不同抗热应激添加剂对热应激小鼠精液品质的影响

为探讨抗热应激添加剂对热应激状态下小鼠精液品质的影响,选取年龄和健康状况相近的成年雄性鼠150只,按照常温、热应激、添加剂处理后热应激的方式进行分组试验,对各组精液品质等指标进行统计分析。结果表明,3组热应激添加剂在缓解热应激小鼠的精液品质的影响效果上存在显著差异,其中效果最好的为中药组,其次是电解质组,最后是维生素组。从Hsp70mRNA表达量上来看,抗热应激添加剂组明显高于常温对照组。但与热应激组比较,维生素组与电解质组表达量低,而中药组表达量高。     

犬脾特异性转移因子的生物学活性检测

采用冻融—透析法提取了免疫犬的特异性转移因子（STF）,以健康非免疫犬的非特异性转移因子（NSTF）为对照,对2种转移因子的理化学特性和免疫活性进行了检测与分析。结果表明,2种转移因子的理化学性质相似,STF含有的蛋白量低而核酸量高,而NSTF含有的蛋白量高而核酸量低。E-玫瑰花环试验表明,STF和NSTF均可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,增加E-玫瑰花环的形成率,表明TF具有免疫增强作用,其中STF的效果明显高于NSTF（P〈0.05）。为评价转移因子的免疫活性,首先利用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型,通过MTT法比较犬脾STF和NSTF对免疫抑制小鼠、生理盐水接种小鼠和正常小鼠的淋巴细胞转化的作用。结果表明犬STF、NSTF对免疫抑制小鼠的外周血淋巴细胞转化均具有明显的免疫增强作用,与PHA对照组相比差异极显著（P〈0.01）,其中STF免疫增强作用高于NSTF组,但两者不显著（P〉0.05）。生理盐水组和正常小鼠的外周血淋巴细胞转化表现与免疫抑制小鼠基本一致,犬脾STF、NSTF和PHA对生理盐水组和正常小鼠的淋巴细胞均表现出一定的免疫增强活性,而且犬脾STF、NSTF免疫增强作用显著高于PHA组（P〈0.01）。     

思维导图在动物遗传学实验教学中的应用与探索

思维导图是一种革命性的思维工具,倍受国内外教育工作者的关注。将思维导图引入动物遗传学实验教学中,探讨了其在学生预习、教师课堂指导、考核方式等教学环节中的积极作用,通过实践表明在教学中引入思维导图不仅能够激发学生的学习兴趣,提高实验课成绩和课堂效率,更重要的是它在培养学生自学能力、创造思维与发散思维方面有巨大潜能。     

猪胚胎冷冻技术的研究历程与未来展望

本文论述了近年来国内外猪胚胎冷冻技术的研究历程,分析了玻璃化冷冻技术在猪胚胎冷冻实际应用中存在的问题。结合发现的问题和最新的研究进展,从玻璃化冷冻剂的改良、玻璃化冷冻流程的优化、玻璃化冷冻与多组学研究等3个方面对猪胚胎冷冻技术的研究进行展望,以期为猪胚胎冷冻技术的创新提供理论依据。     

GHRP-6温敏型凝胶的制备及其对小鼠生长的影响

采用开环聚合法合成PLGA—PEG-PLGA共聚物,制备GHRP-6温度敏感型缓释凝胶并对其体外释药和对小鼠生长的影响进行研究。以PLGA—PEpPLGA为载体材料制备GHRP一6缓释凝胶制剂,采用BCA法测定体外释放度,并对体外释放数据用Korsmeyer-Peppas方程进行拟合;分别对分组小鼠皮下注射GHRP-6凝胶（2．0g／L）、GH—RP-6（2．0g／L）、空胶和生理盐水,隔周称重。结果表明合成产物符合PLGA—PEG-PLGA共聚物的特征,质量分数为15％、20％、30％的共聚物水溶液的胶凝化温度在32～37℃;GHRP-6在浓度为15％、20％、25％共聚物中释放出95％以上的药物分别需要16、18、20d,其释放曲线均符合Korsmeyer-Peppas方程模型,且具有良好的相关性;各组小鼠在注射35d后,GHRP-6凝胶组的累积增重分别比生理盐水组、空胶组、GHRP-6组高45．18％（P〈0．01）,39．090．4（P〈0．01）,21．80％（P〈0．01）。由此表明GHRP一6在凝胶中的释放达到预期要求,且对小鼠的生长有显著的促进作用,因此GHRP-6的PLGA—PEGPLGA凝胶有望开发成为一种长效促生长的注射制剂。     

小鼠IGFBP-6基因shRNA的设计与筛选

胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)是胰岛素样生长因子结合蛋白家族(IGFBPs)的一员,IGFBP 6不同于IGFBP1 5,其与IGF-2的亲和力显著的优先于IGF-1,受到研究者的广泛关注.本研究在小鼠IGFBP-6基因mRNA的806、760和908 bp处找到潜在靶位点,设计3条shRNA干扰载体,并合成DNA Oligo,体外退火成双链DNA,插入pGU6/GFP/Neo载体,获得3条针对目的基因不同靶序列的干扰载体,瞬时转染NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞48 h后,利用流式细胞技术分选收集转染重组载体的细胞,提取细胞总RNA和蛋白质,实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法分别检测目的基因mRNA水平,蛋白水平对IGFBP-6的表达.结果表明,IGFBP-6(IGFBP-6,806-826)表现出了最高的干扰效率,转染效率为(79.2±2.3)％时,mRNA水平的沉默效率达(68.9±12.2)％,(P＜0.05);蛋白质水平的沉默效率达(46.7±11.3)％,(P＜0.05).本试验为研究IGFBP-6基因对细胞增殖的作用和体内生物学功能奠定了基础.     

创伤对小鼠热应激蛋白Bag家族基因表达的影响

以小鼠为研究对象,探讨创伤条件下热应激蛋白Bag家族基因在创伤愈合组织中的表达情况。选用巴比西小鼠,建立创伤应激模型,提取创伤愈合组织RNA,经Real-Time PCR检测其表达情况。结果表明:创伤应激时Bag家族基因表达全部下调,其中Bag3、Bag4下调差异显著(P<0.05);对Bag家族各基因进行聚类分析结果显示Bag3与Bag4可聚为一类。说明Bag家族基因在创伤愈合过程中的表达差异可能与细胞凋亡与炎症反应存在一定的联系。     

促渗剂对鹿茸多肽透皮吸收的影响及鹿茸多肽免疫活性检测

通过探讨不同质量浓度促渗剂月桂氮卓酮和冰片对鹿茸多肽透皮吸收的影响,优化出鹿茸多肽的给药方式,即通过口腔黏膜服用,为鹿茸运用于创伤、烧伤和美容提供依据。通过脾细胞增殖试验,检测鹿茸多肽的免疫活性。结果表明：（1）SDS-PAGE显示鹿茸酸粗提取物中含有不等量的蛋白质和多肽等,且多为大分子量多肽,但醇提多肽多为10000左右的某些小分子量多肽。（2）含5％月桂氮卓酮的醇提鹿茸多肽和含0．12％冰片的醇提鹿茸多肽比只含醇提鹿茸多肽溶液的累积透皮透过量多,说明促渗剂月桂氮卓酮和冰片能明显的增加醇提鹿茸多肽的透皮扩散速度和扩散的总量,而且0．12％冰片的促渗效率比5％月桂氮卓酮的促渗效果要高。（3）鹿茸多肽具有促进脾细胞增殖的活性,并存在剂量依赖性：醇提鹿茸多肽质量浓度从10mg／L上升到40mg／L时,对促进脾细胞增殖呈上升趋势,当质量浓度超过40mg／L时,增殖率增加不显著。     

红松松子壳多糖对Hela细胞增殖的影响

利用离子交换层析技术对水提醇沉法制得的PPSP进行了分离纯化,得到2种组分PPSP1和PPSP2.设293T细胞为对照细胞,经噻唑蓝还原法(MTT法)检测不同浓度的PPSP1、PPSP2对Hela细胞增殖的抑制程度.结果发现PPSP1、PPSP2对Hela细胞的增殖均有抑制作用,且抑制程度均随着浓度的增加而增大,呈剂量依赖性,其中PPSP1对Hela细胞的增殖抑制程度最显著;但低浓度的PPSPs对于293T细胞的增殖有促进作用,高浓度下显示出了一定的抑制作用(P＜0.001).试验结果表明红松松子壳多糖在体外对Hela细胞的增殖有抑制作用.     

乳铁蛋白基因启动子元件调控效应分析

本试验先后进行2轮载体构建及转染试验,对牛乳铁蛋白基因启动子元件调控效应进行了分析。首先进行第1轮载体构建及转染试验：采用PCR方法,利用4对引物从牛乳铁蛋白基因5′调控区-1 799向3′端依次缺失500bp进行调控序列扩增,将获得的扩增片段替换pEGFP-N1的CMV启动子,构建了4个重组载体,将重组载体转染牛乳腺上皮细胞（BMEC）,经筛选获得稳定的单克隆细胞,测定并比较各组细胞的荧光强度。在以上试验基础上,为进一步精确确定牛乳铁蛋白基因启动子顺式调控元件序列,进行第2轮载体构建及转染试验,方法同第1轮。结果表明,牛乳铁蛋白基因上游调控序列-1 323～-1 372存在负调控元件,-1 372～-1 560存在正调控元件。