仔猪痢清口服液对小鼠的亚慢性毒性试验

根据农业部《兽药试验技术规范汇编》观察了仔猪痢清口服液对小白鼠的亚慢性毒性,试验组分设高、中、低3个剂量组,另设空白对照组,连续给药28d后剖杀各组小鼠。统计学分析结果表明,各组间的体重变化和脏器系数比较无显著差异;各试验组的血常规检测指标、血液生化学检测指标的测定结果与空白对照组测定结果相比差异均不显著;组织病理学检查显示小鼠的主要内脏器官未见明显异常变化。试验结果表明仔猪痢清口服液按临床剂量使用无毒性反应,应用安全可靠。     

猪尿和猪肝中克伦特罗ELISA方法的建立及初步应用

以自制的单克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA条件,建立标准曲线y=- 24.778.306x+53.744,r2=0.993 4,线性范围为0.1 ～27 μg/L,IC50为1.8 μg/L(n=25),最低检测限(LOD)为0.1μg/L.尿液经叔丁基甲醚提取,回收率为68.24％～100.73％;肝脏用盐酸水解,加KH2PO4缓冲液(pH值3.0)提取,过C18柱净化,回收率为80.45％～98.45％;变异系数均小于20％,尿液和肝脏中的LOD为0.3μg/L、0.3 μg/kg.用该方法检测喂药动物尿液和肝脏中的克伦特罗残留,特异性良好,适用于猪尿和肝脏中克伦特罗残留筛选.     

简谈兽药批发企业GSP实施的关键问题

正兽药GSP是《兽药经营质量管理规范》的简称,它为兽药经营企业提供了科学的质量管理思想体系,促使兽药经营企业的经营思想和组织结构发生根本变化,是我国兽药经营企业参与市场竞争的先决条件[1]。兽药经营企业要以GSP为依据,建立健全各方面的质量管理体系,进而实现企业兽药经营规范化,为提高兽药质量提供有力保障。目前兽药批发企业普遍存在着质量体系不完善、人员培训不到位、计算机管理欠缺、储存养护漏洞等问题,笔者针对兽药     

鸽副黏病毒经鸡胚传代引起毒力和F基因序列变化的研究

为研究鸽副黏病毒ND167在SPF鸡胚传代中毒力和F基因序列变化,运用有限稀释法将ND167连续传代扩繁,每代次均选择病毒稀释度最高且血凝价最高的尿囊液进行传代,共传10代次,测定第1、5和10代次的最小致死量致死鸡胚的平均时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)和F基因序列。结果表明,ND167在鸡胚传代过程中F蛋白裂解位点氨基酸虽未突变,但是毒力却在逐渐增强,从中等毒力株演变为强毒力株。说明对于PPMV毒力判定需要根据动物实验进行,需警惕PPMV在鸡群中反复传代引起毒力增强。     

仔猪痢清对动物细胞免疫功能影响的初步研究

[目的]研究仔猪痢清口服液对动物细胞免疫功能的影响。[方法]分别采用MTT法和中性红吞噬法测定仔猪痢清口服液对猪淋巴细胞转化和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响。[结果]给药组猪淋巴细胞的转化显著高于对照组;给药组小鼠腹腔巨噬细胞活性与生理盐水对照组相比有显著性差异。[结论]该口服液具有良好的促进ConA诱导的猪外周血T淋巴细胞转化作用和促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红作用,表明其具有良好的免疫增强效果。     

叶下珠抗新城疫病毒活性成分的筛选

[目的]筛选中草药叶下珠中的抗病毒活性成分,为开发治疗禽类病毒性疾病的新药提供条件。[方法]分别用75％乙醇（E）和纯净水（PF）煎煮叶下珠全草,再分别以石油醚（PE）、乙酸乙酯（EA）、正丁醇（BU）萃取其活性成分。将萃取物分别接种鸡胚成纤维细胞（CEF）,观察其对NDV病变的抑制作用;分别接种鸡胚,观察其对NDV血凝效价的影响;分别接种鸡,统计鸡群的死亡率,评价其免疫保护效果。[结果]E-PE、E-BU组萃取物均能明显抑制NDV在CEF细胞上的病变和显著抑制NDV在鸡胚内的增殖（P〈0.05）,以E-BU较好;E-PE、E-BU组的鸡只存活率均极显著高于利巴韦林对照组和生理盐水对照组（P〈0.01）,以E-PE组保护率较高。[结论]叶下珠水提取物效果较差;醇提取物E-PE组和E-BU组能有效抑制NDV病毒病变及其在鸡胚内增殖,对NDV的免疫保护效果较好。     

N-氨甲酰谷氨酸和精氨酸对京海黄鸡肉仔鸡生长性能和血液指标的影响

本试验旨在探讨N-氨甲酰谷氨酸(N-carbamylglutamate,NCG)和精氨酸(Arg)对京海黄鸡肉仔鸡生长性能、血清生化参数及游离氨基酸含量的影响。选用1日龄体重相近的京海黄鸡肉仔鸡600只,随机分为5组,每组6个重复,每个重复20只。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组饲喂在基础日粮中分别添加0.05%、0.10%、0.15% NCG及0.10% Arg的试验日粮。试验期28 d。结果表明,与对照组相比,添加0.05%、0.10%、0.15% NCG及0.10% Arg组平均日增重(ADG)升高,添加0.10% NCG组料重比(F/G)显著降低(P<0.05);添加0.10% NCG组血清中血氨(AMM)、尿酸(UA)和低密度脂蛋白(LDL)含量相对于其他各组显著降低(P<0.05),添加0.15% NCG组血清中一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)和碱性磷酸酶(ALP)含量显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,添加0.10%、0.15% NCG组和添加0.10% Arg组血清中Arg含量显著升高(P<0.05)。综上所述,日粮中添加NCG有助于提高京海黄鸡肉仔鸡血清中Arg和脯氨酸(Pro)的含量,改善血液指标,提高肉仔鸡的生长性能,其中NCG添加水平为0.10%时效果较好。     

鸭源新城疫病毒F基因在昆虫细胞中的表达和鉴定

为在昆虫细胞中表达鸭源新城疫病毒(NDV) F蛋白,本试验首先根据鸭源NDV F基因序列设计引物,PCR扩增出F基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,获得重组转座载体pFastBac-F,将其转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-F,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-F。Western blotting、间接免疫荧光试验结果均显示表达的重组蛋白能与鸭抗NDV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。结果表明鸭源NDV F蛋白在昆虫细胞中获得了成功表达,为鸭新城疫的预防控制奠定了基础。     

内含肽-弹性蛋白介导的人溶菌酶在毕赤酵母中的表达

将人溶菌酶、内含肽、弹性蛋白3个基因串联插入巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC-MIELYZ,经Pme I酶切线性化后电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选阳性克隆,并用甲醇诱导表达,以探讨内含肽-弹性蛋白介导的人溶菌酶在毕赤酵母中的表达情况。结果表明:SDS-PAGE和Western blot证实表达的融合蛋白分子量正确,抑菌试验表明融合蛋白对微球菌具有良好的抑菌效果。说明融合基因在毕赤酵母中成功表达,为后继的纯化工作及新型毕赤酵母表达载体的构建奠定基础。     

重组禽腺联病毒介导的溶菌酶对临床病原菌的抑制作用

在前期研究基础上,将经转座获得的杆状病毒重组穿梭质粒rBacmid-Rep、rBacmid-VP和rBacmid-LYZ共转染Sf9昆虫细胞,产生了表达人溶菌酶(hLYZ)的重组禽腺联病毒(rAAAV)(rAAAV-hLYZ);然后用纯化好的rAAAV-hLYZ溶液,在固体培养基上对常见病原菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、蜡状芽胞杆菌、白色念珠菌进行体外抑菌活性试验,研究重组禽腺联病毒介导的溶菌酶对临床病原菌的抑制作用。结果表明,溶菌酶基因能在重组禽腺联病毒中高效表达,这为进一步探索溶菌酶作为新型兽用生物药物奠定了基础。