犬IFN-β的克隆及其序列分析

为了分析犬干扰素β(IFN-β)基因分子特征,预测其编码蛋白质的生物学功能,根据GenBank登录的犬IFN-β基因序列(FJ194477)设计合成特异性引物,通过PCR从外周血淋巴细胞总DNA中扩增IFN-β基因CDS区并克隆,应用生物信息学方法对犬IFN-β基因进行序列分析,并对其理化性质以及编码蛋白的二级结构、三级结构进行预测,构建分子系统进化树。结果表明:犬IFN-β基因编码区全长561 bp,共编码186个氨基酸,其分子式可表示为C_(1014)H_(1593)N_(263)O_(290)S_9,分子质量为22.40 ku;属于亲水性蛋白,理论等电点为5.98;含有丰富的二级结构,以α-螺旋(76.88%)和无规则卷曲(19.35%)为主,蛋白三级结构呈弯曲螺旋结构;与貉、威德尔海豹、金钱豹、家猫、宽吻海豚、人、鸡和绿头鸭相对应序列核苷酸序列同源性分别为98.4%、87.2%、85.2%、84.7%、79.0%、74.9%、43.9%和43.3%。说明犬与貉IFN-β核苷酸同源性最高,亲缘关系最近。     

鸭坦布苏病毒自然感染病例的诊断与病理学观察

为探究鸭坦布苏病毒(DTMUV)在贵州省鸭群的流行,对疑似DTMUV感染肉种鸭进行剖检,观察发病鸭内脏器官病变。取病鸭内脏组织进行RT-PCR检测确诊为DTMUV感染,将病料处理后接种BHK-21细胞,进行RT-PCR鉴定和透射电镜观察,确定分离到DTMUV,并将病料组织制作病理切片。结果显示,接种BHK-21出现明显CPE,电镜观察见病毒颗粒。将分离毒株的E基因经PCR扩增后测序,分析E基因氨基酸序列的同源性,发现所分离毒株与中国北京鸭源参考株同源性最高达99.39%,而与我国早期分离参考株(FX2010)同源性较低,将病料制作切片并进行HE染色,可见脑组织非化脓性脑炎,脾脏淋巴细胞减少,肝细胞变性坏死。本研究成功在贵州省分离到一株DTMUV,对其遗传进化进行分析,为探究贵州省养鸭地区DTMUV的感染和致病提供参考。     

铜与枯草芽孢杆菌协同对产蛋期种鹅生产性能、空肠组织发育和微生物菌群结构的影响

本试验通过研究铜与枯草芽孢杆菌协同对产蛋期种鹅空肠组织发育和微生物菌群结构的作用，探索在产蛋期种鹅日粮中添加枯草芽孢杆菌条件下铜的添加量。选择46周龄体况相近的产蛋期种鹅120只，随机分为6组，每组4个重复，每个重复5只（1公4母），采用2×3因子随机试验设计，枯草芽孢杆菌为125、250 mg/kg 2个添加水平，铜为2、4、6 mg/kg 3个添加水平。Ⅰ～Ⅲ组的铜添加水平为2、4、6 mg/kg,BS添加水平为125mg/kg,Ⅳ～Ⅵ组的铜添加水平为2、4、6mg/kg,BS添加水平为250mg/kg。试验期70 d。对种鹅空肠绒毛高度、隐窝深度进行测定，计算绒隐比；对种鹅盲肠微生物进行16S rDNA多样性检测。结果表明：铜与枯草芽孢杆菌协同对产蛋期种鹅的产蛋率、料蛋比及日采食量影响不显著，对空肠绒毛高度影响显著（P<0.05），对空肠隐窝深度、绒隐比影响极显著（P<0.01）。对样品Alpha多样性进行分析，试验样品的OTU统计覆盖率深度指数值Coverage,Ⅰ～Ⅵ组均大于0.999，表明试验样本中物种被测出的概率极高，样本结果代表了样本中微生物的真实情况。铜与...     

鸭胚成纤维细胞上坦布苏病毒受体蛋白的鉴定

[目的]拓展对坦布苏病毒受体的认知,为研究其在鸭体内的感染机制打下基础.[方法]取9日龄SPF鸭胚制备鸭胚成纤维细胞(DEF),待细胞长成单层后提取DEF膜蛋白,利用免疫共沉淀试验筛选出DEF膜蛋白中可与坦布苏病毒结合的蛋白,经病毒辅覆蛋白结合分析(VOPBA)验证后通过LC-MSMS质谱分析进行鉴定;同时人工合成鸭热休克蛋白70基因(HSP70)序列的开放阅读框(1905 bp),构建重组质粒pET32a-HSP70并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,以重组蛋白免疫小鼠制备抗鸭HSP70血清,与DEF细胞共孵育后接种坦布苏病毒,并采用实时荧光定量PCR检测抗血清对病毒感染的抑制作用.[结果]DEF膜蛋白中分子量约70 kD的蛋白可与坦布苏病毒结合,经LC-MSMS质谱分析和序列比对可确定该蛋白即为鸭热休克蛋白70(HSP70).含重组质粒pET32a-HSP70的BL21(DE3)感受态细胞经IPTG诱导4 h后,SDS-PAGE检测发现在分子量约85 kD处出现目的蛋白条带,获得的重组鸭HSP70蛋白主要以包涵体形式进行表达,且能与His标签抗体发生特异性反应.以重组鸭HSP70蛋白免疫小鼠获得的抗鸭HSP70血清可封闭DEF细胞上的HSP70,而竞争性抑制坦布苏病毒感染.[结论]HSP70是坦布苏病毒感染DEF细胞的受体,可作为新的靶点用于抗坦布苏病毒药物设计.     

不同施氮量对夏玉米农田生态系统净碳效应的影响

为探究华北地区夏玉米低碳生产的氮肥管理措施,以典型夏玉米田为对象,设置了不施氮(N0)、施氮100 kg/hm²(N1)、施氮150 kg/hm² (N2)、施氮200 kg/hm² (N3)4个处理,通过土壤温室气体排放、农事投入间接碳排放和作物固碳综合评估了不同施氮水平对夏玉米农田生态系统净碳效应的影响。结果表明,农田土壤CO₂、N₂O排放随施氮量升高而升高,CH₄吸收量随施氮量的升高而下降,N1、N2和N3处理土壤温室气体总排放的碳当量分别较N0提高14.91%、24.19%、29.67%;氮肥投入贡献了较高的间接排放,达到135.27~270.55 kg/hm²;施氮促进了作物固碳,N0、N1、N2、N3净初级生产力固碳量分别为1965.56、3125.68、4345.55、4663.64 kg/hm²。综合系统碳流来看,各处理均表现为碳汇,净碳效应分别为258.33、1034.99、2032.82、2192.16 kg/hm²,碳可持续指数分别为0.15、0.50、0.88、0.89。200 kg/hm²施氮量下能够以相对较低的碳耗换取较高的固碳率,表现出较高的净碳效应,可推荐为氮素适宜投入量。     

A:L1型鸭源多杀性巴氏杆菌灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】制备鸭多杀性巴氏杆菌灭活疫苗,有效控制贵州省鸭多杀性巴氏杆菌发生和流行。【方法】以实验室分离保存的A：L1型多杀性巴氏杆菌地方流行株为菌种,通过涂板法测定该菌株生长曲线,并采用改良寇氏法计算该菌株对鸭的半数致死量（median lethal dose,LD₅₀）,将该菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后分别制备白油佐剂灭活疫苗和卡波姆佐剂灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行免疫雏鸭试验;通过攻毒保护试验评价比较两种疫苗的保护率,并对攻毒试验鸭肝脏、肺脏、脾脏进行病理组织学观察。【结果】A：L1型多杀性巴氏杆菌疫苗株培养至18 h到达峰值,活菌数可达1.0×10¹⁰ CFU/mL;LD₅₀为5 CFU;制备的两种疫苗安全性良好;攻毒保护试验结果显示,一免后卡波姆佐剂灭活疫苗免疫保护率可达62.5%,高于白油佐剂灭活疫苗（50.0%）及商品灭活疫苗（50.0%）。二免后卡波姆佐剂灭活疫苗优势更为明显,免疫保护率可达87.5%,高于白油佐剂灭活疫苗（75.0%）及商品灭活疫苗（62.5%）。病理组织学结果显示,一免后卡波姆佐剂灭活疫苗能对肺脏提供较好的保护效果,二免后在肝脏、肺脏和脾脏的保护效果上,卡波姆佐剂灭活疫苗组优势明显。【结论】利用贵州地区流行的A：L1型菌株所制备的卡波姆佐剂灭活疫苗免疫效果明显,能对贵州地区多杀性巴氏杆菌病的防控起到重要作用。     

H9N2亚型禽流感病毒对鸡的免疫抑制机制

通过评价H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)感染对于鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗免疫效力的影响,研究了H9N2 AIVs的免疫抑制机理。结果显示,H9N2 AIVs感染可降低鸡对鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗的抗体应答,但与对照组相比差异并不显著;而流式分析结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染可显著降低鸡外周血中CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的比率(P0.05);抗原特异性的T淋巴细胞增殖试验结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染鸡的外周血T淋巴细胞增殖活性显著下降(P0.05);另外,H9N2 AIV感染还导致鸡血清中细胞因子IFN-γ和IL-4应答水平的下降,其中IFN-γ的应答水平与对照组相比差异显著(P0.05)。说明H9N2 AIVs感染可抑制鸡的免疫应答,其中对细胞免疫应答的抑制更为明显。     

鸭坦布苏病毒病-H9亚型禽流感二联灭活疫苗免疫佐剂筛选

为筛选出理想的鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗免疫佐剂,将灭活的坦布苏病毒液和禽流感病毒(H9亚型)尿囊液分别与白油佐剂、卡波姆佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂制成抗原含量相同的TMUV-AIV二联灭活疫苗。应用阻断ELISA方法和血凝抑制方法测定免疫鸭血清中坦布苏病毒和禽流感病毒抗体,比较不同佐剂疫苗对试验鸭的免疫效力。结果表明,以白油作为佐剂的灭活疫苗组免疫效果最好,抗体产生快、抗体水平优于其他各组,免疫2周后60%(6/10)血清样品HI抗体可达1∶8以上,80%血清样品呈TMUV抗体阳性,是制备鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗的理想佐剂。     

抗原浓缩技术研究进展

动物疫病是危害养殖业发展的重要因素,而疫苗免疫又是目前防控动物疫病最有效的手段之一。为了提高兽用多联疫苗的免疫效力,去除杂质,减少临床上的免疫不良反应,需要对抗原进行浓缩。疫苗的抗原浓缩技术主要是通过物理或化学方法去除杂质以提高单位体积抗原含量,同时要防止抗原的免疫原性受到破坏,对整个浓缩条件要求较高,因此如何选择合适且高效的抗原浓缩方法尤为重要。文章对近年来抗原浓缩技术的研究及现状进行总结,旨在为选择抗原浓缩技术提供参考。     

平坝区鹅养殖场细菌感染情况调查

为平坝区鹅养殖户的细菌病防控提供参考，对贵州省平坝区鹅养殖场细菌感染情况进行调查，从发病鹅场采集76份鹅组织样品进行细菌的分离鉴定。结果表明：61份样品中分离出细菌94株，15份样品未分离出细菌，分离率80.3%。分离大肠杆菌41株，分离率最高，为43.6%；鸭疫里氏杆菌30株，分离率次之，为31.9%；沙门氏菌16株，分离率17.0%；金黄色葡萄球菌7株，分离率7.4%；未分离到巴氏杆菌。有33份样品为单一细菌感染，有28份样品同时检出2种以上细菌。提示大肠杆菌和鸭疫里氏杆菌是引起该地区鹅场发病的主要原因。同时混合感染占比36.8%，应加强对细菌病混合感染的监测与防控。