供港活猪4种疫病抗体水平监测及免疫效果分析

为掌握广东惠州地区供港活猪主要疫病的免疫状况,我们对供港活猪主要疫病抗体水平作了一次跟踪监测,并对免疫效果进行了分析.2012-2014年,分5次共采取了900头供港猪血清,采用ELISA方法对猪瘟、猪繁殖与呼吸障碍综合征、伪狂犬病、0型口蹄疫的抗体水平进行检测.结果显示,猪瘟抗体免疫合格率在68.9％ ～78.3％之间,口蹄疫在67.2％～82.8％之间,免疫效果不理想;猪繁殖与呼吸障碍综合征抗体免疫合格率在73.9％～ 92.8％之间,伪狂犬病在86.7％ ～ 93.9％之间,免疫效果较理想.     

马鼻肺炎双重荧光定量 PCR 检测方法的建立与应用

【目的】建立快速、准确检测马疱疹病毒 1 型（EHV1）和 4 型（EHV4）的双重荧光定量 PCR 检 测方法。【方法】以 EHV1、EHV4 的全基因组序列为基础,针对糖蛋白 B（gB）基因的保守序列,分别设计 EHV1 与 EHV4 特异性引物和探针,筛选引物,优化反应条件,分型检测马疱疹病毒（EHV1、EHV4）。【结果】 检测到 EHV1、EHV4、EIV、EAV、EVJ 和 EIAV 标准毒株,EHV1、EHV4 为阳性结果,其余病毒为阴性结果; EHV1、EHV4 DNA 模板的最低检出限为 1.47×102 copies/μL;检测 64 份临床样本,阳性检出率为 14.06%,病 毒分离证实 100% 符合。【结论】双重荧光定量 PCR 检测方法可直接应用于检测并区分 EHV1、EHV4, 并可在 短时间内获得对 EHV1/EHV4 特异性及敏感性的检测结果。     

IBV S1蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

采用RT-PCR方法,以IBVM41毒株的S1基因为模板扩增出了大小为468bp的目的片段(命名为poly156S1),该片断保守性、抗原性较好。将获得的目的基因定向克隆到表达载体pET-32a-c(+)中,获得了重组质粒pET-32a-c(+)-poly156S1。将该重组质粒转入表达菌Origami(DE3)中,用IPTG进行诱导表达,获得了大小约为34KD的重组蛋白poly156S1。Western-blot证实该重组蛋白能与IBV阳性鸡血清发生特异性反应。用纯化好的重组蛋白poly156S1免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行单克隆抗体的制备,成功获得了针对M41S1蛋白的3株单克隆杂交瘤细胞8D2、8D6、10F9,其IgG亚类分别为IgG1、IgG2a、IgG2b,轻链均为κ型。按常规方法对各株单克隆杂交瘤细胞进行了小鼠腹水单抗的制备与纯化,并用以重组蛋白poly156S1为包被抗原的间接ELISA对纯化后的腹水单抗进行了效价测定,及其与重组蛋白poly156S1亲和力的分析。结果表明:腹水单抗8D2、8D6、10F9的ELISA效价分别达到1.78×218,1.37×221,1.31×216;单抗8D6与重组蛋白poly156S1的亲和力最高。Western-blot进一步证实单抗8D6与重组蛋白poly156S1具有良好的反应性。     

猪嗜淋巴疱疹病毒3型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

依据GenBank公布的猪嗜淋巴疱疹病毒3型(porcine lymphotropic herpesviruses 3,PLHV-3)DNA序列,设计特异性引物,优化反应条件,建立荧光定量PCR方法,并对方法的灵敏度、特异性和重复性进行试验。得出方法的线性范围为:8.2×101~8.2×107,灵敏度可达82个拷贝,方法的特异性高,只能检测pMD18-T/PLHV3重组质粒,另外5种对照病原均未检出;方法的重复性好,对不同浓度的pMD18-T/PLHV3重组质粒分别扩增6次,结果重复性好。使用建立的方法检测100份临床样品,同时与普通PCR方法比较,显示荧光定量PCR检出率比普通PCR高,具有较高的灵敏度和准确性。结果表明:建立的荧光定量PCR可用于PLHV-3的临床快速诊断。     

H5N1亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒双表达系统的构建及其在小鼠的免疫原性分析

高致病性禽流感严重制约着禽类产业链的健康发展,以H5N1为代表的高致病性禽流感病毒能够跨越种间障碍感染人,对公共卫生安全造成极大危害。而预防禽流感的传统疫苗主要是全病毒灭活苗,该类疫苗使用量大,灭活不全时易造成散毒,并给流行病学监测带来困难。研发更加安全、高效的新型疫苗势在必行。本研究选取H5N1亚型流感病毒的HA蛋白作为靶抗原,构建重组杆状病毒BV-G-H5N1-HA。重组病毒本身可刺激机体天然免疫反应,通过基因改造一方面能在真核细胞内大量表达靶抗原,同时可以将靶抗原展示在重组杆状病毒囊膜表面,兼具DNA疫苗和亚单位疫苗的安全性和有效性。小鼠试验结果表明,BV-G-H5N1-HA免疫组能产生较高水平的中和抗体、HI抗体,BV-G-H5N1-HA免疫组攻毒保护率达91.7%。以上数据表明,BV-G-H5N1-HA可以作为一种新型候选疫苗,为H5N1亚型高致病性禽流感的防控贡献力量,为其他亚型疫苗的研究提供参考。     

猪、鼠、羊补体C3d分子cDNA的克隆及序列分析

为比较不同动物的补体C3d基因序列,本研究参考已报道的人、鼠、牛的C3d基因序列设计引物,分别从小鼠、猪、羊的肝脏组织中扩增获得鼠、猪、羊的补体C3d基因.以鼠、猪、羊的肝脏中提取总RNA为模板,通过RT-PCR扩增出C3d分子的cDNA克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌,经酶切鉴定后进行序列测定,并利用生物信息学工具软件对3种C3d蛋白的理化和生物学性质进行分析.鼠C3d基因与人、猪、羊C3d基因的同源性分别为83%、82%、81%,牛和羊C3d基因的同源性为94%.鼠、猪、羊的补体C3d分子与受体CR2结合的功能区同源性很高,只有个别位置氨基酸发生了突变,可能具有相同的结构和功能.     

猪博卡病毒的基因分型

为了解猪博卡病毒(PBoV)的遗传进化规律,研究可行的PBoV基因分型方法,本研究利用Gen Bank中登录的29条PBoV和2条本实验室测得的全基因组序列信息,采用生物信息学软件进行基因组序列分析。结果显示,分别以NS1基因、NP1基因和VP1基因编码氨基酸构建的系统进化树,PBoV均被划分为3个基因群,但三种氨基酸序列绘制的进化树存在差异;基因群内各病毒株的氨基酸序列同源性较高,而各基因群之间病毒株的氨基酸序列同源性非常低,基因组结构差异较大。     

检疫害虫蜂房小甲虫研究进展

蜂房小甲虫是一种蜜蜂寄生虫,来源于非洲本土.在国外发生流行以来,对养蜂业造成重大损失.对蜂房小甲虫的生物学特性及形态特征、传播范围及方式、诊断、防治等方面作进行了概述,并探讨其检验检疫的意义,应尽快制定相应的检疫技术规范并加以实施,防止该害虫的传人.     

猪巨细胞病毒病

猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PC-MV)是由疱疹病毒科β疱疹病毒亚科巨细胞病毒属的一种[1].该病毒遍布全球[2],猪感染该病也是普遍存在,在北美、欧洲和日本,90％以上的猪群曾受到感染.对成年猪只通常只呈现隐性感染,而对3周龄以下仔猪常常诱发致命性的全身感染[3].     

猪嗜淋巴细胞疱疹病毒2型GD27株gB基因生物信息学分析

试验采用PCR方法扩增出猪嗜淋巴细胞疱疹病毒2型（porcine lymphotropic herpesviruses 2,PLHV-2）gB基因全序列,并进行测序,使用生物信息学软件对gB蛋白进行生物信息学分析和预测。结果显示,gB蛋白由876个氨基酸组成,分子式为C₄₅₀₀H₆₉₇₅N₁₁₉₉O₁₃₅₁S₄₀,分子质量为100.77 ku,等电点为6.45,不稳定系数为38.58;二级结构预测以无规则卷曲为主要结构,1-39位氨基酸为信号肽,761-780位氨基酸为跨膜区结构,具有多种功能位点,存在多处天然非规则结构蛋白;三级结构显示有一个具有溶解作用的环状构象。综合多种方法分析预测结果表明,gB基因存在多个B细胞线性抗原表位,可作为PLHV-2疫苗的候选抗原。