浙江部分地区屠宰场待宰猪链球菌的检测及药敏试验

对浙江部分地区屠宰场中猪链球菌的分布和耐药情况进行调查.结果表明,猪链球菌的携带率为13.1%(38/290),其中2型猪链球菌为0.69%(2/290);不同地区之间待宰猪的猪链球菌携带率存在明显的差异,义乌地区的猪链球菌携带率为21.0%(22/139),而江山为0;各地区不同分离株的耐药性无明显差异,均对β-内酰胺类药物敏感,50%以上分离株对四环素、强力霉素、红霉素、麦迪霉素等几种药物表现为多重耐药.     

兽医食品卫生学人才培养之浅见

现代兽医工作主要包括三个方面的内容：（1）保障动物的健康．涉及食用动物、伴侣动物和野生动物的疾病控制与检疫；（2）保障动物源性食品的安全．控制畜产品中的兽药残留和致病性微生物污染，以免通过食物链影响人类的健康；（3）保障人类健康，主要是通过加强对动物中人畜共患病监测与控制．防止其向人类的传播，如狂犬病、布氏杆菌病、高致病性禽流感等：抗生素合理使用．避免人畜共用同一种抗生素，     

蛋黄中抗嗜水气单胞菌IgY的提取和纯化

通过对蛋黄中抗嗜水气单胞菌IgY的提取,分别进行了两种粗提方法(水稀释法、Pectin法)和纯化方法(硫酸铵法、PEG6000法)的比较。结果显示,当蛋黄液经pH5.0蒸馏水10倍稀释粗提后,上清液中脂肪和IgY残余率分别为32.69%和68.34%,效果较好。采用12%(w/v)PEG6000、33%(v/v)饱和硫酸铵纯化IgY,其免疫活性残余率分别为63.5%和64.1%。SDS-PAGE显示,水稀释法和Pectin法提取的上清液中杂蛋白减少,硫酸铵和PEG6000纯化后的上清液中几乎无其他杂带。研究表明,水稀释法和Pectin法提取IgY具有简便、高效和无污染的特点,硫酸铵和PEG6000适合纯化IgY。     

猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立

为了检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体水平,用纯化的猪流行性腹泻病毒N基因重组表达蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA方法。ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为0.5μg/m L,包被时间4℃过夜,5%脱脂乳的PBS封闭37℃2 h及4℃过夜。血清稀释度为1∶100;37℃作用45 min,辣根过氧化物酶标记兔抗猪Ig G稀释度为1∶10 000,37℃温育60 min,底物显色37℃15 min。抗体临界值为OD450nm≥0.30判为阳性,OD450nm≤0.27判为阴性,介于二者之间判为可疑。经重复性试验和交叉试验,结果表明,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。用已建立的ELISA方法检测临床血清样本184份,总阳性率为68.5%。     

不同猪瘟疫苗类型及剂量的抗体反应特性研究

随机选择3个猪场, 从9头母猪生下的仔猪中挑选81头仔猪。随机分成9组,每组又分为3个小组,每小组3头,分别免疫猪瘟组织苗(A)、猪瘟细胞苗(B)和猪瘟脾淋苗(C),各疫苗分别采用1头份、2头份和3头份3个剂量。于25日龄首免疫前后不同时间点采血,分离血清。应用ELISA和IHA两种方法分别对采集的540份血清检测猪瘟抗体。不同类型的猪瘟疫苗免疫试验结果表明：猪瘟脾淋苗免疫效果较好,但不同疫苗之间的抗体水平差异不显著。不同免疫剂量的试验结果显示：3种疫苗以3头份的剂量免疫后抗体反应略高于1头份和2头份,二免后都能获得较高的抗体水平。     

沿海地区副溶血弧菌的表型及其主要毒力基因分布特征

为了调查浙江沿海地区副溶血弧菌的分布及其携带毒力基因的特征,在舟山、象山、温州三地实地采样385份,包括海水、泥土和水产品等,共分离到副溶血弧菌菌株278份,其中27株为tdh基因阳性,阳性率为9.7%,trh与ureC基因的阳性率分别为22.3%与11.8%,提示浙江沿海地区广泛存在着致病性副溶血弧菌污染.将不同来源...     

检测产单核细胞李氏杆菌溶血素的胶体金试纸条制备及初步应用

产单核细胞李氏杆菌为重要的食源性病原菌,本研究旨在建立快速、灵敏、特异的检测方法,提高检测效率和检测通量。李氏杆菌溶血素(LLO)蛋白经原核表达后, 制备单克隆抗体, 测定单克隆抗体的亚型、效价及亲和力。柠檬酸钠法研制LLO胶体金试纸条,并对试纸条的特异性、敏感性、重复性、稳定性及模拟样品进行检测,并初步应用于实际海产品的检测。结果发现,制备的LLO单克隆抗体特异性强、稳定性高、重复性佳、灵敏度较高,亲和力好,亲和力常数为4.25×10⁸ L·mol^－1。人工污染样品试验表明灵敏度与纯细菌培养物基本一致,为3.0×10⁵CFU·mL^-1。将LLO胶体金试纸条应用于500份海产品的实际检测中,产单核细胞李氏杆菌的阳性检出率为2.20% (11/500),略低于国标检测方法(GB4789.30—2010)的2.40%(12/500)和PCR检测方法的2.40%(12/500),三者之间符合率为91.67%。另外缩短检测时间至15 min,检测效率大幅度提高。本研究建立的LLO胶体金检测方法可用于产单核细胞李氏杆菌的快速检测。     

动物源食品中病原微生物污染的监控

2000年5月举行的世界卫生大会充分认识到了食品安全所涉及的全球性公共卫生问题，建议将其列为世界卫生组织(WHO)的优先领域。WHO于次年2月在总部日内瓦组织召开了“食品安全性战略计划会议”。会议强调了微生物和化学性食品安全性、风险分析与评估、食源性疾病的监测、立法、成员国之间的合作等问题。近年来，我国政府也已经开始注重食品安全问题，逐步开展了食品安全性检测网络建设、食品卫生立法、动物防疫检疫法和兽药残留限量标准制订等工作，取得了初步的成功。但从发达国家的食品安全监管历史和现状以及我国的实际情况可以看出，食品安全问题难以在短期内得到根本性的解决，这是一项长期而艰巨的任务，特别是我国人口众多、人们的生活水平和饮食习惯差别较大，更需要正视食品安全性对国民健康的影响问题。     

乳铁素参与乳房链球菌对乳腺上皮细胞的粘附

免疫印迹试验表明，试验用的3株乳房链球菌（Streptococcus uberis)菌株均可与乳铁素（Lactoferrin)结合。培养基中加入乳铁素或乳清可以显著促进细菌与乳腺上皮细胞之间的粘附，抗乳铁素抗体可以特异性地抑制乳铁素或乳清预处理细菌与乳腺上皮细胞的粘附。乳铁素在细菌和细胞之间起着桥梁分子作用。有助于细菌与乳腺上皮细胞之间的粘附和乳腺感染的建立。     

猪源链球菌的分离与鉴定

从浙江地区98例发病样品猪猪体共分离到56(57％)株猪源链球菌，对12株典型分离株进行培养特性、生化特性及血清型的鉴定，多数具α或β溶血，其中C群链球菌8株。L群链球菌1株，2型猪链球菌2株。未定群1株。小鼠对12株分离株的敏感性有一定的差异。结果表明：浙江地区分离到的猪链球菌已不是单一的C群链球菌，且C群中也不是以往的马链球菌兽疫链球菌亚种。而是停乳链球菌似马亚种。并首次分离到猪链球菌2型。