牛气管抗菌肽在毕赤酵母中的表达及条件优化

根据已发表的牛气管抗菌肽(bTAP)序列和酵母密码子偏爱性设计并合成一段bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母pPIC9K质粒连接后构建了分泌表达载体pPIC9K-bTAP.获得重组质粒经Sal Ⅰ酶切线性化后电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选获得了阳性转化重组菌.通过对重组菌培养条件的进一步优化,揭示了重组...     

猪传染性胸膜肺炎病原菌的分离鉴定与药敏试验

猪传染性胸膜肺炎（porcine infectious pleuropneumonia）是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）引起的猪的一种高度致死性呼吸道传染病。我国于1990年始见报道，主要表现为肺炎和胸膜炎的特征性症状和病理变化。随着养猪生产的大规模、集约化发展，该病的发病率和死亡率呈明显上升趋势，目前已成为危害现代养猪业的主要传染病之一。临床上多采用大剂量青霉素进行治疗，但易使病原菌产生耐药陛，影响疗效。笔者通过药敏试验观察了11种常用药物对胸膜肺炎放线杆菌的抑菌效果，筛选出高敏药物，为临床防治提供依据。     

仔猪痢清对动物细胞免疫功能影响的研究(英文)

[Objective] The study aimed to explore the effects of Zizhuliqing Oral Liquid on animal cellular immune function.[Method] MTT method and phagocytizing natural red method were used to determine the effects of Zizhuliqing Oral Liquid on piglet lymphocyte transformation and the phagocytosis of mouse peritoneal macrophages respectively.[Result] The lymphocyte transformation rates of piglets in medicated groups were significantly higher than that in control group;the difference of mouse peritoneal macrophage activities between the medicated groups and the control group was obvious.[Conclusion] Zizhuliqing Oral Liquid could promote the transformation of piglet T lymphocytes induced by ConA and the phagocytosis of mouse peritoneal macrophages to natural red,indicating its good immune enhancement function.     

鸭瘟病毒环介导等温扩增检测方法的建立及应用

为建立一种简便、快速、灵敏度高、特异性好的鸭瘟病毒(DPV)检测方法,根据GenBank中公布的DPV UL6基因组序列,设计了3对特异性引物,建立了LAMP快速检测方法。该方法的灵敏度可达0.1fg,对其他鸭常见病原体检测结果均为阴性,扩增反应只需在水浴锅中60min内即可完成,可通过肉眼观察颜色变化直接判定结果。结果表明,所建立的LAMP方法简便快捷,省时省力,是适用于现场和基层实验室快速、准确检测DPV的分子生物学方法。     

正交试验法优选叶下珠总黄酮的提取工艺

叶下珠（Phyllanthus urinaria L．）为大戟科叶下珠属植物,全草入药,具清肝明目、收敛利水、解毒消积等功效。本品资源丰富,分布很广,民间常用于治疗黄疸、肝炎、痢疾等。现代化学和药理学研究表明,叶下珠含有木脂素、萜类、黄酮、鞣质和生物碱等多种化合物,具有明显抗乙型肝炎病毒、保护肝损伤及镇痛、降压、抗肿瘤、抗凝血等药理作用。国内外对叶下珠同属植物的抗乙肝病毒作用研究较多,是一种尚未开发利用的很有价值的药用资源,并且以总黄酮为抗病毒有效成分之一。     

仔猪痢清口服液的急性毒性和抗炎活性研究

为了考察仔猪痢清口服液的急性毒性和抗炎活性,根据《兽药试验技术规范汇编》的要求选用小白鼠进行了急性毒性试验和抗炎试验。采用灌胃和腹腔注射给药进行急性毒性试验。结果表明仔猪痢清口服液实际无毒;用小鼠耳廓肿胀法观察了仔猪痢清口服液的抗炎效果,结果表明仔猪痢清口服液对二甲苯所致的小鼠急性耳廓肿胀有一定的抑制作用。     

1型鸭肝炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立

为建立快速检测临床1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)感染的方法,根据DHAV-1的vp1基因序列设计1对引物,以DHAV-1及其他常见的感染鸭的病毒基因组为模板,建立了DHAV-1的特异性RT-PCR检测方法;以10倍梯度稀释的DHAV-1 RNA为模板,测定该方法的灵敏度;采集江苏多地的疑似DHAV-1感染病料,提取基因组进行RT-PCR扩增,产物经测序鉴定后判断所建立方法的检测率。结果显示,建立的方法可以特异性扩增DHAV-1 vp1基因保守区360 bp的序列,最低可检测1 fg基因组模板,对临床样品检测率为100%。表明,成功建立了特异性强、灵敏度高且可以用于临床快速诊断DHAV-1感染的方法。     

非洲猪瘟病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

为了建立一种快速、准确检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的胶体金免疫层析方法,试验以原核表达的ASFV PET-30A-P72蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备血清,以ASFV单克隆抗体杂交瘤细胞株2D3接种至Balb/c小鼠腹腔内制备腹水,采用间接ELISA法分别测定其效价。经protein G抗体纯化柱纯化后获得ASFV的单克隆抗体和多克隆抗体,并分别测定其浓度。选择出最适p H值及最适蛋白用量后,制备胶体金标记的ASFV单克隆抗体。以硝酸纤维素(NC)膜上分别包被的ASFV多克隆抗体和SPA作为检测线和质控线,制备用于检测ASFV的胶体金免疫试纸条。以两种原核表达的ASFV P72蛋白作为抗原对该检测试纸条的特异性、敏感性及稳定性进行验证。结果表明:制备的ASFV多克隆抗体和单克隆抗体的效价较高,分别为1∶51 200和1∶160 000,经纯化后其浓度分别为1.2 mg/m L和1.0 mg/m L;制备胶体金标记的ASFV单克隆抗体所需的最适p H值为8.5,最适标记蛋白用量是48μL;该试纸条可在5~10 min内准确检测出两种抗原,对两种抗原的最低识别量分别为15 ng和21 ng,经测试该试纸条的特异性、敏感性、稳定性表现良好。     

猪传染性胸膜肺炎病原菌的分离鉴定与药敏试验

猪传染性胸膜肺炎(porcine infectious pleurop-neumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)引起猪的一种高致死性呼吸道传染病[1].我国于1990年始见报道[2],主要表现为肺炎和胸膜炎的特征性症状和病理变化[3].