浙江省副猪嗜血杆菌流行株分离鉴定及药敏试验

为了研究浙江省副猪嗜血杆菌流行菌株耐药性,试验从浙江省杭州、嘉兴、湖州、绍兴和金华等地区8个不同规模猪场典型病例中分离鉴定出了13株副猪嗜血杆菌临床分离株,采用纸片法检测了其对21种临床常用药物的耐药性。结果表明:浙江省副猪嗜血杆菌分离株对大多数常用抗生素敏感,如多西环素、氟苯尼考、阿奇霉素等,对氨苄西林、复方新诺明、头孢类抗生素有较强的耐药性;不同分离株的耐药性有较大的地域、猪场甚至是猪只或分离部位差异。     

规模猪场4大疫病的血清学检测及免疫抑制病因分析

选取杭州、绍兴、嘉兴和湖州4个地区的规模猪场为试验猪场,用正向间接血凝试验(IHA)检测猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)抗体合格率;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)抗体阳性率,分析免疫抑制状况。同时,采取临床可疑病料,用RT-PCR技术检测PRRSV、PCV2、CSFV和伪狂犬病毒(PRV)的感染率。结果显示:不同年龄猪群中,PCV2抗体阳性率都在96.0%以上,而CSFV、FMDV抗体合格率及PRRSV抗体阳性率呈现一致的变化趋势,即母猪最高,哺乳仔猪其次,培育猪和肥育猪最低;在病原检测中,PRRSV和PCV2检出率最高,分别为44.3%和60.7%。另外,双重感染和多重感染明显,特别是PRRSV+PCV2+CSFV三重感染,阳性率达7.6%。本试验结果为制定有效的免疫程序等防治措施提供科学依据。     

产肠毒素大肠杆菌K88黏附素蛋白亚基Fae G在L.lactis中的表达及其抗原性

在构建L.lactis表达载体pNZ8148-fae G的基础上,将该载体转化到L.lactis NZ9000中,重组菌经5 μg/Lnisin诱导3 h,SDS-PAGE结果显示,FaeG在L.lactis中表达的目的蛋白相对分子质量大小约为27 000,表达产物的量达菌体可溶性总蛋白的10.89%.Western blot分析结果表明,该目的蛋白具有良好反应原性.将重组L.lactis口服免疫BALB/c小鼠,小鼠产生特异性IgG及黏膜slgA.本试验为进一步研究仔猪口服重组L.lactis疫苗,诱导其产生抗ETEC K88黏膜免疫的同时,发挥L.lactis的益生功能,预防仔猪腹泻奠定了基础.     

重组猪干扰素-α单克隆抗体的制备和鉴定

利用自动发酵罐培养毕赤酵母,甲醇诱导其分泌表达重组猪IFN-α(r Po IFN-α);经硫酸铵沉淀、G-25琼脂糖柱脱盐处理及阴离子交换柱和分子筛层析纯化。以纯化r Po IFN-α蛋白作为抗原免疫6周龄BALB/c鼠3次后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选和3~5次亚克隆,共获得5株均能稳定分泌抗r Po IFN-α单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体亚类鉴定、特异性和叠加试验结果表明,这5株抗体均属于Ig G1亚类,能与r Po IFN-α产生特异性反应,其抗原结合位点相同或相近。该研究有助于进一步推动r Po IFN-α单克隆抗体在猪免疫学以及猪疫病诊断中的应用。     

加压软管灌配套技术

我团棉花滴灌最早是1999年引进以色列加压滴灌技术开始，虽然加压滴灌、随水施肥能够很好地解决棉花在各个生育期内对水肥条件的要求，有效地解决作物营养诊断、土壤养分诊断和调节水肥能力，及时供应作物需要的各种营养元素和水分，起到了增产的作用。但一次性投入成本过大，职工收入受到了影响，不被群众接受。从2002—2003年开始“小白龙”自压软管灌试验和推广，虽然节约了成本，但由于自压软管灌是靠自身压力灌水，所以渠道水位与条田必须达到一定的高差，如果渠道不进行防渗又易造成渗漏，引起地下水位上升，压力无保障，     

徐州地区牛、马血浆二氧化碳结合力的测定

血浆二氧化碳结合力(CO_2CP)是反映血液碱储的重要指标。健康家畜因其体内存在正常的缓冲体系,血浆CO_2CP可维持在正常恒定的范围之内。如果机体因代谢紊乱等原因造成碱储的增减或因呼吸异常而造成碳酸的增减都可使平衡失调,引起酸中毒或碱中毒,从而导致血浆CO_2CP的改变。临床上,许多疾病的后期往往导致酸碱平衡的紊乱。因此,测定家畜血浆CO_2CP的正常指标,为诊治疾病及判断预后,提供可靠     

规模猪场猪丹毒的诊治

近年来浙江省部分规模猪场发生急性猪丹毒,给养猪场带来巨大损失。通过对临床上疑似发病猪进行细菌分离和PCR检测、序列分析鉴定,判定为猪丹毒杆菌;同时经过药敏试验,证实头孢噻肟、头孢曲松钠、多西环素、头孢唑啉等对猪丹毒杆菌有效。     

弓形虫诊断抗原的亲和层析纯化和分析

应用琼脂糖凝胶Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析分离弓形虫速殖子细胞质抗原和弓形虫速殖子膜抗原,分别获得亲抗体Ｐｓ和亲抗体Ｐｍ。经双多抗酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）夹心法测定,结果表明,Ｐｓ的最低检出量为１３．３μｇ／ｍｌ,亲抗体Ｐｓ为１．５μｇ／ｍｌ,Ｐｍ为４．４μｇ／ｍｌ,其中又以亲抗体Ｐｍ为最优。     

鸭禽流感抗体血凝抑制试验(HI)的适用性改进

为解决鸡红细胞在检测鸭禽流感HI抗体时非特异性凝集的问题,开展抗原对鸡红细胞(CRBC)、樱桃谷鸭红细胞(yDRBC)、麻鸭红细胞(sDRBC)和番鸭红细胞(mDRBC)凝集特性,不同禽种间血清和红细胞的交叉凝集特性,血清中红细胞受体破坏酶(RDE)处理等一系列试验。结果表明,H5亚型AIV标准抗原对4种家禽的红细胞凝集效价完全一致,使用yDRBC检测樱桃谷鸭、麻鸭和番鸭血清的AIVHI抗体,和RDE处理后的血清比较,抗体效价符合率分别为100%、80%和100%。以yDRBC代替CRBC检测鸭血清AIVHI抗体的改进方法,检测结果具有更高的准确性和一致性,且方便适用。     

重组NP蛋白抗原检测SIV抗体间接ELISA方法的建立

用纯化的H9N2亚型猪流感可溶重组NP蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流感抗体的间接ELISA方法.ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为12.5 μg/mL,37℃ 1 h,4 ℃过夜;血清稀释度为1∶40;酶标SPA稀释度为1∶10 000,37 ℃温育40 min,底物显色37 ℃ 15 min.经重复性试验、交叉试验、竞争抑制试验等试验,结果表明该方法特异性强、灵敏度高、重复性好.利用TG-ROC软件确定了自制ELISA(NP-ELISA)酶标板的临界值为0.20,特异性和敏感性分别为95.83和91.43.与美国IDEXX试剂盒相比较,符合率为94.00,无显著性差异.用已建立的ELISA方法检测临床血清样本356份,总阳性率为35.40.