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为制备特异性结合猪源Sn受体的纳米抗体分子,采用人工合成猪肺泡巨噬细胞Sn受体胞外区(Sn4D)基因序列,将其克隆至pET-30a载体中,并在大肠杆菌中诱导表达Sn4D蛋白;经Ni柱纯化的Sn4D蛋白作为靶标分子,在T7噬菌体展示的纳米抗体文库中进行3轮亲和筛选;然后从筛选产物中挑选单抗克隆噬菌体进行亲和力、特异性鉴定。结果显示,成功构建了pET-30a-Sn4D重组表达载体,并诱导表达出约50 ku的目标蛋白,Western-blot显示该蛋白具有良好的反应活性;经过3轮亲和筛选,投入产出比逐渐升高,并从筛选产物中鉴定出6株特异性结合Sn4D的纳米抗体分子。该纳米抗体分子的获得为今后进一步开展抗病毒活性的研究奠定了良好基础。 相似文献
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为筛选遗传背景清晰、裂解性能优良、宿主识别谱广泛的噬菌体用于抗菌产品开发,满足畜禽减抗、无抗养殖需求,通过易错PCR技术定向改变T7噬菌体尾丝蛋白羧基末端基因序列,并构建T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库,为筛选识别不同宿主的T7噬菌体奠定基础。提取T7噬菌体基因组,用SfiⅠ进行单酶切,回收SfiⅠ位点左侧基因组。常规PCR扩增尾丝蛋白羧基末端基因序列(TF-ct,约350 bp)以及gene17至T7基因组右侧末端基因序列(约4 000 bp)。以回收的TF-ct片段为模板,进行易错PCR扩增,将随机突变的TF-ct基因片段连接T载体,构建质粒文库。从质粒文库中用SfiⅠ/SphⅠ双酶切出TF-ct片段,并与SfiⅠ位点左侧基因组片段、gp17右侧基因组片段进行连接,利用包装蛋白拯救出T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库。结果易错PCR成功扩增TF-ct基因片段,并连接T载体构建质粒文库;同时随机突变的基因正确插入T7噬菌体基因组相应位置,成功拯救出尾丝蛋白定向进化T7噬菌体文库。从噬菌体文库中随机挑选15个克隆进行序列分析,目的基因的突变率在1.23%~2.16%;尾丝蛋白loop区域的氨基酸突变改变了T7噬菌体吸附宿主的能力。本研究成功构建T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库,验证了loop区域在T7噬菌体识别宿主过程的作用,为后续筛选有益噬菌体开发抗菌产品提供支撑。 相似文献
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江苏现代高效农业发展现状和模式分析 总被引:1,自引:0,他引:1
分析了江苏现代高效农业发展的现状和主要制约因素,归纳总结出不同的发展模式,在此基础上阐述了江苏现代高效农业发展模式的创新思路、不同地区的发展重点和推广示范模式,并提出了相应的对策建议。 相似文献
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