乳腺特异表达载体缺失片段的鉴定与修复

通过对pBC1中的乳腺特异表达启动子成分进行分析,鉴定了位于β酪蛋白启动子上游两个EcoRⅠ位点(-89~-94和-120~-125)之间的缺失片段,31bp的缺失使得该载体中的一个乳控盒元件(-112~-141)和一个乳腺因子识别序列(-92~-102)遭到破坏,并使得位于TATA框上游的所有启动子成分发生了位置改变。通过与山羊β酪蛋白启动子序列进行比较,设计并合成了缺失片段,经一系列的酶切和连接处理,使得该缺失得到了修复,修复后的载体具有所有乳蛋白表达需要的启动子调控原件。本试验结果为利用修复后的乳腺特异高效表达载体进行乳腺生物反应器的研究奠定了分子生物学基础。     

不同抗热应激添加剂对热应激小鼠精液品质的影响

为探讨抗热应激添加剂对热应激状态下小鼠精液品质的影响,选取年龄和健康状况相近的成年雄性鼠150只,按照常温、热应激、添加剂处理后热应激的方式进行分组试验,对各组精液品质等指标进行统计分析。结果表明,3组热应激添加剂在缓解热应激小鼠的精液品质的影响效果上存在显著差异,其中效果最好的为中药组,其次是电解质组,最后是维生素组。从Hsp70mRNA表达量上来看,抗热应激添加剂组明显高于常温对照组。但与热应激组比较,维生素组与电解质组表达量低,而中药组表达量高。     

犬脾特异性转移因子的生物学活性检测

采用冻融—透析法提取了免疫犬的特异性转移因子（STF）,以健康非免疫犬的非特异性转移因子（NSTF）为对照,对2种转移因子的理化学特性和免疫活性进行了检测与分析。结果表明,2种转移因子的理化学性质相似,STF含有的蛋白量低而核酸量高,而NSTF含有的蛋白量高而核酸量低。E-玫瑰花环试验表明,STF和NSTF均可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,增加E-玫瑰花环的形成率,表明TF具有免疫增强作用,其中STF的效果明显高于NSTF（P〈0.05）。为评价转移因子的免疫活性,首先利用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型,通过MTT法比较犬脾STF和NSTF对免疫抑制小鼠、生理盐水接种小鼠和正常小鼠的淋巴细胞转化的作用。结果表明犬STF、NSTF对免疫抑制小鼠的外周血淋巴细胞转化均具有明显的免疫增强作用,与PHA对照组相比差异极显著（P〈0.01）,其中STF免疫增强作用高于NSTF组,但两者不显著（P〉0.05）。生理盐水组和正常小鼠的外周血淋巴细胞转化表现与免疫抑制小鼠基本一致,犬脾STF、NSTF和PHA对生理盐水组和正常小鼠的淋巴细胞均表现出一定的免疫增强活性,而且犬脾STF、NSTF免疫增强作用显著高于PHA组（P〈0.01）。     

奶牛乳腺上皮细胞中Bta-miR-877靶基因的初步验证

利用高通量测序的方法筛选出在高脂奶牛和低脂奶牛中差异表达的miR-877和其预测的靶基因。通过生物信息学方法预测出edn1、ptgis可能是miR-877的靶基因,之后通过荧光定量检测miR-877以及其靶基因的表达量。结果显示,转染miR-877mimics组miR-877的相对表达量显著高于转染miR-877inhibitor组;靶基因的相对表达量,转染miR-877mimics组的edn1、ptgis基因表达水平均显著低于转染miR-877inhibitor组(P<0.01)。经GraphPad Prism6分析显示,edn1、ptgis基因的相对表达量与miR-877的表达量呈负相关,初步验证edn、ptgis是miR-877的靶基因。本试验为深入了解miR-877在乳脂质代谢调节中的作用提供依据,从而为生产实践提供一定的理论基础。     

思维导图在动物遗传学实验教学中的应用与探索

思维导图是一种革命性的思维工具,倍受国内外教育工作者的关注。将思维导图引入动物遗传学实验教学中,探讨了其在学生预习、教师课堂指导、考核方式等教学环节中的积极作用,通过实践表明在教学中引入思维导图不仅能够激发学生的学习兴趣,提高实验课成绩和课堂效率,更重要的是它在培养学生自学能力、创造思维与发散思维方面有巨大潜能。     

固原黄牛遗传背景及其体尺指数、肉用指数分析

旨在鉴定固原黄牛是相对独立的肉牛遗传资源，进一步描述其生长发育规律，为固原黄牛肉用种质资源的鉴定和选育提供一定的理论依据。本研究通过历史文献和调查研究分析固原黄牛的演变历史；使用GGP Bovine 100K基因芯片检测和公共数据库中下载包括固原黄牛在内共计13个品种、337个个体全基因组遗传变异数据，通过多维标度分析和构建邻接法系统发育树，分析固原黄牛遗传背景；以红安格斯牛×固原黄牛杂交牛为对照群体，测定与收集不同生长发育阶段固原黄牛的体重、体尺、背膘厚和眼肌面积等表型数据，参照《中国畜禽遗传资源志·牛志》公开发表的秦川牛和蒙古牛的表型数据，从表型描述挖掘固原黄牛相关指标的群体规律。结果表明，固原黄牛是固原本土黄牛与周边蒙古牛和秦川牛相互影响，经过长期选育形成的体型外貌一致的独特类群；现存固原黄牛群体在遗传结构上与邻近的秦川牛和晋南牛遗传关系较近，是相对独立的资源群体；与固原黄牛青年母牛相比较，固原黄牛成年母牛体躯指数提升了9.57%;用红安格斯牛杂交改良后，固原黄牛杂交牛母牛胸围指数和体躯指数分别提升了11.59%、12.70%,固原黄牛杂交牛公牛体长指数、胸围指数分别提升了15....     

创伤对小鼠热应激蛋白Bag家族基因表达的影响

以小鼠为研究对象,探讨创伤条件下热应激蛋白Bag家族基因在创伤愈合组织中的表达情况。选用巴比西小鼠,建立创伤应激模型,提取创伤愈合组织RNA,经Real-Time PCR检测其表达情况。结果表明:创伤应激时Bag家族基因表达全部下调,其中Bag3、Bag4下调差异显著(P<0.05);对Bag家族各基因进行聚类分析结果显示Bag3与Bag4可聚为一类。说明Bag家族基因在创伤愈合过程中的表达差异可能与细胞凋亡与炎症反应存在一定的联系。     

小鼠IGFBP-6基因shRNA的设计与筛选

胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)是胰岛素样生长因子结合蛋白家族(IGFBPs)的一员,IGFBP 6不同于IGFBP1 5,其与IGF-2的亲和力显著的优先于IGF-1,受到研究者的广泛关注.本研究在小鼠IGFBP-6基因mRNA的806、760和908 bp处找到潜在靶位点,设计3条shRNA干扰载体,并合成DNA Oligo,体外退火成双链DNA,插入pGU6/GFP/Neo载体,获得3条针对目的基因不同靶序列的干扰载体,瞬时转染NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞48 h后,利用流式细胞技术分选收集转染重组载体的细胞,提取细胞总RNA和蛋白质,实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法分别检测目的基因mRNA水平,蛋白水平对IGFBP-6的表达.结果表明,IGFBP-6(IGFBP-6,806-826)表现出了最高的干扰效率,转染效率为(79.2±2.3)％时,mRNA水平的沉默效率达(68.9±12.2)％,(P＜0.05);蛋白质水平的沉默效率达(46.7±11.3)％,(P＜0.05).本试验为研究IGFBP-6基因对细胞增殖的作用和体内生物学功能奠定了基础.     

PDGFRA基因对牛未成熟支持细胞体外增殖的影响

为了解血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)对牛睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)体外增殖的影响,以新生牛的睾丸组织(1 d)为研究材料,利用两步酶消化法和差速培养法分离和纯化睾丸SCs,选择标志基因检测的方法对SCs进行鉴定。利用PCR法检测PDGFRA基因在SCs中的表达,构建shRNA干扰载体转染SCs,利用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测该基因的表达量,采用MTS法检测细胞增殖。结果表明:成功分离纯化了SCs,检测到PDGFRA基因在SCs中表达,成功构建了PDGFRA基因的shRNA载体。随PDGFRA基因表达水平降低,细胞增殖减慢。该结果可为更好地了解PDGFRA在雄性动物精子发生和生殖器官发育过程中发挥作用的机制奠定基础。     

FDFT1基因shRNA和过表达载体的构建及在牛胎儿成纤维细胞中的验证

构建了带有绿色荧光标记的法尼基二磷酸法尼基转移酶1(farnesyl-diphosphate farnesyltransferase 1,FDFT1)基因shRNA干扰载体以及过表达载体,将其转染牛胎儿成纤维细胞(bovine fetal fibroblasts,BFF),采用荧光定量PCR和Western blot的方法,检测FDFT1基因mRNA和蛋白的表达水平,在细胞水平验证了shRNA干扰载体的干扰效率和过表达载体的有效性。结果显示:shRNA组FDFT1-Bos-520的FDFT1基因mRNA表达水平降低至shRNA NC组的40.7%(P0.01),蛋白质表达水平降低至shRNA NC组的39.61%(P0.01);而FDFT1基因pBI-CMV3-FDFT1过表达组FDFT1基因mRNA的表达水平为pBI-CMV3空载体组的137.9倍(P0.01),蛋白表达水平升高至空载体组的2.34倍(P0.01)。本试验通过荧光定量PCR和Western blot的检测方法验证了FDFT1基因过表达载体及干扰载体转染BFF后,FDFT1基因表达量的变化,为进一步研究FDFT1基因对胆固醇代谢和脂质代谢的影响和作用机制提供了实验材料及分子依据。