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旨在探究 circADAMTS16在牛不同组织和前体脂肪细胞中的表达水平及其对牛脂肪细胞分化的影响，为进一步研究circRNA在细胞分化和脂肪组织发育过程中的调控作用提供依据。采用组织块法分离培养牛原代前体脂肪细胞并诱导分化，模拟牛脂肪组织生长发育过程；通过qRT-PCR检测 circADAMTS16在牛不同组织（心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脂肪）和脂肪细胞分化不同阶段（0 d、2 d、4 d、8 d、10 d）的表达水平；构建 circADAMTS16的过表达载体（pCD2.1- circADAMTS16），设计合成 circADAMTS16的小干扰RNA （si- circADAMTS16），采用（Lipofectamine3000）转染试剂将pCD2.1- circADAMTS16和si- circADAMTS16转染牛前体脂肪细胞，利用qRT-PCR法检测转染效果，同时检测脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα和 C/EBPβ的表达量变化，并进行油红O染色，综合分析干扰和过表达 circADAMTS16对牛脂肪细胞分化的影响。结果如下：①qRT-PCR检测结果表明 circADAMTS16在心脏中表达量最高，肝脏次之，脾最低；②在牛原代前体脂肪细胞分化过程中， circADAMTS16在第2天显著高表达，随后逐渐降低，在第8天时达到最低。③在牛前体脂肪细胞中过表达circADAMTST16后，脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ的表达量显著下降；油红O染色结果显示，过表达后脂滴形成数量明显少于对照组；而干扰 circADAMTS16表达后，脂肪分化标志基因PPARγ和C/EBPα表达量显著上升。综上所述， circADAMTS16对牛原代前体脂肪细胞的分化过程具有显著的调控作用，过表达 circADAMTST16可抑制牛原代前体脂肪细胞分化进程，而干扰 circADAMTS16表达可以促进牛原代前体脂肪细胞分化进程，探明 circADAMTS16对牛原代前体脂肪细胞分化的具体调控作用。 相似文献
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PLIN1（Perilipin1）基因是调控脂类代谢的“分子开关”，其编码的脂滴包被蛋白是脂滴表面含量最丰富的蛋白，在脂肪沉积中起关键作用。采用RT-PCR方法扩增牛PLIN1基因编码区序列，利用组织块法和消化法分离培养牛前体脂肪细胞，进一步利用qPCR技术检测PLIN1在牛皮下前体脂肪细胞诱导分化过程中（0、2、4、6、10 d）mRNA的相对表达水平。结果表明，牛PLIN1基因CDS区长为1 551 bp，共编码517个氨基酸；细胞时序表达结果显示，诱导分化的第0天PLIN1不表达，随着分化时间的推移，其表达量呈上升趋势，与分化的第2天相比，在第6天和第10天表达量上升最快， PPARγ在分化的第0天有少量表达，表达趋势与PLIN1一致，在第6天和第10天显著升高。表明PLIN1在牛脂肪组织生成过程中起重要作用，在前体脂肪细胞分化阶段依赖于 PPARγ的表达而表达。 相似文献
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旨在鉴定固原黄牛是相对独立的肉牛遗传资源，进一步描述其生长发育规律，为固原黄牛肉用种质资源的鉴定和选育提供一定的理论依据。本研究通过历史文献和调查研究分析固原黄牛的演变历史；使用GGP Bovine 100K基因芯片检测和公共数据库中下载包括固原黄牛在内共计13个品种、337个个体全基因组遗传变异数据，通过多维标度分析和构建邻接法系统发育树，分析固原黄牛遗传背景；以红安格斯牛×固原黄牛杂交牛为对照群体，测定与收集不同生长发育阶段固原黄牛的体重、体尺、背膘厚和眼肌面积等表型数据，参照《中国畜禽遗传资源志·牛志》公开发表的秦川牛和蒙古牛的表型数据，从表型描述挖掘固原黄牛相关指标的群体规律。结果表明，固原黄牛是固原本土黄牛与周边蒙古牛和秦川牛相互影响，经过长期选育形成的体型外貌一致的独特类群；现存固原黄牛群体在遗传结构上与邻近的秦川牛和晋南牛遗传关系较近，是相对独立的资源群体；与固原黄牛青年母牛相比较，固原黄牛成年母牛体躯指数提升了9.57%;用红安格斯牛杂交改良后，固原黄牛杂交牛母牛胸围指数和体躯指数分别提升了11.59%、12.70%,固原黄牛杂交牛公牛体长指数、胸围指数分别提升了15.... 相似文献
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旨在鉴定非编码RNA circNMT1,明确其组织和细胞的表达模式,以及探究过表达circNMT1对脂肪细胞分化的影响。本试验以30月龄中国沼泽水牛(信阳水牛,n=3)的心、肝、脾、肺、肾、背最长肌、背部皮下脂肪组织和前体脂肪细胞以及3T3-L1细胞为试验材料。通过半定量PCR和实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,qRT-PCR)技术对circNMT1进行鉴定、细胞定位并明确其时空表达模式。进一步分别将其过表达到3T3-L1和水牛前体脂肪细胞中,利用形态学方法及定量方法检测过表达后脂滴累积情况,同时采用qRT-PCR检测脂肪标志基因相对表达水平的变化。结果表明,circNMT1是真实存在且稳定表达的circRNA,在水牛前体脂肪细胞的细胞核和细胞质中均表达,且在脂肪组织和成熟的脂肪细胞中高表达(P<0.001)。功能获得性试验表明,在3T3-L1细胞和水牛脂肪细胞,circNMT1显著促进脂肪细胞的脂滴积累,并且显著提高成脂标志基因PPARG、C/EBPα和FABP4的相对表达水平(P<0.01)。circNMT1可能是水牛脂肪细胞分化的正调控因子,这为circNMT1在水牛脂肪细胞中的调节作用提供了新见解。 相似文献
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本研究旨在探讨长链非编码RNA BCL2(lncRNA BCL2)对奶牛乳腺上皮细胞炎症及凋亡中的调控作用。利用RNAhybrid、Targetscan和miRwalk软件分析lncRNA BCL2海绵吸附的miRNAs及其所靶向的mRNAs,并对这些靶基因进行KEGG通路富集分析；采用qPCR和lncRNA超表达技术研究了lncRNA BCL2在乳腺组织和乳腺上皮细胞炎症中的表达情况及其对乳腺上皮细胞炎症和凋亡相关基因表达的影响。结果发现，与对照组相比，lncRNA BCL2在临床乳腺炎奶牛的乳腺组织和LPS诱导炎症的乳腺上皮细胞中的表达量均显著下调(P<0.05);在lncRNA BCL2超表达的情况下，乳腺上皮细胞内炎症因子IL-1β与IL-8及炎症信号通路关键基因NF-κB(p65/p50)的表达量均显著上调(P<0.05);细胞凋亡相关的CASP3和CASP9基因的表达显著下降(P<0.05),BCL2表达量显著上调(P<0.001),且BCL2与BAX比值大于2。该结果与生物信息学分析结果相符，表明lncRNA BCL2可能通过lncRNA BCL2... 相似文献
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