重组鸭α-干扰素的抗病毒活性

本研究参考大肠杆菌密码子的偏好性,对GenBank中已经发表的鸭α-干扰素基因序列进行优化,人工合成后与原核表达载体pET30a-ELP连接,构建原核表达质粒pET30a-DuIFNα-ELP。将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中,IPTG诱导表达重组蛋白DuIFNα-ELP。根据类弹性蛋白多肽(ELP)具有温度敏感的可逆相变特性,通过重复可逆相变循环(ITC)纯化重组蛋白质;纯化的蛋白质主要以包涵体的形式存在,通过变性、复性处理后,采用细胞病变抑制法分别在MDCK/VSV和DEF/VSV中检测重组蛋白质的抗病毒活性。结果表明,合成的重组鸭α-干扰素基因能成功表达,重组蛋白DuIFNα-ELP分子质量约80 000,纯化后的重组蛋白质纯度约90%。通过抗病毒试验检测重组DuIFNα-ELP在MDCK/VSV系统中的抗病毒活性为1.0×10~6 U/ml,比活性为1.25×10~6 U/mg;在DEF/VSV系统中的抗病毒活性为1.0×10~7 U/ml,比活性为1.25×10~7 U/mg,比MDCK/VSV系统中活性高10个单位,验证了干扰素的抗病毒活性与受体细胞的应答可能存在一定关系。这一研究结果为鸭α-干扰素防治禽类病毒性疾病的探索奠定了基础。     

肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在组织中的分布

为研究肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在脏器组织中的分布情况,4周龄SPF鸡口服肠炎沙门氏菌后,于感染后48 h时心脏采血分离外周血单核淋巴细胞并采集11种组织,常规方法抽提总RNA,以鸡β-actin基因为内参,采用半定量RT-PCR法检测各组织中鸡Toll样受体2(chTLR2)基因的表达情况.结果表明:chTLR2主要分布于免疫组织系统中,ch TLR2t1没有chTLR2t2表达得广泛.说明chTLR2可能参与了肠炎沙门氏菌感染的天然免疫反应过程.     

抗氯霉素特异性单克隆抗体的制备及鉴定

为制备氯霉素单克隆抗体,并鉴定其特性,采用重氮化法合成氯霉素-牛血清白蛋白作为免疫原免疫小鼠,通过杂交瘤技术建立杂交瘤细胞株,利用体内诱生法制备单克隆抗体,用间接ELISA和间接竞争ELISA分别测定抗体效价和特异性.结果获得细胞株5C9,诱生腹水中抗体的效价在1.024×106以上,抗体IC50约为0.94 ng/mL,与其他同类药物交叉反应均小于0.01％.制备的单克隆抗体特异性强,可用于氯霉素快速检测试剂盒的研制.     

鸭I 型肝炎病毒一步法 RT-LAMP 可视化快速检测方法的建立

本研究根据GenBank中登录的鸭I型肝炎病毒( DHV I) VP1基因的高度保守序列,设计了特异性的引物,建立了一种灵敏、特异、高效的可视化体外环介导等温扩增方法( RT-LAMP)。结果表明,该方法的灵敏性可达到10 fg,是常规一步法RT-PCR方法的100倍以上。全部反应可以在1.0~1.5 h内完成,并可以直接通过肉眼观察颜色进行结果判定,该方法对其他鸭常见的病原体检测结果全部为阴性,该方法的建立为下一步研制鸭I型肝炎病毒的RT-LAMP快速检测试剂盒打下基础。     

T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库的构建

为筛选遗传背景清晰、裂解性能优良、宿主识别谱广泛的噬菌体用于抗菌产品开发,满足畜禽减抗、无抗养殖需求,通过易错PCR技术定向改变T7噬菌体尾丝蛋白羧基末端基因序列,并构建T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库,为筛选识别不同宿主的T7噬菌体奠定基础。提取T7噬菌体基因组,用SfiⅠ进行单酶切,回收SfiⅠ位点左侧基因组。常规PCR扩增尾丝蛋白羧基末端基因序列(TF-ct,约350 bp)以及gene17至T7基因组右侧末端基因序列(约4 000 bp)。以回收的TF-ct片段为模板,进行易错PCR扩增,将随机突变的TF-ct基因片段连接T载体,构建质粒文库。从质粒文库中用SfiⅠ/SphⅠ双酶切出TF-ct片段,并与SfiⅠ位点左侧基因组片段、gp17右侧基因组片段进行连接,利用包装蛋白拯救出T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库。结果易错PCR成功扩增TF-ct基因片段,并连接T载体构建质粒文库;同时随机突变的基因正确插入T7噬菌体基因组相应位置,成功拯救出尾丝蛋白定向进化T7噬菌体文库。从噬菌体文库中随机挑选15个克隆进行序列分析,目的基因的突变率在1.23%~2.16%;尾丝蛋白loop区域的氨基酸突变改变了T7噬菌体吸附宿主的能力。本研究成功构建T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库,验证了loop区域在T7噬菌体识别宿主过程的作用,为后续筛选有益噬菌体开发抗菌产品提供支撑。     

高能营养液对游泳小鼠抗疲劳效果的研究

以负重游泳的方法制备疲劳模型,观察小鼠力竭性游泳时间和游泳后的血糖、尿素氮及肝糖原水平.结果表明:高能营养液组、葡萄糖氨基酸组、葡萄糖组动物力竭性游泳时间比游泳对照组分别延长142.42%、83.23%和37.37%,高能营养液组和葡葡糖氨基酸组动物力竭性游泳时间与游泳对照组比较,差异极显著(P<0.01);游泳对照组与正常对照组比较,血糖、肝糖原含量均降低,尿素氮水平升高.差异均极显著(P<0.01);与游泳对照组相比,高能营养液组、葡萄糖氨基酸组、葡萄糖组的血糖和肝糖原水平均有所升高,尿素氮水平卜升幅度减小.其中,高能营养液中高剂量组的血糖、血尿素氮、肝糖原与游泳对照组比较,差异极显著(P<0.01).表明该宠物用高能营养液能有效维持游泳动物血糖、肝糖原水平,抑制蛋白质分解,增强体能,具有一定的抗疲劳作用.     

动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测方法的研究进展

动物性产品中存在多种氟喹诺酮类药物残留,不仅危害动物健康,且影响人类的动物性食品安全。作者就氟喹诺酮类药物残留问题及其检测方法（如微生物法、理化检测法、免疫分析法等）进行了简要综述,并进行了合理的展望,以期为今后研究和开发氟喹诺酮类药物残留检测方法提供参考。     

"乳乃康"对健康奶牛乳腺组织的刺激性试验

选用乳区LMT检测为阴性的健康奶牛8头,观察药物乳乃康对乳腺组织的刺激作用,通过给药前后7 d连续检测乳成分的变化来评价其对健康乳腺组织的刺激性。结果表明:药物组和生理盐水对照组在给药后1~2 d内乳汁中体细胞数均明显上升,与各组试验前及给药3 d后相比差异极显著(P<0.01),但2组之间差异不显著(P>0.05)。乳腺组织对异物刺激非常敏感,药物和生理盐水对其都具有一定的刺激作用;乳乃康对乳腺组织的刺激作用和生理盐水相似,可间接表明药物的刺激作用较小;2组乳蛋白、乳脂、非脂固形物、密度、凝固点等指标在试验前后以及2组之间相比均差异不显著(P>0.05),表明药物对乳腺组织无明显损伤作用。     

仔猪痢清体外抗菌活性的研究

仔猪大肠杆菌病是危害仔猪较严重的传染性疾病之一，给养猪业造成重大经济损失。应用中药作为替代抗生素、解决耐药性和药残问题，达到防治疾病的方法越来越受到国内外的重视。仔猪痢清是根据中兽医学理论和中医药理论在现代药学上的应用原理，以黄连、白头翁等8味中药制成的中兽药制剂，经临床试用于防治仔猪大肠杆菌性腹泻，结果表明具有良好的防治效果。笔者等通过不同药敏实验方法。对中药制剂仔猪痢清的抗菌作用进行评价，并取得令人满意的结果。     

牛气管抗菌肽在毕赤酵母中的表达及条件优化

根据已发表的牛气管抗菌肽(bTAP)序列和酵母密码子偏爱性设计并合成一段bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母pPIC9K质粒连接后构建了分泌表达载体pPIC9K-bTAP.获得重组质粒经Sal Ⅰ酶切线性化后电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选获得了阳性转化重组菌.通过对重组菌培养条件的进一步优化,揭示了重组...