小鼠感染肝片吸虫早期IL-4/IFN-γ及M2巨噬细胞标记分子的变化

为弄清肝片吸虫感染早期的主要细胞免疫类型及选择性激活巨噬细胞(M2或AAMΦ)标记分子的变化,本试验采用肝片吸虫囊蚴为感染源,经口分别感染雌性BALB/c野生型小鼠,运用特异性PCR鉴定成功感染小鼠后用间接ELISA对腹腔中IL-4和IFN-γ的水平进行测定,并对细胞因子IL-4、转录因子GATA3和M2的标记蛋白Relm a、Ym1分子的mRNA进行荧光定量PCR检测.结果显示,在感染后1,3,5,7周,从所获取肝脏组织中扩增的ITS2片段条带清晰,大小正确,测序后确定为肝片吸虫ITS2序列,表明肝片吸虫感染成功.对腹腔中IL-4和IFN-γ的水平测定表明感染组IL-4在感染后1,3,5周比对照组的显著增加(P=0.013,P＜0.01,P=0.02),但在第7周时无显著差异.IL-4的水平显著高于IFN-γ(P=0.011),而在第7周两者间无显著差异；对腹腔中IL-4、GATA3、Relm α和Ym1 mRNA水平的测定结果表明,感染后IL-4和GATA3 mRNA水平在第3周达到最高峰；于感染后1,3,5,7周,IL-4和GATA3 mRNA水平都分别显著高于对照组(IL4:P=0.01,P=0.012,P=0.023,P=0.014;GATA3:P=0.011,P＜0.01,P=0.032,P=0.014),但IL-4和GATA3间无显著差异；Relm α和Ym1mRNA水平都分别显著高于对照组(Relm α:P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P=0.011;Ym1:P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P=0.012),且二者间无显著差异,并随时间推移mRNA水平都呈下降趋势,于第7周达到最低水平.本研究成功利用肝片吸虫-小鼠模型研究蠕虫感染早期细胞免疫类型及M2标记分子的变化,发现在肝片吸虫感染小鼠早期主要引起Th2为主的细胞免疫.IL-4和M2巨噬细胞标记分子Relm α和Ym1在感染后1,3,5,7周都显著增加且具有相似的变化趋势,但nelmα和Ym1在第1周的高表达可能受诸多因素的影响还有待深入研究.     

猪附红细胞体PCR诊断方法的建立

据猪附红细胞体重庆株16S rRNA基因的序列特点设计合成种特异性引物,建立了猪附红细胞体PCR诊断方法.该方法能特异性扩增840 bp的猪附红细胞体16S rRNA基因片段,而对牛温氏附红细胞体、羊附红细胞体、猫血巴尔通氏体CA株、绵羊肺炎支原体、猪肺炎支原体、假单孢茵、大肠杆茵、沙门氏茵、肝片吸虫、葡萄球菌等的基因组DNA没有扩增条带出现.对猪附红细胞体基因组DNA的最小检测量为0.16 fg.通过对30份临床样品的检测,21份猪附红细胞体感染为阳性,其余为阴性.结果表明:建立的PCR诊断方法具有很高的敏感性和特异性,可用于猪附红细胞体的临床诊断和流行病学调查.     

重庆地区牛附红细胞体分子流行病学调查

根据重庆地区不同的地理条件以及不同的养殖模式,采用16S rRNA-PCR检测方法对重庆市进行了牛附红细胞体的分子流行病学调查。结果显示:重庆地区存在牛附红细胞体感染,平均感染率为11%。其中规模化养殖平均感染率(6%)低于散养(16.7%),丘陵地区平均感染率(2%)低于高山地区(25.6%)。     

常见猪腹泻病的鉴别诊断及综合防治

首先需要对腹泻病的概念澄清一下。腹泻只是一个征候群，并不是一种独立的病，引起腹泻的原因极其复杂，如细菌、病毒、寄生虫、营养和中毒等因素都会导致猪出现腹泻症状。     

1株山羊源海藻糖比伯斯坦杆菌的分离鉴定及药敏试验

为确定引起山羊肺炎的病原,本研究从病死山羊肺脏中分离纯化获得1株细菌,通过生化试验和分子生物学方法鉴定为海藻糖比伯斯坦杆菌。利用生物信息学软件MEGA6.0对巴氏杆菌科5个属细菌的白细胞毒素基因(lktA)和RNA聚合酶β亚基基因(rpoB)分别构建遗传系统发育树,可知分离株与海藻糖比伯斯坦杆菌(AF314526.2、CP003745.1、CP006955.1等)的lktA基因相似性最高,位于同一簇内;分离株和海藻糖比伯斯坦杆菌(CP006956.1、JACI01000002.1、CP003745.1等)的rpoB基因聚类为一簇,相似性最高;而与和葡萄糖苷曼氏杆菌(KU986490.1)的rpoB基因相似性最低。药敏试验显示,该菌对头孢噻肟、头孢他啶和环丙沙星等抗菌药物最敏感,对多西环素、阿莫西林和林可霉素等耐药。本研究为该菌致病机理的研究与疫苗的研发奠定了基础,也为临床用药提供了参考依据。     

犬弓首蛔虫卵黄原蛋白基因的克隆及表达分析

为克隆犬弓首蛔虫(T.canis)的卵黄原蛋白(YP)基因,本研究根据T.canis cDNA文库中的EST数据,采用RT-PCR方法扩增T.canis的YP基因(TcF-YP),并克隆至pGEM-T载体中进行测序。测序结果表明,TcF-YP基因片段大小为492 bp,编码163个氨基酸残基。同源分析显示,TcF-YP基因与猪蛔虫的卵黄原蛋白基因同源性最高,为78%。同时对该基因在T.canis雌虫、雄虫和雌虫各组织的表达谱进行研究,结果显示TcF-YP基因只在T.canis雌虫中高量表达,是雌虫特异的基因。对雌虫各组织的基因表达谱分析显示TcF-YP基因在子宫和肠中高量表达,在卵巢中有极微量的表达。本实验为TcF-YP基因的功能研究奠定了基础。     

动物寄生虫病学实验教学改革初探

针对寄生虫传统实验教学过程中存在的以观察玻片标本和瓶装标本为主,教学内容单一,教学模式滞后等突出问题,西南大学动物医学系动物寄生虫学课程组有计划地对寄生虫实验课进行了改革探索,使学生加深了对理论知识的理解,提高了实验课的教学效果,同时培养了学生观察、思考和分析问题的能力,对提高大学生人才素质具有积极意义。     

中药"球康"对E.tenella感染鸡肠道CD4+和CD8+T细胞的影响

本试验采用免疫组化方法检测球虫感染鸡肠道组织中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量,探讨中药“球康”抗球虫的作用机理。试验共设不感染不给药组、不感染给“球康”组（2％拌料）、感染给“球康”组和感染不给药组共4组。感染球虫后第2、4、5、7和9天,每组随机捕杀4只鸡,采取盲肠中段进行检测。结果,雏鸡感染球虫后,盲肠组织中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量显著高于不感染组,感染给中药“球康”组鸡CD4＋T细胞数量在第2,4,5和9天均高于感染不给药组,在第4天和第5天差异显著（P＜0．05）;CD8＋T细胞数量在第2,5,7和9天高于感染不给药组,第5天差异显著（P＜0．05）,第7天达到最高峰。说明中药“球康”通过增加球虫感染鸡肠道黏膜CD4^＋、CD8^＋T细胞数量,提高细胞免疫水平,以增强机体对球虫的抑杀作用。     

羊附红细胞体PCR诊断方法的建立及应用

根据羊附红细胞体16S rRNA基因序列设计特异性引物,建立了羊附红细胞体的PCR诊断方法.该方法能扩增羊附红细胞体16S rRNA基因片段,对大肠杆菌、羊无形体、羊源支原体、猪附红体和假单孢菌基因组DNA没有扩增出条带,所能检测羊附红细胞体DNA的最低量为1.82 pg/mL.运用所建立的方法对从重庆市荣昌县采集的110份羊血样进行附红细胞体检测,其中13份羊附红体感染阳性,表明该方法特异性和灵敏度高,可用于急性羊附红细胞体病和临床带菌羊的检测.