牛MSTN基因克隆及编码区E1-224-A〉C定点突变前后生物信息学对比分析

牛肌肉生长抑制素（Myostatin,MSTN）主要是骨骼肌生长发育的负调节因子,能够限制肌纤维的增粗增大,其前两个外显子共同编码N-端前肽,第三外显子编码C-端多肽。突变其前肽编码序列会阻止牛MSTN基因表达蛋白与相应受体的结合,导致MSTN功能失活,促进肌肉增值,但具体突变位点仍未确定。本研究设计特定的引物对牛MSTN基因编码区进行PCR扩增并进行了克隆及测序,并假定牛MSTN基因编码序列发生E1-224-A〉C点突变,通过生物信息学的方法,对牛MSTN基因突变前后编码产物的理化性质、结构与功能进行了对比分析,为MSTN基因结构与功能的研究奠定了基础。     

军牧1号白猪、杜洛克猪和藏猪的氟烷基因和酸肉基因多态性分布

为了研究军牧1号白猪、杜洛克猪和藏猪氟烷基因和酸肉基因的多态性分布情况,试验采用PCR-RFLP方法对61头军牧1号白猪、51头杜洛克猪和51头藏猪的氟烷基因和酸肉基因多态性进行了检测。结果表明:军牧1号白猪的氟烷基因表现为单一的NN型;杜洛克猪的氟烷基因表现为多态性,等位基因N的频率为0.196 1,基因型分布符合哈代-温伯格平衡(χ2=3.033 9,P=0.081 5);藏猪的氟烷基因表现为单一的nn型。3个猪种的酸肉基因均表现为单一的rn/rn型。     

军牧1号白猪、杜洛克猪和藏猪的H-FABP 和LPIN1基因多态性分布

为探索H-FABP和LPIN1基因在不同猪种中的多态性分布情况,应用PCR-RFLP技术检测了61头军牧1号白猪、51头杜洛克猪和51头藏猪H-FABP和LPIN1基因的多态性分布。结果发现,军牧1号白猪、杜洛克猪和藏猪在H-FABP基因的Hinf Ⅰ多态性位点上均表现为单一的HH型,而Hea Ⅲ多态性位点上均表现出多态性,等位基因D的基因频率分别为0.1475、0.2255和0.7647,Msp Ⅰ多态位点上,军牧1号白猪表现为单一的aa型,杜洛克猪和藏猪则表现为多态性,等位基因A的基因频率分别为0.6078和0.4609。在LPIN1基因的Eco88 Ⅰ多态性位点上,杜洛克猪表现为单一的AA型,军牧1号白猪和藏猪表现为多态性,等位基因A的基因频率分别为0.4262和0.2059;在Bsh1236 Ⅰ多态性位点上,杜洛克猪表现为单一的TT型,军牧1号白猪和藏猪则表现为多态性,等位基因T的基因频率分别为0.7459和0.2059。     

奶牛乳腺上皮细胞中Bta-miR-877靶基因的初步验证

利用高通量测序的方法筛选出在高脂奶牛和低脂奶牛中差异表达的miR-877和其预测的靶基因。通过生物信息学方法预测出edn1、ptgis可能是miR-877的靶基因,之后通过荧光定量检测miR-877以及其靶基因的表达量。结果显示,转染miR-877mimics组miR-877的相对表达量显著高于转染miR-877inhibitor组;靶基因的相对表达量,转染miR-877mimics组的edn1、ptgis基因表达水平均显著低于转染miR-877inhibitor组(P<0.01)。经GraphPad Prism6分析显示,edn1、ptgis基因的相对表达量与miR-877的表达量呈负相关,初步验证edn、ptgis是miR-877的靶基因。本试验为深入了解miR-877在乳脂质代谢调节中的作用提供依据,从而为生产实践提供一定的理论基础。     

西门塔尔牛CS基因多态性与肉质性状的相关性分析

以柠檬酸合成酶基因（citrate synthetase,CS）为候选基因,分析了该基因外显子3的遗传多态性与西门塔尔牛肉质性状的相关关系。选用95头西门塔尔牛为试验材料,采用PCR-RFLP的方法对该基因的外显子多态性进行检测,并利用SPSS软件对该外显子多态性与肉质性状的相关性进行分析。结果表明：CS基因第三外显子第206bp处存在G/A突变,该基因多态性与脂肪颜色呈显著相关,AA型显著高于BB型。对其他性状的影响差异不显著。通过研究CS基因外显子的多态性,为西门塔尔牛利用该基因的多态性进行分子育种提供了试验依据。     

牛Fas相关死亡功能域蛋白(FADD)研究进展

Fas相关死亡功能域蛋白(Fas-associated death domain protein,FADD)是Fas/FasL系统信号转导通路中介导细胞凋亡的胞浆死亡信号蛋白.近年来对牛FADD研究逐渐深入,已成功克隆出牛FADD基因,并构建pAcGF-N1-bFADD融合蛋白表达载体等.通过对小鼠等模式生物的研究发现,FADD在细胞质内能以磷酸化形式存在并参与细胞增殖和有丝分裂等过程.除此之外,FADD蛋白在细胞周期进程、胚胎发育、炎症反应、肿瘤发生等生物学活动中具有一定作用.本文将从FADD基因分析、蛋白修饰及生物学功能入手,揭示FADD作为多功能蛋白对细胞增殖与凋亡平衡起到重要作用,是机体维持正常发育和活动的关键蛋白.为肉牛在育种和实践应用中,提高肉质和胴体性状提供候选基因.     

CAPN3基因在草原红牛不同组织中的表达差异

钙激活中性蛋白酶（CAPN3）参与哺乳动物体内多种重要的生理生化过程,但是有关它的确切生理功能和作用机制研究较少。本研究采用实时荧光定量PCR技术检测CAPN3基因在草原红牛多种组织中的表达水平差异情况。试验结果表明,CAPN3基因在所检测草原红牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、瘤胃和背最长肌8种组织中均有表达,且在不同组织中的表达水平有所不同。草原红牛脾脏中的CAPN3基因表达量显著高于其他组织,十二指肠和瘤胃中的CAPN3基因表达量显著高于心脏、肝脏、肺脏、肾脏和背最长肌。本试验为肉牛肉质性状的改良提供了分子遗传学依据,并为深入研究草原红牛体内CAPN3基因的生物学作用及作用机制奠定了基础。     

感染禽流感病毒SPF鸡与SPF鸡心脏和肺脏全基因组DNA甲基化差异分析

为研究禽流感病毒感染对宿主全基因组甲基化的影响,本试验使用荧光甲基化敏感扩增片段多态性方法(fluorescent labeled methylation sensitive amplified polymorphism,F-MSAP)检测了SPF鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气管上段、气管下段、胸腺、法氏囊9个不同组织,和感染A/Goose/Guangdong/1/96,H5N1,A/Duck/Anhui/1/2006(安徽),H5N1 2株禽流感病毒SPF鸡心脏和肺脏2种组织全基因组甲基化在CCGG位点的CC碱基对甲基化状态,并分别对比了2组感染试验组与SPF对照组全基因组甲基化差异.结果显示,SPF对照组的甲基化程度,9种组织的总甲基化比率均在53％左右,其中气管上段最低(50.00％),肝脏最高(57.33％).在心脏中,2个感染组样品内甲基化比率、外甲基化比率和总甲基化比率均高于SPF鸡对照组;而在肺脏中,广东株感染组各甲基化比率均低于对照组,安徽株感染组均高于对照组.本研究初步揭示了禽流感病毒感染过程中H5N1对宿主(鸡)不同组织全基因组甲基化水平的影响,为后续家禽抗病性状的分子机制研究提供了理论依据.     

草原红牛二酞甘油酞基转移酶2（DGAT2）基因的多态性及与泌乳性状关联性分析

为研究草原红牛二酞甘油酞基转移酶2（DGAT2）的多态性及与泌乳性状相关性,采用PCR-RFLP方法检测DGAT2基因的遗传多态性。结果检测到AA、AB和BB 3种基因型,统计分析表明该多态位点与草原红牛乳中脂肪和干物质含量呈显著相关,脂肪：AA型极显著高于AB型和BB型（P〈0.01）,AB型和BB型之间差异不显著（P〉0.05）;干物质：AA型显著高于AB型（P〈0.05）,极显著高于BB型（P〈0.01）,而AB型又显著高于BB型（P〈0.05）;其他泌乳性状的基因型间差异不显著（P〉0.05）。此结果提示,DGAT2基因对草原红牛乳中脂肪和干物质含量具有较大的遗传效应,可以初步推断DGAT2是控制这些性状的众多基因之一,可能是影响草原红牛乳中脂肪和干物质含量的一个主效基因或与主效基因相连锁,可作为选育草原红牛低脂及高干物质奶牛的分子标记,用于标记辅助选择意义重大。     

小鼠睾丸支持细胞和胰岛共培养的研究

在成功分离睾丸支持细胞和胰岛的基础上,以小鼠睾丸支持细胞作为饲养层与胰岛进行共培养,通过形态学方法和胰岛素荧光免疫测定法观察单独培养和共同培养条件下胰岛的生长特性及胰岛素分泌功能。结果表明,睾丸支持细胞能够为胰岛提供良好的生长微环境,促进胰岛增殖,显著延长体外培养条件下胰岛的生存期限,共培养19d后胰岛的存活率依然在90％以上。在功能上,共培养组胰岛的胰岛素分泌水平从第7天开始就显著高于单独培养组（P〈0．01）,培养15d后2个共培养组的胰岛素刺激指数分别为2．13&#177;0．13和2．58&#177;0．11,表明睾丸支持细胞饲养层能保持胰岛素高分泌水平和良好的糖刺激反应性,是一种比较理想的胰岛体外长期培养方法。