏膜受损,导致以母畜流产、死胎、弱胎,公畜睾丸炎、尿道炎、龟头炎、包皮炎等为特征的慢性接触性传染病.为了控制该病的发生,常需要大剂量、长时间使用抗生素,造成成本过高和畜产品兽药残留,影响了畜牧业的发展和人类的健康.另外,流产嗜性衣原体作为一种人兽共患病病原可造成孕妇流产.     

猪流产嗜性衣原体POMP90蛋白的原核表达及反应原性分析

设计特异性引物进行PCR扩增,获得猪流产嗜性衣原体CP/12株的pomp90基因,将其定向克隆到原核表达载体pGEX-KG中.阳性重组质粒转化原核表达宿主菌E. coli BL21,用IPTG进行诱导表达,获得高效表达的融合蛋白.采用WeSTrn-blot和间接ELISA检测表明纯化的重组蛋白具有良好的反应原性,初步选择其最佳包被浓度为1μg/mL.