试析加强林业育苗技术管理的具体措施

本文首先对林业育苗几种常见技术做了简单介绍,然后针对林业育苗技术目前普遍存在的问题展开了探讨,由此提出了几点关于加强林业育苗技术管理的措施。     

草原红牛和中国荷斯坦牛肌肉组织SSH文库的构建及初步分析

利用抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)方法构建了中国草原红牛与中国荷斯坦牛背最长肌差异表达消减c DNA文库,共获得859个差异表达克隆,对全文库进行了测序并与Gen Bank数据库进行比对分析。结果表明:共获得789个新ESTs,84个未知功能蛋白基因,356个已知功能蛋白基因。在已知功能蛋白基因中,表达上调的基因有123个,表达下调的基因有233个。差异表达基因可能与肉质性状有关,可以作为肉质性状的候选基因进行深入研究。     

PDGFRA基因对牛未成熟支持细胞体外增殖的影响

为了解血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)对牛睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)体外增殖的影响,以新生牛的睾丸组织(1 d)为研究材料,利用两步酶消化法和差速培养法分离和纯化睾丸SCs,选择标志基因检测的方法对SCs进行鉴定。利用PCR法检测PDGFRA基因在SCs中的表达,构建shRNA干扰载体转染SCs,利用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测该基因的表达量,采用MTS法检测细胞增殖。结果表明:成功分离纯化了SCs,检测到PDGFRA基因在SCs中表达,成功构建了PDGFRA基因的shRNA载体。随PDGFRA基因表达水平降低,细胞增殖减慢。该结果可为更好地了解PDGFRA在雄性动物精子发生和生殖器官发育过程中发挥作用的机制奠定基础。     

FDFT1基因shRNA和过表达载体的构建及在牛胎儿成纤维细胞中的验证

构建了带有绿色荧光标记的法尼基二磷酸法尼基转移酶1(farnesyl-diphosphate farnesyltransferase 1,FDFT1)基因shRNA干扰载体以及过表达载体,将其转染牛胎儿成纤维细胞(bovine fetal fibroblasts,BFF),采用荧光定量PCR和Western blot的方法,检测FDFT1基因mRNA和蛋白的表达水平,在细胞水平验证了shRNA干扰载体的干扰效率和过表达载体的有效性。结果显示:shRNA组FDFT1-Bos-520的FDFT1基因mRNA表达水平降低至shRNA NC组的40.7%(P0.01),蛋白质表达水平降低至shRNA NC组的39.61%(P0.01);而FDFT1基因pBI-CMV3-FDFT1过表达组FDFT1基因mRNA的表达水平为pBI-CMV3空载体组的137.9倍(P0.01),蛋白表达水平升高至空载体组的2.34倍(P0.01)。本试验通过荧光定量PCR和Western blot的检测方法验证了FDFT1基因过表达载体及干扰载体转染BFF后,FDFT1基因表达量的变化,为进一步研究FDFT1基因对胆固醇代谢和脂质代谢的影响和作用机制提供了实验材料及分子依据。