一株塞内卡病毒A全基因组序列测定与致病性分析

本研究旨在明确塞内卡病毒A（Senecavirus A，SVA）FJLY株的基因组特性及其与其他毒株的同源性关系，并了解SVA-FJLY株的致病性。以分离自福建省某养殖场中的一株SVA-FJLY株为研究对象，参照其原型毒株SVV-001（GenBank No.DQ641257.1）全基因组序列设计5对引物，通过RT-PCR扩增、测序、拼接，获得SVA-FJLY株全基因组序列并进行序列分析；并通过滴鼻攻毒3~4周龄仔猪。结果表明，SVA-FJLY株基因组全长7 275 bp（不包括PolyA），SVA-FJLY株基因组存在一个多聚蛋白、VP1蛋白和VP2蛋白。SVA-FJLY株与参考毒株之间的基因组一级结构有较高的相似性，与HeB01-2017株（MF967574.1）相似性最高，达98.5%；而与SVA原型毒株SVV-001株（DQ641257.1）的相似性较低，为93.9%。SVA-FJLY株与国内几个毒株属于同一个分支，与国内的HeB01-2017株亲缘关系最近，同时与国外Colombia-2016株（KX857728.1）的亲缘关系最近。通过动物试验发现试验组猪攻毒10 d后，试验组2/3发病，对照组3/3正常，未出现仔猪死亡。通过全基因组序列测定获得了SVA-FJLY株全基因组序列并进行序列分析，明确SVA-FJLY株的基因组特性及其与其他毒株的相似性关系，了解了SVA-FJLY株的致病性，为SVA的反向遗传学和疫苗的研制提供参考依据，同时也丰富了SVA的基因组信息数据库。     

ND-IBD二联灭活苗对100日龄种母鸡的免疫效果研究

本试验旨在研究鸡新城疫(Newcastle Disease,ND)-传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)(ND-IBD)二联灭活苗对种母鸡的免疫效果。选用100d种母鸡50只,随机选择25只皮下注射ND-IBD二联灭活疫苗作为免疫组,对照组注射灭菌生理盐水;采集血清检测种母鸡及各批次雏鸡的ND和IBD抗体水平;最后对各批次雏鸡进行攻毒保护试验。结果表明:(1)免疫组种母鸡在100d免疫接种ND-IBD二联灭活苗后,产生了较高的ND和IBD抗体;(2)免疫组和对照组子代ND和IBD抗体水平在20d内呈下降趋势,免疫组免后20d抗体水平高于对照组(P0.01);(3)对照组和免疫组的子代ND和IBD抗体水平在四个时间段逐渐降低,另外,免疫组在种母鸡免后120d,其对应的子代ND和IBD抗体水平分别在第四批次15d和10d,仍然处于合格线之上。结论:种母鸡接种ND-IBD二联灭活苗之后产生了较高的ND和IBD抗体水平,种母鸡得到了很好的免疫,并且其免疫保护力能够持续120d,同时也可以提高子代的母源抗体水平。     

抗菌肽NK-lysin生物信息学分析及其抑菌作用研究

为分析猪源抗菌肽NK-lysin的理化性质和蛋白结构,并研究猪源抗菌肽在小鼠体内的抑菌效果,以猪小肠组织cDNA为模板进行PCR扩增和测序,通过生物信息学相关软件和工具对其测序结果进行分析。试验选用60只小鼠,随机分为4组(预防组、细菌模型组、治疗组和对照组),设置不同的大肠杆菌和猪源抗菌肽给药方案。结果表明,猪源抗菌肽NK-lysin为稳定的,半衰期在大肠杆菌中(体内)长,与白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)和颗粒性蛋白B(Granzyme B,GZMB)具有相互作用;预防组和治疗组小鼠存活率分别为80.00%和86.67%。综上所述,猪源抗菌肽在小鼠体内安全且具有一定的抑菌作用。     

猪脾转移因子提高LaSota株鸡新城疫弱毒疫苗的免疫保护率

旨在了解猪脾转移因子（TF）对新城疫病毒（NDV）弱毒疫苗LaSota株的免疫增强效果及机制。本研究分别采用不同剂量（10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份） LaSota疫苗株单独（单独免疫组）、LaSota疫苗株与TF联合（联合免疫组）免疫SPF鸡,14 d后以NDV F₄₈E₉强毒攻毒,同时设立对照组（非免疫攻毒）和空白组（非免疫非攻毒）,并采用ELISA方法与蛋白质芯片技术分别测定外周血IL-4、IFN-γ与IL-12 P40浓度。结果显示,鸡免疫10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份时疫苗攻毒保护率和半数保护量（PD₅₀）如下：单独免疫组分别为100%、55%、0%、0%和0.000 8羽份,联合免疫组分别为100%、75%、0%、0%和0.000 5羽份,对照组和空白组死亡率分别为100%和0%。免疫10^-3羽份疫苗后,联合免疫组IL-4和IFN-γ含量均高于其他组,并于第7、14天差异极显著（P<0.01）;攻毒后,联合免疫组IL-4、IFN-γ和IL-12 P40含量均高于其他组,IL-4于第1、14天,IFN-γ于第1、3天,IL-12 P40于第1天差异极显著（P<0.01）。综上表明,TF可增强IFN-γ、IL-12介导的细胞免疫和IL-4介导的体液免疫,提高LaSota株弱毒疫苗的免疫保护率,降低疫苗PD₅₀;在抵抗NDV F₄₈E₉强毒攻击时,联合免疫组的免疫保护率明显高于单独免疫组。     

猪圆环病毒病研究进展

猪圆环病毒病(PCVD)是由圆环病毒科一种体型极小、无包膜、呈环状排列的单链DNA病毒-猪圆环病毒2型(PCV2)引起的一种繁殖障碍和免疫抑制性疾病。文中总结PCVD的病原学特征、流行特点和诊断技术,并结合PCVD疫苗研究进展阐述PCVD的防治。     

采用PCR-RFLP法鉴别IBDV强毒BC6/85株和弱毒B87株

选取传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒力代表株BC6/85和弱毒力代表株B87为研究对象,根据VP2基因保守区设计一对通用引物和两个限制性内切酶位点,分别扩增两个毒株的VP2基因,然后进行BamHⅠ和PstⅠ酶切,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)分析酶切产物,并进行特异性、敏感性和重复性检测.结果表明:所设计的引物均可扩增两个毒株的VP2基因,大小约856 bp;经BamHⅠ和PstⅠ酶切后,BC6/85株的PCR产物被BamHⅠ和PstⅠ切出166、242和449 bp大小的3个片段,而B87株仅被PstⅠ切出242和615 bp大小的2个片段,且重复性好,特异性强.可见,采用PCR-RFLP分析IBDV VP2基因的方法操作简单,是一种能够快速鉴别IBDV强、弱毒株的可靠方法.