猪弓形虫感染的血清肽谱诊断法建立及初步应用

为了根据猪弓形虫感染血清差异表达多肽,建立一种新的质谱检测方法,采集江苏泰州地区部分养殖场育肥猪血清,利用间接血凝法(IHA)分析弓形虫感染状况,将IHA阳性与阴性血清分别归为感染组和对照组,采用磁珠纯化试剂盒富集血清多肽,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF Mass Spectrometry)检测,并结合flexAnalysis 2.0与Clin Pro Tools软件分析检测图谱并建立检测模型。对海陵、高港、姜堰部分猪场的IHA检测显示,猪弓形虫感染率分别为16%(8/50)、16%(8/50)、18%(9/50)。质谱检测m/z 800~12 000区段发现,弓形虫IHA阳性与阴性相比较,在育肥猪血清中共有9个多肽峰表达有显著性差异,其中m/z 1 608.59、1 971.84、5 004.01、4 617.49、7 808.23的5个多肽峰的表达显著上调,而m/z 1 233.01、8 007.66、2 356.37、3 735.65的4个峰呈显著下调,应用ClinProTools建模方程建立弓形虫感染猪的检测模型。可见MALDI-TOF质谱结合ClinProTools分析可建立猪弓形虫感染检测新方法,为弓形虫的诊断提供了一种新思路。     

鸭源H9N2亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法的建立

为建立鸭H9N2亚型禽流感病毒的监测及临床诊断方法,根据鸭源H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的基因序列设计1对特异性PCR引物,并以鸭源H9N2亚型禽流感病毒基因组为模板,建立鸭源H9N2亚型禽流感病毒的特异性RT-PCR检测方法,并用该方法对江苏省多地采集的疑似病料进行检测,扩增产物经测序鉴定后判断建立的方法对临床样品的检出率。结果显示,该方法可以特异性扩增鸭源H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白基因保守区的837 bp的序列,与对照的病毒无交叉反应,敏感性较好,最低可检测1fg基因组,临床样品的检测率为100%,表明本试验建立的鸭源H9N2亚型禽流感病毒RT-PCR特异性强、敏感性高,可用于临床快速诊断鸭源H9N2亚型禽流感病毒感染。     

抗四环素单链抗体基因表达及免疫学活性检测

为原核表达抗四环素的单链抗体(Sc Fv),并进行免疫学活性的初步测定,将前期克隆的四环素Sc Fv全长基因克隆到p ET-24a载体后转化入大肠杆菌BL21工程菌;IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,间接ELISA分析纯化的表达产物的免疫活性。通过酶切鉴定法、DNA序列测定,证明目的基因构建正确,SDS-PAGE和间接ELISA分析显示表达蛋白为27.8 ku,纯化后的蛋白免疫学活性良好。表明成功表达了具有免疫学活性的四环素Sc Fv,为四环素的药物残留检测方法建立奠定了基础。     

鸽常规石蜡切片制作技术的体会及改良

为了使传统的石蜡切片技术满足病理研究与诊断的需要,针对鸽的石蜡切片制作过程中易出错的环节,探讨制作优良鸽石蜡切片的具体方法,对制作过程中取材、固定、修整、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色及封固等步骤进行改良,镜检结果表明获得了高质量的石蜡切片。     

伴大豆球蛋白水解肽对小鼠抗沙门氏菌感染的作用

选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠40只,随机分为5个处理组,即正常对照组和感染对照组(基础日粮+生理盐水,I组和Ⅱ组),伴大豆球蛋白组(基础日粮+伴大豆球蛋白,Ⅲ组),伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽组(基础日粮+伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽,IV组)和水解肽分离有效抑菌组分组(基础日粮+水解肽分离有效抑菌组分,V组)。预饲3 d后,除I组和II组外,其他各处理组灌喂液体总含氮量为10mg/mL,每只小鼠灌喂量均为0.5 mL。连续灌胃10 d后,于第11天将108CFU/mL的沙门氏菌分别灌喂除正常对照组的其他各组(剂量均为0.5 mL/只),24 h后采用摘除眼球法收集血液后,宰杀各组小鼠,取脾脏、肠黏膜,分析血清和脾脏中TNF-α、IL-6和肠黏膜组织中sIgA的变化。结果表明在小鼠发生沙门氏菌感染时,伴大豆球蛋白水解肽以及水解肽分离有效抑菌组分能显著降低小鼠血清TNF-α水平(P<0.05)和脾脏IL-6水平(P<0.01),提高脾脏TNF-α和肠道黏膜sIgA水平(P<0.01)。说明伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽能提高动物机体免疫机能,抵御外源性沙门氏菌的侵袭感染,预防胃肠道疾病的发生。     

仔猪痢清口服液治疗仔猪大肠杆菌病的临床试验

为了观察仔猪痢清口服液对仔猪大肠杆菌病的临床效果,对人工感染大肠杆菌的仔猪进行治疗性试验.用大肠杆菌O301对试验动物进行人工感染后,分为仔猪痢清低、中、高剂量治疗试验组进行观察.结果表明,仔猪痢清口服液治疗仔猪大肠杆菌病疗效可靠,效果明显.对人工感染引起的仔猪大肠杆菌病治愈率为90.0％,有效率达100％,并能显著降低仔猪的死亡率.     

伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对大鼠肠道细菌区系变化的影响

 【目的】在分子水平上探讨伴大豆球蛋白水解肽对肠道双歧杆菌生长的影响。【方法】选取21日龄健康清洁级雄性SD大鼠,随机分为4个处理,每个处理3只,基础日粮预饲一周后,分别灌胃生理盐水（对照组）、伴大豆球蛋白液（Conglycinin组）、伴大豆球蛋白酶水解肽P2组分（P2-PTC组）、伴大豆球蛋白盐酸彻底水解液（HCl-FHC组）,各0.5 ml,1次/天。除对照组外,各处理组灌胃液体总含氮量相等（折合蛋白含量为0.5 mg?ml-1）,实验共21 d。应用PCR-DGGE技术分析灌胃伴大豆球蛋白酶解肽对大鼠粪样细菌区系变化的影响,并采用连续稀释PCR的方法半定量研究伴大豆球蛋白酶解肽对大鼠肠道双歧杆菌数量的影响。【结果】灌胃伴大豆球蛋白酶解肽的大鼠在实验后第1周,其粪样微生物区系变化迅速,而后缓慢,最终形成稳定的体系,提示酶解肽在一定程度上影响了肠道细菌的组成,与对照组和蛋白盐酸彻底水解液组比较,肠道双歧杆菌数量明显增加。【结论】本试验在分子水平证明了伴大豆球蛋白水解肽对肠道双歧杆菌的生长有促进作用。     

面筋蛋白的胃蛋白酶酶解物对大鼠免疫功能的影响

选用 5 0只SD大鼠 ,分为试验组和对照组 ,每组 2 5只 ,试验组用经氯化钠缓冲液洗涤法制备的面筋蛋白的胃蛋白酶酶解物灌喂 ,对照组灌喂未经酶解的面筋蛋白 ,连续灌喂 2 1d。实验结果显示 :与对照组相比较 ,大鼠胸腺和脾脏相对重量分别上升了 2 0 % (P <0 0 1)和 2 9% (P <0 0 1) ;腹腔巨噬细胞吞噬活性上升了 12 % (P >0 0 5 ) ;淋巴细胞转化实验中刺激指数 (SI)提高了 33 0 % (P <0 0 5 ) ;血清NDV (新城疫病毒 )抗体血凝抑制效价 (HI)上升了 38 5 % (P<0 0 1) ;肠腔sIgA水平提高了 2 8 6 % (P <0 0 5 ) ;血清IL 2水平上升了 38 4 % (P <0 0 1) ;血清瘦素、胰岛素、T3 和T4水平均无显著变化。实验结果提示 :灌喂面筋蛋白胃蛋白酶酶解物能够增强机体免疫功能 ,并且这种免疫增强作用与细胞因子的调理有较为密切的联系。     

伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对小鼠免疫功能及肠道内环境的影响

90只清洁级昆明系小鼠，随机分为5组，预饲基础日粮一周后，各组分别灌胃：生理盐水（对照组，CK）、伴大豆球蛋白液（Ⅰ）、伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解液（Ⅱ）、伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解液提纯B组分（Ⅲ）、伴大豆球蛋白盐酸水解液（Ⅳ），除对照组外，各处理组灌胃液体总含氮量相等，实验期21d。结果显示：与对照组相比，第3周Ⅱ组和Ⅲ组每只小鼠日均采食量较对照组显著下降，分别降低8．75％（P〈0．05）和9．28％（P〈0．05）；Ⅲ组小鼠胸腺相对质量极显著下降，降低了10．40％（P〈0．01），肠黏膜sIgA水平提高45．49％（P〈0．01），大肠食糜中6-磷酸果糖酮糖酶（F6PPK）活性极显著提高（P〈0．01），pH值下降了1．80％（P〈0．05），肠球菌数显著下降（P〈0．05）。实验结果表明水解肽作为腔内信号分子可能与肠道内相关因素有着多层次调控关系，共同促进宿主的健康。