小鼠感染肝片吸虫早期IL-4/IFN-γ及M2巨噬细胞标记分子的变化

为弄清肝片吸虫感染早期的主要细胞免疫类型及选择性激活巨噬细胞(M2或AAMΦ)标记分子的变化,本试验采用肝片吸虫囊蚴为感染源,经口分别感染雌性BALB/c野生型小鼠,运用特异性PCR鉴定成功感染小鼠后用间接ELISA对腹腔中IL-4和IFN-γ的水平进行测定,并对细胞因子IL-4、转录因子GATA3和M2的标记蛋白Relm a、Ym1分子的mRNA进行荧光定量PCR检测.结果显示,在感染后1,3,5,7周,从所获取肝脏组织中扩增的ITS2片段条带清晰,大小正确,测序后确定为肝片吸虫ITS2序列,表明肝片吸虫感染成功.对腹腔中IL-4和IFN-γ的水平测定表明感染组IL-4在感染后1,3,5周比对照组的显著增加(P=0.013,P＜0.01,P=0.02),但在第7周时无显著差异.IL-4的水平显著高于IFN-γ(P=0.011),而在第7周两者间无显著差异；对腹腔中IL-4、GATA3、Relm α和Ym1 mRNA水平的测定结果表明,感染后IL-4和GATA3 mRNA水平在第3周达到最高峰；于感染后1,3,5,7周,IL-4和GATA3 mRNA水平都分别显著高于对照组(IL4:P=0.01,P=0.012,P=0.023,P=0.014;GATA3:P=0.011,P＜0.01,P=0.032,P=0.014),但IL-4和GATA3间无显著差异；Relm α和Ym1mRNA水平都分别显著高于对照组(Relm α:P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P=0.011;Ym1:P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P=0.012),且二者间无显著差异,并随时间推移mRNA水平都呈下降趋势,于第7周达到最低水平.本研究成功利用肝片吸虫-小鼠模型研究蠕虫感染早期细胞免疫类型及M2标记分子的变化,发现在肝片吸虫感染小鼠早期主要引起Th2为主的细胞免疫.IL-4和M2巨噬细胞标记分子Relm α和Ym1在感染后1,3,5,7周都显著增加且具有相似的变化趋势,但nelmα和Ym1在第1周的高表达可能受诸多因素的影响还有待深入研究.     

鸭髓样分化因子MyD88部分cDNA克隆及组织表达图谱分析

本试验采用RT-PCR技术克隆出鸭MyD88部分cDNA序列,克隆到的序列长为195 bp;同源性分析结果显示,鸭MyD88与鸡、火鸡、珍珠鸟的同源性最高,为97％～100％;与人、鼠、牛、猪、狗、马、兔、鲤鱼的同源性为83％～84％;与绵羊的同源性为79％;系统进化树分析表明,鸭MyD88与鸡的亲缘关系最近,与火鸡、珍珠鸟的较为接近,与狗、鼠、兔、人、猪、马、绵羊、牛的亲缘关系依次渐远,与鲤鱼的亲缘关系最远.检测MyD88在鸭7种组织中的分布情况,结果表明,在鸭的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、腔上囊中均检测出MyD88 mRNA的转录产物,而在肾脏、脑中未见.提示MyD88在不同种属及不同组织中具有生物多样性.     

IL-4对肝片吸虫感染诱导的巨噬细胞中脂肪酸结合蛋白2分布的影响

为阐明小鼠感染肝片吸虫后巨噬细胞中脂肪酸结合蛋白2(FABP2)的分布,采用肝片吸虫囊蚴为感染源,经口分别感染雌性BALB/c野生型(WT)及其IL-4单抗处置小鼠,在运用特异性PCR鉴定成功感染小鼠后获取巨噬细胞,并设立人工巯基醋酸盐诱导巨噬细胞对照组进行体外培养。用荧光定量PCR检测选择性激活巨噬细胞的标记蛋白Relmα、Ym1和 Arginase1以确定其激活状态。采用特异性抗体对所获取的巨噬细胞细胞质染色后用共聚焦显微镜摄取不同时间点从不同小鼠体内获取的巨噬细胞染色后的图片。野生型BALB/c巨噬细胞中Relmα、Ym1和Arginase1均大量表达;IL-4单抗处置BALB/c小鼠和巯基醋酸盐诱导小鼠中巨噬细胞中的Relmα、Ym1和Arginase1的表达量较野生型小鼠中的极显著或显著下降。FABP2在FeMΦ中并不分布于细胞质膜下,而是呈点状广泛分布于细胞质中,其荧光强度在12~24 h间呈上升趋势,在24~48 h间却呈下降趋势。     

雏鸡不同组织TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR15 mRNA转录水平相对定量研究

参考GenBank登录的ChTLRs基因序列设计实时定量PCR特异性引物,建立检测鸡Toll样受体(ChTLR)mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR1、ChTLR2、ChTLR4、ChTLR5和ChTLR15在雏鸡不同器官组织中的转录水平。结果显示5种ChTLRs在脾脏、法氏囊、胸腺和各段肠道组织中均有转录。其中,ChTLR1 mRNA在法氏囊、肾脏和盲肠组织中转录水平较高;ChTLR2 mRNA在脾脏、法氏囊和肝脏等组织中转录水平较高,在肾脏、肺脏和皮肤未检测到转录;ChTLR4 mRNA在所检测组织中转录水平差异较小,在脾脏、十二指肠和胸腺转录水平较高;ChTLR5 mRNA在肾脏、脾脏和空肠中的转录水平较高;ChTLR15 mRNA在法氏囊中转录水平最高,其次为脾脏和盲肠。本研究建立了检测ChTLRs mRNA在不同器官组织中表达水平的实时定量PCR方法,ChTLRs mRNA在雏鸡各器官组织中转录水平差异较大,可能与雏鸡各器官组织对病原的识别和抵抗能力有关。     

IL-4受体阻断对小鼠急性感染肝片吸虫后肝脏单核细胞悬液中细胞因子的影响

本研究旨在探索肝片吸虫感染小鼠急性期肝脏单核细胞悬液中细胞因子表达模式及其原因。试验将小鼠分为4组,分别对感染抗体处置组、感染非抗体处置组、抗体处置非感染组和非抗体处置非感染组的肝脏单核细胞培养上清液中IL-4、IL-5、IL-13及IFN-γ进行测定;同时也对肝脏中IL-4及IL-12P40 mRNA水平进行荧光定量PCR检测。结果显示,IL-4和IL-5的表达模式相似。在非感染状态下,无论是否进行抗体处置,两者都处于较低表达水平。在感染状态下,两者在非抗体处置小鼠中的表达显著高于抗体处置组(P<0.05)。IL-13与IL-4及IL-5的表达差异在于感染并用抗体处置后,小鼠肝脏单核细胞中的IL-13仍有较高水平表达。IFN-γ的表达量在感染后有所增加,但在有无抗体处理间无显著差异(P>0.05)。mRNA检测结果显示,在非感染状态下,抗体处置后的IL-4 mRNA水平显著低于非抗体处置组(P<0.05)。感染后非抗体处置组小鼠中IL-4 mRNA水平极显著高于抗体处置组(P<0.01),同时也极显著高于非感染非抗体处置组(P<0.01)。IL-12P40 mRNA的水平在感染状态下,抗体处置组的IL-12P40 mRNA虽较非抗体处置组低,但无显著差异(P>0.05)。但感染后非抗体处置组的IL-12P40 mRNA水平均极显著高于感染组抗体处置和非抗体处置组(P<0.01)。本试验结果表明,IL-4Rα对肝片吸虫感染急性期IL-5和IL-4的表达极其重要,但对IL-13及IFN-γ的影响较小。     

鸡MyD88、TRIF和TIRAP基因荧光定量PCR检测方法的建立

为对鸡髓样分化因子88(MyD88)、包含TIR结构域的IFN诱导连接蛋白(TRIF)和包含Toll/IL-1的接头蛋白(TIRAP)基因的进行定量检测,本研究参考鸡MyD88、TRIF和TIRAP基因序列,设计并合成特异性引物,以β-actin为内参基因,建立检测对应基因的实时荧光定量PCR方法.结果表明,4个基因的扩增效率为96.7%～102%,相关系数均在0.997以上;特异性强,扩增产物均形成单一的特异性熔解峰;敏感性高,可以检测到对应基因达10-13g/mL;重复性好,变异系数均在1.5%以下.本研究所建立的荧光定量PCR方法可用于鸡MyD88、TRIF和TIRAP基因表达研究.     

草莓重茬栽培病虫综合防治技术

草莓在双流区已种植30余年,是国家地理标志产品,对双流农民增收做出了重大贡献。由于近年来兴起的采摘草莓生产方式,导致草莓田块均为连年种植,造成田块病虫基数越来越高,草莓定植后易发生大面积死苗,严重影响了草莓生产和草莓产业的发展。本篇主要介绍以异地育苗、高温闷棚为核心的草莓重茬栽培病虫综合防治技术,已成为我区冬草莓生产上一套行之有效的技术措施。