牛轮状病毒VP4基因与LTB基因的融合表达及免疫原性研究

PCR扩增轮状病毒VP4基因和大肠杆菌LTB基因编码区,将其克隆至pET32a载体上,构建pET32a-VP4-LTB质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),PCR、酶切鉴定后进一步测序,测序结果表明融合基因片段由2637 bp组成,为编码879个氨基酸残基的多肽。经IPTG诱导和SDS-PAGE检测发现表达产物分子量约为118.9 KD,以包涵体的形式存在。融合蛋白经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化后免疫小鼠,结果所产生的抗体效价高于单独VP4蛋白的免疫结果但差异不显著(P0.5),但与对照组相比差异显著。表明所表达的融合蛋白具有较好的免疫原性,为研制牛轮状病毒亚单位疫苗奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒双基因多组合DNA疫苗的构建

本实验根据PRRSV结构蛋白的特性和IFNγ及IL-2这两种细胞因子的特性,构建表达PRRSVGP4-GP5、GP5-M、GP5-N、GP5-IFNγ、GP5-IL-2、N-IFNγ、N-IL-2的重组质粒。这些重组质粒在真核细胞中得到了表达。用这些真核表达质粒可以免疫小猪,通过检测其对猪体免疫应答的诱导能力和接种后动物对PRRSV的抵抗力来对基因疫苗的效能进行研究,以期筛选到有效的基因疫苗并为今后进一步的研究提供思路和理论基础。     

鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的扩增及酶切分析

以从内蒙古区分离的2株传染性喉气管炎病毒(ILTV)株的DNA为模板，用设计好的1对引物对这2株毒株的gB基因进行了PCR扩增，并对扩增产物分别用BglⅡ、PstⅠ、HindⅢ限制性内切酶酶切分析。结果表明，2个分离株均能特异性地扩增出该病毒gB基因片段，片段大小完全一致，为2．6kb；扩增产物的酶切图谱与参考株完全一致。     

鸡新城疫病毒B_(95)株的RT-PCR检测方法研究

本试验设计了一对B95 株的特异引物NDV -P1/P2,探讨了对其进行RT-PCR检测的可行性。结果证明 ,用该引物可以扩增出一条310bp的特异核酸带 ,敏感性为0.0043ng/ul。     

内蒙古地区鸡沙门氏菌流行病学调查

对内蒙古呼和浩特、包头、集宁、丰镇、东胜、临河、赤峰、通辽8个地区的27个养殖场随机采取血清样品共12824份，采用平板凝集试验，进行鸡白痢、鸡伤寒抗体检测。结果表明：父母代蛋种鸡平均阳性率为20.66％，最高达46．25％，最低为1．33％；商品蛋鸡平均阳性率为47％，最高达70％，最低为32.5％；父母代肉种鸡平均阳性率为12．66％，最高达38％，最低为1.08％；商品肉种鸡平均阳性率为72.9％，最高达92.5％，最低为51.67％。     

鸡产蛋下降综合症油乳剂灭活苗的免疫及攻毒保护试验

对应用当地分离病毒株研制的鸡产蛋下降综合症系列油乳剂灭活苗进行了免疫试验。结果表明,免疫后,鸡产蛋下降综合症（ＥＤＳ７６）油乳剂灭活苗、鸡新城疫（ＮＤ）－产蛋下降综合症二联油乳剂灭活苗及鸡新城疫－鸡传染性支气管炎（ＩＢ）－产蛋下降综合症三联油乳剂灭活苗免疫组的血清ＥＤＳ７６ＨＩ抗体迅速上升,维持４个月后仍在６．８－８（ｌｏｇ２）以上,并且能够抵抗强毒的攻击。证明所研制的ＥＤＳ７６油苗、ＮＤ－ＥＤＳ７６二联油苗、ＮＤ－ＩＢ－ＥＤＳ７６三联油苗对ＥＤＳ７６具有良好的免疫作用,能够抵抗ＥＤＳ７６强毒的攻击并产生高而持久的血清ＨＩ抗体。此外,对ＮＤ－ＥＤＳ７６二联苗、ＮＤ－ＩＢ－ＥＤＳ７６三联苗免疫组的血清ＮＤＨＩ抗体测定结果表明,上述二联苗、三联苗能产生与接种ＮＤ油苗一样良好的ＮＤ免疫效果,在免疫后１３０天时,其血清ＨＩ抗体仍高达９－１１（ｌｏｇ２）以上,与对照组有极显著的差异     

检测牛、羊布鲁菌多重PCR方法的建立与应用研究

根据布鲁菌属特异性基因BCSP31和布鲁菌种间特异性标志IS711插入序列,设计合成3对引物,以牛种布鲁菌A19,羊种M5,猪种S2基因组DNA为模版,建立可同时检测布鲁菌属、牛种布鲁菌和羊种布鲁菌的多重PCR方法,并对方法的扩增效果、特异性、敏感性及适用性进行验证.结果显示,牛种布鲁菌可扩增出222bp和615bp两条带,羊种布鲁菌可扩增出222bp和932bp两条带,该方法对牛种布鲁菌A19和羊种布鲁菌M5混合DNA模板的最小检出量为100pg,对葡萄球菌26001株、大肠杆菌O78等7种参照菌的核酸扩增结果均为阴性.应用该方法对19份布鲁菌血清抗体为阳性牛乳样进行检测,结果均为布鲁菌抗原阳性.     

杆状病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其抗原性分析

本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS).SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染圆昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性.以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板,与Vero细胞培养的全病毒裂解物比较,检测SARS-CoV康复病人血清特异抗体,表现出同样的敏感性和特异性;rBac-SS感染的昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,具有良好的敏感性和特异性.结果显示,杆状病毒表达的rSS有望替代SARS-CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的重组诊断抗原,并为探索重组亚单位疫苗的可行性奠定基础.     

兔出血症的研究

从呼和浩特市郊区分离1株兔出血症病毒,命名NM株,对其进行了病毒理化、生物学特性检测,并研究了应用SPA协同凝集试验诊断兔出血症的方法。结果表明,病毒在兔体连续传6代,均出现典型症状及病理变化,是1株毒力稳定的强毒株,病毒粒子在电镜下呈球形,直径30.3nm,无囊膜,边缘有均匀排列的齿状突起,有实芯(占40.6％)和空芯(占59.4％)2种病毒粒子。还有少量形态不一、大小不等的类似病毒的粒子。用冷酚法提取的病毒核酸,经二苯胺显色及紫外扫描,证明为DNA。病毒的蔗糖浮密度为1.192g/ml,对氯仿、乙醚及胰蛋白酶不敏感,耐酸(pH5、pH3)耐热(50℃、56℃、60min)。病毒对人的各型红细胞有高度凝集性。经氯仿、乙醚、酸(pHs、pH3),热(50℃、56℃ 60min)处理后血凝价不降或稍降,经胰蛋白酶处理后血凝价明显降低(降5个滴度)。37℃放置4h,4℃冰箱放置48h血凝价不降,4℃放置4～13d降低一个滴度,15d降2个滴度。兔体血清HI抗体滴度与保护力呈正相关,1∶40以上可以完全抵抗强毒攻击。用内蒙古生物制药厂生产的兔出血症组织灭活苗免疫兔,可以抵抗强毒的攻击。采用原代乳兔肾细胞、Vero及BHK_(21)传代细胞,培养病毒均未成功。应用SPA协同凝集试验诊断兔出血症,特异性和可靠性均好,可作为本病的1种快速诊断方法。     

呼和浩特市区牛种布鲁菌bp26和omp10的克隆

为明确试验布鲁菌和参考布鲁菌菌株与基因库中布鲁菌外膜蛋白BP26和OMP10基因间的同源性.利用布鲁菌外膜蛋白bp26和omp10基因,针对试验布鲁菌和参考布鲁菌菌株进行克隆和序列分析.根据GenBank发表的布鲁菌bp26基因和omp10基因,分别设计合成一对特异性引物,以提取的试验布鲁菌和2株参考布鲁菌的总DNA为...