犬IFN-β的克隆及其序列分析

为了分析犬干扰素β(IFN-β)基因分子特征,预测其编码蛋白质的生物学功能,根据GenBank登录的犬IFN-β基因序列(FJ194477)设计合成特异性引物,通过PCR从外周血淋巴细胞总DNA中扩增IFN-β基因CDS区并克隆,应用生物信息学方法对犬IFN-β基因进行序列分析,并对其理化性质以及编码蛋白的二级结构、三级结构进行预测,构建分子系统进化树。结果表明:犬IFN-β基因编码区全长561 bp,共编码186个氨基酸,其分子式可表示为C_(1014)H_(1593)N_(263)O_(290)S_9,分子质量为22.40 ku;属于亲水性蛋白,理论等电点为5.98;含有丰富的二级结构,以α-螺旋(76.88%)和无规则卷曲(19.35%)为主,蛋白三级结构呈弯曲螺旋结构;与貉、威德尔海豹、金钱豹、家猫、宽吻海豚、人、鸡和绿头鸭相对应序列核苷酸序列同源性分别为98.4%、87.2%、85.2%、84.7%、79.0%、74.9%、43.9%和43.3%。说明犬与貉IFN-β核苷酸同源性最高,亲缘关系最近。     

犬细小病毒VP2蛋白的原核表达与纯化

为了研究犬细小病毒(canine parovirus,CPV)VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPVVP2基因插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件。最佳条件下的诱导产物经超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,重组质粒pET-VP2经双酶切鉴定分别获得大小为5 900bp左右的载体条带和1 755bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-VP2重组质粒;重组VP2蛋白的分子质量约为64ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0mmol/L IPTG、诱导5h条件下表达量最高,条带最亮;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,只在沉淀中出现了目的条带,而上清中并未出现相应条带,说明重组蛋白均以包涵体的形式存在;纯化后获得的重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在64ku处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-VP2。本试验通过对CPV VP2蛋白的原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的CPV VP2蛋白,为今后制备CPV VP2蛋白多克隆抗体及进一步研究该蛋白在对治疗犬细小病毒病中的临床应用价值提供了基础理论依据。     

Tripod并联机器人运动学分析与样机实验

对Tripod并联机器人进行了运动学分析,计算了机构自由度,采用矢量代数法和数值法求出了运动学位置逆解和位置正解。利用Jacobian矩阵的条件数对其进行了运动性能评价,分析了其可达工作空间。计算结果表明该机构具有优越的各向同性性能和广阔的可达工作空间。通过ADAMS和Matlab运动学仿真软件对正解和逆解分别进行了验证。仿真实验结果证明了所建模型的正确性。并对Tripod并联机器人样机进行了精确定位实验、直线插补实验和圆弧插补实验,实验证明机构所建数学模型的正确性。     

贵阳地区犬细小病毒VP2基因的克隆及遗传进化分析

为研究贵阳地区犬细小病毒（canine parvovirus,CPV）的流行基因型及其遗传进化情况,本试验对从贵阳市分离的10株CPV的VP2基因进行PCR扩增和克隆并进行序列分析。结果显示,分离的病毒能使F81猫肾细胞产生明显的细胞病变（CPE）,分离的10株病毒中,7株为CPV-2a亚型,3株为CPV-2c亚型,命名为GY-1~GY-10。10株CPV分离株与疫苗株VP2基因的同源性98.4%~99.4%,与其他国内外参考株的同源性为97.7%~99.9%。本试验首次报道贵阳市CPV的流行基因型为CPV-2a亚型并伴随CPV-2c亚型存在,对监测CPV遗传变异趋势及疫苗的研制具有重要意义。     

犬细小病毒VP2蛋白的原核表达与纯化

为了研究犬细小病毒（canine parovirus,CPV）VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPV VP2基因插入原核表达载体pET-32a（+）中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,在不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件。最佳条件下的诱导产物经超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,重组质粒pET-VP2经双酶切鉴定分别获得大小为5 900 bp左右的载体条带和1 755 bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-VP2重组质粒;重组VP2蛋白的分子质量约为64 ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0 mmol/L IPTG、诱导5 h条件下表达量最高,条带最亮;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,只在沉淀中出现了目的条带,而上清中并未出现相应条带,说明重组蛋白均以包涵体的形式存在;纯化后获得的重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在64 ku处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-VP2。本试验通过对CPV VP2蛋白的原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的CPV VP2蛋白,为今后制备CPV VP2蛋白多克隆抗体及进一步研究该蛋白在对治疗犬细小病毒病中的临床应用价值提供了基础理论依据。     

弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定与生物特性分析

为摸清患病青田鱼的致病原因,本研究对送检病鱼进行了微生物学检测,通过对从病鱼肝脏分离到的1株细菌进行形态学与培养特性观察、生理生化特征、16S rDNA分子序列分析鉴定并且进行药敏试验。结果:该分离株的形态特征、生化结果与标准弗氏柠檬酸杆菌一致;分离菌株的16S rDNA序列也与标准的弗氏柠檬酸杆菌高度相似,相似性为99%,说明本次分离的细菌为弗氏柠檬酸杆菌,命名为GZMT2013-CF;该分离菌对恩诺沙星、头孢噻呋、庆大霉素、链霉素、诺氟沙星、卡那霉素、左氧氟沙星7种抗生素高度敏感。试验结果为青田鱼的疾病诊断防治提供一定的理论参考。     

博落回提取物对雪峰乌骨鸡雏鸡生长性能和血清生化指标及肠道形态的影响

将1日龄雪峰乌骨鸡504只随机分为3组，每组设置8个重复(每个重复21只)，试验期42 d，其间，对照组饲喂基础日粮，试验组Ⅱ(组Ⅱ)、试验组Ⅲ(组Ⅲ)分别在基础日粮中添加666、1332 mg/kg博落回提取物(MCE)，以探究饲粮中添加MCE对育雏阶段雪峰乌骨鸡生长性能、血清生化指标及肠道形态的影响。结果表明：组Ⅱ和组Ⅲ雏鸡的体质量、日增质量和日采食量均极显著(P<0.01)高于对照组的，组Ⅱ的分别提高了7.2%、8.0%、3.4%，组Ⅲ的分别提高了9.5%、10.3%、5.3%；组Ⅱ和组Ⅲ的料重比相较于对照组的分别下降了4.0%和4.4%;43日龄时，组Ⅱ和组Ⅲ的血清尿素氮水平极显著(P<0.01)低于对照组的，分别降低了26.2%和27.5%，组Ⅲ的血清总蛋白水平显著(P<0.05)高于对照组和组Ⅱ的，分别提高了58.9%和41.3%；添加MCE极显著(P<0.01)提高了十二指肠的绒毛高度(VH)、绒毛高度与隐窝深度比值(VH/CD)，显著(P<0.05)降低了隐窝深度(CD)，组Ⅱ和组Ⅲ十二指肠的VH分别提高了12.6%、13.6%,CD分别下...