脂质体法介导山羊精子转染外源DNA最适条件的研究

研究了阳离子脂质体介导山羊精子转染外源DNA的方法、效果及其影响因素以确定其最适转染条件,为进一步用此方法生产转基因动物提供参考.结果显示:①脂质体介导法可用于山羊精子转染外源DNA;②脂质体介导转染1、2、3号公羊的精子消化后阳性率分别为25.2%,22.6%,27.5%,差异不显著(p＞0.05).③脂质体介导转染的精子消化前后阳性率在充分洗涤组为41.3%和25.5%,极显著高于原精液直接加入1:10:1转染液不洗涤处理组的25.6%和11.4%及原精液加入不含缓冲液的转染液处理组的17.2%和7.8%(p＜0.01).④离心洗涤后精液分别与在转染缓冲液中加入0、0.1%、0.3%、0.6% BSA(质量/体积)的转染液共同孵育后的消化前后阳性率分别为41.3%和25.5%、35%和21.4%、27.5%和15.3%及11.2%和8.2%;⑤用不同缓冲液配制的转染液进行脂质体介导山羊精子转染外源DNA的效率有差异,其中以mDM液转染精子的消化前、后阳性率最高(为41.3%和25.5%).研究表明:脂质体介导转染外源DNA的独特机制使供精个体间精子转染效率趋于一致;精子与脂质体-DNA复合物混合前将精子充分离心洗涤可显著提高脂质体介导精子转染外源DNA的效率;血清白蛋白能降低脂质体对精子介导的转染效率;脂质体法介导山羊转染外源DNA的最适转染条件为用mDM液充分洗涤精子后再与脂质体-DNA复合物混合转染.     

黔北麻羊遗传结构的RAPD分析

用27条多态性引物对15份黔北麻羊个体基因组进行 RAPD分析. 结果共扩增出253条带,其中多态带为141条,多态频率在30.00%～75.00%之间,平均多态频率为55.73%. 单个引物获得的扩增带数在2～14条之间,平均每条引物扩增出9.37条带. 扩增带分子量范围在210～2700 bp. Nei氏公式计算品种内个体间遗传相似性指数在0.7290～0.9377之间,平均值为0.8634. 遗传距离指数在 0.0623～0.2710之间,平均值为0.1367. 结果表明黔北麻羊具有较丰富的遗传结构.     

FQ-PCR在转基因产品检测中的应用研究进展

实时荧光定量PCR（real-time fuoreseent quantitative PCR,FQ—PCR）是近年来定量PCR技术中兴起的最新定量检测技术,因其具有灵敏性高、特异性强、结果精确、反应快速、安全可靠等优点,现已广泛应用于医学和生命科学的各个研究领域,论文就实时荧光PCR技术的主要原理、分类方法以及在转基因产品检测中的应用等进行简要综述。     

采用子宫内输精提高山羊冷冻精液受胎效果的研究

山羊人工授精是山羊生产中常用的一项生物技术,也是胚胎移植等生物技术的重要组成步骤,操作简单、应用面广.为了提高山羊冻精输精的受胎效果,人们主要从精液冷冻和输精技术两个方面来进行研究.在精液冷冻方面的研究主要着眼于各种稀释液的成分和比例、抗冻剂、冷冻方法、解冻温度等,虽然这方面的研究提高了解冻后精子的活力,但仍不能大幅度提高子宫颈输精后的受胎率.山羊人工输精部位主要有子宫颈口和子宫内两种,人工输精方式主要有子宫颈口法和子宫内法.目前,主要采用子宫颈口法,这种方法虽然简单方便,但是精液消耗量大,受胎率低,复配率高.随着腹腔镜的应用,子宫内输精已经得到了普遍的推广和利用.本实验通过比较山羊不同的人工输精方式和输入的有效精子数目,进一步探讨了山羊冻精子宫内输精的应用条件,为该技术的推广利用奠定基础.     

利用微卫星标记对7个山羊品种的遗传多样性研究

为了研究小香羊与相邻产区山羊品种之间的亲缘关系,利用7个微卫星位点,以波尔山羊为对照,对中国6个山羊群体进行了遗传检测,计算了各品种群体的等位基因频率、平均杂合度(He)、平均多态信息含量(PIC)和平均有效等位基因数(Ne),同时分析了各品种群体内和群体间的遗传变异,并根据遗传距离进行了NJ聚类。结果表明,各群体的He、PIC、Ne分别为0.778~0.823、0.766~0.809、4.707~5.767;川东黑山羊和川东白山羊聚为一类,乌羊和南江黄羊聚为一类,其次是马头山羊、小香羊,最后是波尔山羊。微卫星标记分析结果与它们的地理分布及品种形成相一致。     

多指标正交设计评价和优化巴马香猪精液冷冻稀释液

该文通过多指标正交实验设计对巴马香猪精液冷冻稀释液中低密度脂蛋白(LDL,因素A)、海藻糖(因素B) 和甘油(因素C)等3种保护剂联合使用时的作用进行评价,并分别对3种物质的最佳体积质量分数、摩尔浓度和体 积百分比进行优化.结果表明3种保护剂对精子活率(TMS)、质膜完整性(PMI)和彗星率(CR)作用的主次顺序均为 A>C>B,对精子顶体完整性(AI)作用的主次顺序为B>A>C;3种保护剂对TMS和PMI均有极显著的保护作用 (p<0.01),对CR均无显著性作用(p>0.05);LDL和海藻糖对AI有显著的保护作用(p<0.05),甘油对AI无显性 作用(p>0.05);通过因素与指标关系趋势图的绘制,发现由各个指标得到的最佳组合均为A2B3C2,且指标间的相关 性均达到了显著水平(p<0.05).因此,用TMS,PMI,AI和CR评价巴马香猪冷冻-解冻后精液质量时,指标间不 存在矛盾,用9%(w/v)低密度脂蛋白、200mmol/L海藻糖和2%甘油为巴马香猪精液冷冻稀释液中最优组合.     

脂质体法介导山羊精子转染外源DNA最适条件的研究

研究了阳离子脂质体介导山羊精子转染外源DNA的方法、效果及其影响因素以确定其最适转染条件,为进一步用此方法生产转基因动物提供参考.结果显示：①脂质体介导法可用于山羊精子转染外源DNA;②脂质体介导转染1、2、3号公羊的精子消化后阳性率分别为25.2%,22.6%,27.5%,差异不显著（p〉0.05）.③脂质体介导转染的精子消化前后阳性率在充分洗涤组为41.3%和25.5%,极显著高于原精液直接加入1∶10∶1转染液不洗涤处理组的25.6%和11.4%及原精液加入不含缓冲液的转染液处理组的17.2%和7.8%（p〈0.01）.④离心洗涤后精液分别与在转染缓冲液中加入0、0.1%、0.3%、0.6%BSA（质量/体积）的转染液共同孵育后的消化前后阳性率分别为41.3%和25.5%、35%和21.4%、27.5%和15.3%及11.2%和8.2%;⑤用不同缓冲液配制的转染液进行脂质体介导山羊精子转染外源DNA的效率有差异,其中以mDM液转染精子的消化前、后阳性率最高（为41.3%和25.5%）.研究表明：脂质体介导转染外源DNA的独特机制使供精个体间精子转染效率趋于一致;精子与脂质体-DNA复合物混合前将精子充分离心洗涤可显著提高脂质体介导精子转染外源DNA的效率;血清白蛋白能降低脂质体对精子介导的转染效率;脂质体法介导山羊转染外源DNA的最适转染条件为用mDM液充分洗涤精子后再与脂质体-DNA复合物混合转染.     

黔湘渝4个山羊品种亲缘关系的RAPD分析

用扩增猪基因组筛选得到的40条多态引物对小香羊,马头山羊,川东白山羊和南江黄羊4个品种进行RAPD分析,扩增产物以1．5％琼脂糖凝胶（含0．5μg/ml溴化乙锭）电泳分离,结果有28条引物扩增出多态性谱带。并用Nei氏公式计算品种间的遗传距离指数,NJ法构建系统聚类图。结果表明,川东白山羊和南江黄羊之间的遗传距离指数较小,亲缘关系较近,而小香羊与各山羊品种间的遗传距离指数都较大,亲缘关系较远。     

小香羊群体遗传结构的RAPD分析

用扩增猪基因组筛选得到的40条多态引物对12份小香羊DNA样品进行RAPD分析,结果有21条引物扩增出多态性谱带.用Nei公式计算群体内的遗传相似性指数,平均为0.9592±0.0082.结果表明,小香羊品种的遗传基础较单一,遗传多样性贫乏.