多指标正交设计评价和优化巴马香猪精液冷冻稀释液

该文通过多指标正交实验设计对巴马香猪精液冷冻稀释液中低密度脂蛋白(LDL,因素A)、海藻糖(因素B) 和甘油(因素C)等3种保护剂联合使用时的作用进行评价,并分别对3种物质的最佳体积质量分数、摩尔浓度和体 积百分比进行优化.结果表明3种保护剂对精子活率(TMS)、质膜完整性(PMI)和彗星率(CR)作用的主次顺序均为 A>C>B,对精子顶体完整性(AI)作用的主次顺序为B>A>C;3种保护剂对TMS和PMI均有极显著的保护作用 (p<0.01),对CR均无显著性作用(p>0.05);LDL和海藻糖对AI有显著的保护作用(p<0.05),甘油对AI无显性 作用(p>0.05);通过因素与指标关系趋势图的绘制,发现由各个指标得到的最佳组合均为A2B3C2,且指标间的相关 性均达到了显著水平(p<0.05).因此,用TMS,PMI,AI和CR评价巴马香猪冷冻-解冻后精液质量时,指标间不 存在矛盾,用9%(w/v)低密度脂蛋白、200mmol/L海藻糖和2%甘油为巴马香猪精液冷冻稀释液中最优组合.     

李斯特氏菌因子血清的制备及食品检测的免疫磁性分离——PCR（MI …

首先进行了李斯特氏菌因子血清的研制,制备出了可对所有李斯特氏菌分型的１５个Ｏ抗原因子和４个Ｈ抗原因子的因子血清。利用复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球、对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行免疫磁性分离,并与ＰＣＲ方法相结合,建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的ＭＩＰＡ样品的检测表明,本方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对ＰＣＲ检验的干扰作用。食品样品在ＥＢ增菌液中增菌１２ｈ后,检     

李斯特氏菌因子血清的制备及食品检测的免疫磁性分离-PCR(MIPA)方法的建立

首先进行了李斯特氏菌因子血清的研制，制备出了可对所有李斯特氏菌分型的 １５ 个 Ｏ 抗原因子和４ 个 Ｈ 抗原因子的因子血清。利用复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球，对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行免疫磁性分离，并与 Ｐ Ｃ Ｒ 方法相结合，建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的 Ｍ Ｉ Ｐ Ａ方法（免疫磁性分离—聚合酶链反应方法，ｍ ａｇｎ ｅｔｉｃ ｉｍ ｍ ｕｎｏｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）。对菌液、模拟样品的检测表明，本方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对 Ｐ Ｃ Ｒ 检验的干扰作用。食品样品在 Ｅ Ｂ增菌液中增菌 １２ ｈ 后，检测的敏感度达 ５ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ Ｌ，可以在 ２０ ｈ 内完成检测。本方法对实际食品样品的检测结果，与国家标准检验方法检测的结果一致。     

应用微卫星PCR对中国3个品系实验用小型猪的遗传检测

以 12个 STR(shord tandem repeat)座位的 PCR对中国 3个品系实验用小型猪进行了遗传检测。结果 ,3个座位品系间扩增结果相同 ;9个座位呈现品系间多态性 ,其中 2个座位在 3个品系间均具有差异。贵州小型香猪与西双版纳近交系小耳猪间有 6个座位有差异 ,其遗传距离为 0 .186 4;贵州小型香猪与广西巴马小型猪间有 3个座位有差异 ,其遗传距离为 0 .12 73;广西巴马小型猪与西双版纳近交系小耳猪间有 5个座位有差异 ,其遗传距离为 0 .1333。由此表明 ,3个品系小型猪间的遗传背景具有一定差异 ,同时表明这 9个座位可选择为小型猪遗传检测的多态性座位。     

猪精液冷冻保存研究进展

根据国内外的研究进展,本文简要阐述了猪精液冷冻保存的机理和操作方法,对影响猪冷冻精液质量的因素进行了分析,同时指出了目前在猪精液冷冻保存技术的理论和实践中存在的问题,并提出了该技术中需要解决的问题和展望。     

巴马香猪精液冷冻过程中精子内抗氧化酶活性与精子质膜完整性关系研究

猪精液冷冻过程中,精子质膜往往因受到活性氧(ROS)的氧化而发生损伤,精子品质也随之下降.精子 ROS水平受抗氧化酶活性的影响,然而冷冻过程中精子细胞内抗氧化酶活性变化与细胞膜完整性的关系还缺乏报 道.该试验将巴马香猪精液冷冻保存降温过程中的精子分为4种状态,即鲜精、15 ℃精液、5 ℃精液和冷冻解冻 后精液,检测了各种状态下精子的运动参数、质膜完整性(PMI)和顶体完整性(AI),分析了超氧化物歧化酶(SOD) 活性、谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)活性和ROS(丙二醛MDA)水平.结果表明:15 ℃精子各项指标和鲜精无显著 差异(p>0.05);5℃精子运动能力、质膜完整性和抗氧化酶活性低于鲜精(p<0.05),而精子细胞内MDA 水平与 鲜精无显著差异(p>0.05);冷冻解冻后精子的运动能力、质膜完整性和抗氧化酶活性均低于其他各组(p< 0.05),精子MDA水平显著高于其他各组(p<0.05).同时,SOD和Gpx活性与精子PMI和AI之间的相关性均达 到了显著水平(p<0.05).可见,当精子降温至15℃以下直至冷冻时,SOD和GPX活性逐渐降低,精子细胞清除 ROS的能力随之下降,精子质膜脂质过氧化反应增强,质膜受损,内容物外渗是精液品质降低的重要原因.     

巴马香猪类固醇激素急性调节蛋白(StAR)基因真核表达载体的构建及鉴定

本试验通过RT-PCR扩增巴马香猪StAR基因,分析其序列的结构特点并构建真核表达载体,为StAR基因在猪睾丸间质细胞中的超量表达研究奠定基础.根据NCBI中猪StAR基因序列设计并合成引物,以巴马香猪睾丸组织总RNA为模板进行RT-PCR,将所得目的基因与pEGFP-C1进行双酶切后连接构建真核表达载体pEGFP-C1-StAR.结果显示,连接到pSURE-T克隆载体上的目的片段测序结果为858碱基组成,编码含有285个氨基酸残基的蛋白质,与NCBI报道的StAR基因比对,核酸同源性在99.3％以上,并成功构建了重组载体pEGFP-C1-StAR.     

荣昌猪和两种小型猪遗传背景的微卫星分析

荣昌猪是我国优良地方品种,巴马香猪和贵州小型香猪为我国独特小型猪品系。本研究采用美国猪基因组协作计划推荐的19个微卫星标记对荣昌猪、荣昌猪B系、巴马香猪、贵州小型香猪及外来猪种大白猪进行了遗传学检测和分析。结果表明:19个微卫星位点在群体中均表现为多态,每位点等位基因数10~23个。5个猪种中荣昌猪B系的遗传多样性最高,荣昌猪次之;2种小型猪的遗传多样性较低,其中巴马香猪的等位基因数(121个)略大于贵州小型香猪(114个),但其遗传多样性指数(平均期望杂合度0.6535±0.0347)小于贵州小型香猪(0.6919±0.0227),反映了巴马香猪较低的基因杂合度和较小的遗传变异;大白猪的遗传多样性最低。从品系的共有等位基因来看,荣昌猪B系基因背景组成中其亲本品系荣昌猪所占比例(30.22%)要大于大白猪(24.37%);大白猪和其他4个猪群体的共享等位基因数均较低(21.24%~25.12%);巴马香猪和贵州小型香猪之间共有等位基因数最高(45.06%)。采用基于遗传距离的NJ法和基于基因频率的最大似然法进行系统聚类,除了大白猪明显为独立分支及荣昌猪B系表现出较远的聚类关系外,其他3个猪种间的聚类有所不同。     

小型猪肝脏细胞色素P450基因CYP3A29克隆与序列分析

设计引物通过RT-PCR扩增巴马香猪和贵州小型猪香猪药物代谢关键P450基因CYP3A29基因的全长编码区,纯化并克隆入pMD 18-T载体,通过序列测定和比对分析其序列变异情况。17头小型猪共发现CYP3A29基因的5个单核苷酸变异位点,均表现为同义替换,对编码的氨基酸序列无影响;猪CYP3A29的单核苷酸变异和品系相关,在不同品系中可表现出品系特有的单核苷酸变异;贵州小型香猪G3 a2902发现1个可变剪接,缺失89 bp并产生移码,改变编码蛋白。本研究克隆的巴马香猪和贵州小型香猪CYP3A29基因及其序列变异情况,可为其作为药物代谢模型的应用提供技术资料。