黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶的基因克隆和序列测定

黄海黄杆菌YS－9412－130具有稳定的分泌低温碱性蛋白酶的能力。将其染色体DNA用Sau3AⅠ部分酶切后，低熔点琼脂糖回收2－10Kb的DNA片段，用Klenow大片段酶半补齐，与用SalⅠ酶切且半补齐的质粒pUC19连续后，转化E.Coli.JM109，构建基因文库。且酪蛋白平板法和酶联免疫吸附（ELISA）的活性筛选方法从基因文库中筛选到一株产海洋低温碱性酶的阳性克隆（命名为pHH1）。序列测定分析表明，此重组质粒包含有长度为768bp低温碱性蛋白酶基因的完整的开放读码框架（ORF）和上游基因调控序列。此片段编码由256个氨基酸组成的酶，计算分子量为83000Dal。通过Southern杂交证实了此片段来自于黄海黄杆菌YS－9412－130基因组DNA。     

黄海黄杆菌YS-9412-130固定化细胞产酶技术

3种不同的包埋材料固定化YS－9412－130菌体细胞，进行半连续发酵。结果表明，用2.5%卡拉胶固定化细胞，产酶效率最高；添加明胶对产酶不利而添加豆饼粉与玉米粉后，酶活力有显著提高；卡拉胶固定化细胞发酵液中游离菌体浓度随发酵时间变化略有上升，总体水平较低。发酵液酶活随菌体浓度的增大而呈上升趋势；固定化细胞半连续发酵效率远高于游离细胞分批发酵的效率。     

响应面分析法优化α-环糊精的酶转化工艺

为获得较高的α-环糊精转化产率,采用单因素实验和响应面实验方法,筛选底物种类、底物浓度、加酶量、酶作用时间、作用温度和pH等多个单因素,对海洋芽孢杆菌Y112产的α-环糊精葡萄糖基转移酶产α-环糊精的条件进行了优化。然后利用Plackett-Burman实验筛选得到影响α-环糊精转化率的3个主要因素:底物浓度、温度和pH值。最终采用响应面分析法得到的最佳转化条件为马铃薯淀粉浓度为5%,加酶量200 U/g(淀粉),pH值为8.4,温度30℃,200 r/min反应6 h,α-环糊精转化率均值为28.67%,比优化前的产率提高了2.48倍。     

一株海洋过氧化氢酶高产菌的鉴定及产酶条件优化

对来自青岛近海海域底泥的一株产过氧化氢酶菌株YS0810进行形态学观察、16S rDNA序列同源性分析及生理生化特性的鉴定,在250 ml摇瓶中进行发酵产酶条件优化。初步确定该菌属于不动杆菌属Acinetobacter。发酵培养的最佳碳、氮源分别为蔗糖20 g/L和蛋白胨15 g/L,无机盐MgSO4·7H2O、NaCl、KH2PO4最佳浓度分别为0.9、5.0和1.0 g/L;菌株在培养基起始pH=7.0、4%接种量、50 ml装液量和25℃的条件下发酵24 h获得较高的酶产量。在最佳培养条件下酶产量为2469 U/ml,是优化前的5倍。     

产木聚糖酶菌株YS1069的产酶条件优化

为获得较高的木聚糖酶产量,采用单因素实验和响应面实验方法,筛选氮源、碳源、无机盐、接种量、装液量、Na2CO3、发酵温度、发酵时间多个单因素,对产木聚糖酶的芽孢杆菌YS1069的发酵培养基和发酵条件进行了优化.结果显示,豆饼粉25 g/L、麸皮40g/L、NaNO3 0.9 g/L、K2HPO43g/L、MgSO4·7H2O 0.6 g/L、接种量4％、装液量30 ml/250 ml(v/v)、Na2CO3添加量18 g/L、培养温度30℃、培养时间96 h时,酶活性达到最高.再通过Plackett-Burman设计对影响木聚糖酶产量的8个主要因素进行评价,确定Na2CO3浓度、麸皮浓度和MgSO4·7H2O浓度是影响产酶量的3个主要因素.利用中心组合设计及Design-Expert 8.05软件分析,获得了主要因素的最优条件,即Na2CO3浓度21.86g/L、麸皮浓度51.41 g/L、MgSO4·7H2O浓度0.59 g/L,实验最终酶活性比发酵优化前提高了5倍.     

海洋侧孢短芽孢杆菌Lh-1株所产多肽药物 R-1抗鸡新城疫病毒的研究

试验为了研究海洋侧孢短芽孢杆菌Lh-1株产生的新型抗菌药物R—1对新城疫病毒的抗病毒活性及抗病毒作用机理,通过抗菌药物R—1对病毒的直接作用试验、调节细胞免疫功能试验和鸡胚中抑制新城疫病毒增殖释放试验对该物质的抗病毒活性、感染动力学、毒性和可能的抗病毒机理进行了研究。结果表明：R-1的浓度为100mg／mL和50mg／mL时,体外与新城疫病毒作用3h杀灭率可分别达到94．51％、92．93％;使用R-1免疫鸡胚细胞后,对注入的新城疫病毒的作用有不同程度的抑制效果,最低发病率可以达到13．34％;在新城疫病毒侵入鸡胚细胞1h后注入100mg／mL R-1,病毒的杀灭率可以达到89．13％,并抑制了病毒在细胞内的增殖。     

海洋微生物制剂在水产养殖中的应用

我国是世界水产养殖大国。2003年水产养殖总量已达3029万t,占世界水产养殖总量的约70%。随着规模化、集约化、高密度养殖逐渐成为我国水产养殖业的发展主流,养殖用水随意排放,导致了养殖环境污染,各种病害问题日趋严重,影响和制约了水产养殖业的发展。开发利用海洋微生物资源研制的海洋微生物制剂在水产养殖业中的应用,对调整和改善养殖生态环境,促进水生动物健康生长,实现水产养殖业持续发展起到了举足轻重的作用。1海洋微生物及海洋微生物制剂海洋蕴藏着极其丰富的生物资源。海洋微生物在其特殊的生活环境中,形成独特的生理活性产物。相当…     

壳寡糖抗氧化性及对鲫鱼保鲜性能的研究

[目的]研究壳寡糖的抗氧化性及壳寡糖对冷藏鲫鱼保鲜性能的影响.[方法]以壳寡糖为原料,采用邻二氮菲-Fe2氧化法、DP-PH法等对壳寡糖的抗氧化性进行了测定,以pH、TVB-N及TBA为指标研究了壳寡糖对鲫鱼保鲜性能的影响.[结果]研究表明,1.5mg/ml壳寡糖溶液的还原能力相当于50 μg/ml阳性对照VC的还原能力;1 mg/ml壳寡糖溶液对羟自由基的清除率为45％,相当于100μg/ml阳性对照VC对羟自由基的清除率;4 mg/ml的壳寡糖溶液对DPPH自由基的清除率达到97.8％.新鲜鲫鱼在4℃冰箱冷藏条件下,壳寡糖溶液涂膜处理组和对照组在第8天时的TVB-N值分别为252.0和196.0 mg/kg;pH分别为7.73和6.69;TBA值分别为1.552和0.670.综合各项指标的变化,壳寡糖涂膜保鲜的鲫鱼货架期明显比对照组长,表明壳寡糖具有较好的抗氧化能力和保鲜性能.[结论]研究可为壳寡糖在更多领域更广泛的开发应用奠定基础.     

我国水产品加工科技现存的问题与发展方向

随着中国渔业产量的不断增加,水产品加工业也取得了突破性的进展,已形成冷冻冷藏、腌制、烟熏、干制、罐藏、调味休闲食品、鱼糜制品、鱼粉、鱼油、海藻食品、海藻化工、海洋保健食品、海洋药物、鱼皮制革及化妆品和工艺品等几十个产业门类,成为推动渔业生产可持续发展的重要动力。2003年中国水产加工量912.1万吨,位居世界首位。1我国水产品加工科技存在的问题改革开放20年来,我国水产加工业取得了快速的发展和巨大的成绩,但由于长期以来,水产加工业一直被认为是企业自身的发展行为,因而政府对水产加工业的科技投入极少,从而导致目前加工业…     

鳕碎肉酶解物清除羟自由基作用研究

通过测定鳕碎肉酶解物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从海洋蛋白酶YS-894、海洋蛋白酶YS-80、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶中,筛选出海洋蛋白酶YS-894作为酶解鳕碎肉制备具有较高清除羟自由基活性酶解物的水解酶;用正交试验L9(34)对该酶的水解条件进行优化,并确定了水解的最佳肉水比。最终工艺条件为40℃、酶解45 m in、pH 9.0、酶解质量分数0.25%、底物∶水=1∶3的条件下进行水解,水解物对羟自由基的清除效果较好,清除率为68.88%。