柑橘果实成熟特异基因CsPMEI/InvI的克隆与序列分析

果实成熟特异基因对于调控果实成熟及其品质形成具有重要的作用。在前期获得柑橘Citrus果实成熟特异基因片段的基础上,以纽荷尔脐橙Citrus sinensis Newhall成熟果实为试材,应用RT-PCR和RACE技术,分离获得果实成熟特异基因的cDNA全长序列,命名为CsPMEI/InvI,GenBank登录号:KC198084;生物信息学分析表明:该基因全长945 bp,包含618 bp完整的开放阅读框,编码205个氨基酸,其编码的蛋白质分子式为C977H1568N296O282S10,相对分子量为22.29 kDa,理论等电点为9.84,属于InvI/PMEI（转化酶抑制子/果胶甲酯酶抑制子）家族成员,含有该家族严格保守的Cys残基,存在1个cAMP和cGMP-蛋白激酶磷酸化位点、3个蛋白激酶C 磷酸化位点、2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和3个N-酰基化位点,其二级结构主要以-螺旋为主。CsPMEI/InvI基因的分离为进一步研究柑橘果实的成熟机制提供了基础。图7表1参28     

柑橘皮渣制备低分子果胶及其抗癌活性的评价

以温州蜜柑、胡柚为原料,分别取其皮及榨汁后的果渣,采用酸提醇沉的方法制备柑橘果胶。将制得的各种柑橘果胶经121℃处理30 min得到低分子柑橘果胶（LMCP）,分别测定其分子质量、半乳糖醛酸含量、酯化度和体外抗人前列腺癌激素不依赖型PC 3细胞活性。结果表明,经过高温处理后4种柑橘果胶的分子质量比处理前下降64%～92%,以温州蜜柑皮的下降最大,胡柚皮的下降最小;半乳糖醛酸含量比处理前上升了6%～14%,以温州蜜柑皮的最大,温州蜜柑果渣和胡柚皮的最小;酯化度比处理前下降了8%～21%,以胡柚皮的最大,温州蜜柑皮和胡柚果渣的最小。高温处理后4种LMCP在高剂量（10 mg·mL-1）下对PC 3细胞的抑制作用均在70%以上,其中以温州蜜柑皮和胡柚果渣为原料制备的LMCP的抑制率高达90%以上。     

大豆孢囊线虫果胶酸裂解酶基因Hg-pel-5的克隆与分析

【目的】克隆和分析与大豆孢囊线虫寄生密切相关的果胶酸裂解酶新基因,为研究大豆孢囊线虫寄生和致病的分子机理提供依据,并为探讨大豆孢囊线虫的防控新途径提供理论基础。【方法】通过EST分析结合RACE-PCR扩增方法,从大豆孢囊线虫中克隆出1个果胶酸裂解酶新基因;通过原位杂交和半定量PCR的方法确定基因的表达部位和分析不同发育阶段的基因表达;采用Southern杂交方法分析基因的拷贝数。【结果】 从大豆孢囊线虫中克隆出1个全长为957个碱基编码227个氨基酸残基的新果胶酸裂解酶基因Hg-pel-5（GenBank 登录号HQ123259）。Hg-pel-5 基因组由2个外显子和1个内含子组成。预测蛋白含有20个氨基酸残基的信号肽和4段细菌结构的果胶酸裂解酶第三家族的保守位点。原位杂交确定Hg-pel-5在大豆孢囊线虫亚腹食道腺中表达。半定量RT-PCR结果表明Hg-pel-5在寄生前和寄生过程早期的2龄幼虫大量表达。Southern杂交结果显示Hg-pel-5存在于大豆孢囊线虫基因组中并以多拷贝形式存在。【结论】对大豆孢囊线虫中1个新的果胶酸裂解酶基因Hg-pel-5进行克隆和分析,表明该基因在大豆孢囊线虫早期寄生过程中发挥重要作用。     

超声波法提取番石榴果胶的工艺研究

[目的]采用超声波法提取番石榴果实中的果胶,探讨提取工艺条件。[方法]测定了提取液pH值、超声功率、超声时间、料液比、提取温度对果胶得率的影响,进行了单因素试验和正交试验。[结果]在提取液pH值为2．0、超声功率为70％、超声时间为30min、料液比为1：30、提取温度为50℃条件下,效果最佳,果胶得率达19．5％。[结论]采用超声波辅助法提取番石榴果胶工艺是可行的,超声波破壁可降低提取温度,提高果胶得率及安全性。     

果胶酯酶的研究进展

阐述果胶酯酶的作用机制及其对果实软化、根边缘细胞发育、铝毒胁迫等方面的研究进展。     

果胶脱色技术研究进展

果胶脱色技术是影响果胶生产质量的重要因素,就果胶的呈色机理,活性炭脱色、醇氨溶液脱色、双氧水脱色、树脂脱色等方法进行了综述。     

蚕沙废液提取低甲氧基果胶的工艺研究

对提取叶绿素铜钠盐和叶酸的蚕沙废液进行了提取果胶的生产工艺研究.结果表明,提取了叶绿素铜钠盐和叶酸的蚕沙废液可用来进一步提取果胶,提取的低甲氧基果胶颜色较好,性质稳定,质量达到国家标准.提取果胶的最佳条件为:采用活性炭脱色,沉析时的pH值控制在3.5,沉析温度为50℃,浓缩液与沉淀剂95%的乙醇用量以1∶1.1为宜.     

NPK不同配比对笋瓜(印度南瓜)果实中铬(Cr~(3+))、果胶和戊糖含量的影响

以笋瓜(印度南瓜)龙园栗香为材料,研究了N、P、K不同肥料配比对笋瓜果实中铬(Cr3+)、果胶、戊糖3种物质含量的影响。结果表明:高氮肥(尿素450kg·hm-2)的各组合下果实中Cr3+、果胶和戊糖含量均显著降低。在正常追肥(N1P1K1)前提下,仅增施钾肥的处理(N1P1K2)果实中3种物质均显著增加,仅增施磷肥的处理(N1P2K1)果实中Cr3+和戊糖含量显著增加,同时增施钾肥和磷肥的处理(N1P2K2)更有利于果实中Cr3+的积累。综合来看,生产中采用N1P1K2(尿素225kg·hm-2+磷酸铵225kg·hm-2+硫酸钾300kg·hm-2)处理进行追肥,可提高笋瓜果实中Cr3+、果胶、戊糖的含量。     

番茄果实成熟相关基因SlPEL和SlAPL的表达特性

分析27个代表番茄不同发育阶段和生物反应的组织特异性、含有152 635个独立EST数据库的数码表达,发现果胶裂解酶基因 (pectate lyase, SlPEL) 和番茄AP2 Like (SlAPL)的转录受果实成熟的调节。以授粉后不同发育时期的番茄(品种为美味樱桃)果实为试材, 用半定量PCR和荧光实时定量PCR分析SlPEL的表达模式,结果表明,授粉后12 d,其表达水平明显上升;授粉后16~18 d,达到第一个小高峰;28 d到最高峰;从28 d到完全成熟逐步下降到第一个小高峰的水平。SlAPL的表达模式与SlPEL类似,但其表达启动的时期迟于SlPEL。从授粉后25 d,SlAPL转录启动;授粉后28~32 d,其转录水平上升到第一个小高峰;39 d达到最高峰,以后到完全成熟略有下降。该研究也印证利用EST的数据库进行基因数码表达分析的可行性。     

密集烘烤烤烟细胞壁主要成分及降解酶变化研究

采用河南农业大学设计制造的电热式温湿自控密集烤烟箱,研究了烘烤过程中烟叶细胞壁主要成分及其酶活性变化.结果表明,密集烘烤条件下细胞壁成分中可溶性果胶含量先升后降,原果胶含量、纤维素含量持续降低.细胞壁降解酶活性随着烘烤过程的进行而升高,在48℃达到峰值后迅速降低.其中果胶甲酯酶(PE)和多聚半乳糖醛酸酶(PG)关系密切,共同促进果胶降解;纤维素酶主要是促进纤维素降解.细胞壁组分的降解是细胞壁降解酶综合作用的结果.