牛大肠杆菌灭活疫苗(K99、F41兼型)的研制与免疫研究

应用分离鉴定的兼有K99、F41菌毛抗原的产ST肠毒素的O142血清型大肠杆菌作菌种,制备出菌毛、全菌体和菌毛与菌体混合等3种灭活疫苗。疫苗物理性状良好,接种怀孕母牛产生良好的免疫反应,接种疫苗14 d后,抗体效价K99 为4.7～6log2, F41 为2.1～5.5 log2;28 d后K99 为6.5～8log2,F41 为2.6～6.5 log2。产犊后8～10 h,对犊牛口服攻毒800亿菌/mL O142大肠杆菌,结果3种疫苗均能使犊牛获得一定保护,保护率分别为89.1%、55.6%和94.6%,对照组为16.3%。菌毛苗和混合苗免疫效果均优于全菌体苗,K99免疫效果优于F41,两次免疫效果优于一次免疫。现地试验取得了良好的免疫效果,证明制备的油乳剂灭活疫苗安全, 免疫原性良好。     

牛白细胞粘附缺陷病携带牛CD18的部分基因序列分析

牛白细胞粘附缺陷病（bovine leukocyte adhesion deficiency ,BLAD）是一种常染色体单基因隐性遗传疾病。目前虽已确定BLAD病因与人的白细胞粘附缺陷病（leukocyte adhesion deficiency, LAD），为白细胞表面的一种称为整合素CD18亚单位表达缺陷所致，但至今关于CD18基因突变情况研究较少。为了深入研究和探讨BLAD发病机制，本研究将在我国黑龙江省东部地区调查发现的6头BLAD携带牛CD18部分基因进行了克隆和序列比较分析。     

RT-PCR与兔体交叉试验检测猪瘟病毒感染的相关性研究

对猪瘟RT-PCR诊断方法与兔体交叉试验诊断方法的相关性进行了研究。通过计算机软件设计了猪瘟病毒E2基因保守区的1对引物，建立了猪瘟病毒RT-PCR检测方法，同时应用兔体交叉试验进行对比，对7份临床送检病例进行了检测。结果表明，二者的符合率为100％，但RT-PCR可大大降低检测所用的时间，更便于猪瘟的快速诊断。     

猪瘟病毒垂直感染的检测

猪瘟是一种急性、高度接触性传染的一种重要传染病。近年来猪瘟流行的方式发生了改变，典型猪瘟逐渐减少，非典型猪瘟逐渐增多，表现怀孕母猪流产，产死胎、木乃伊和病弱的仔猪等，尤其是新生仔猪猪瘟，临床症状不十分明显，但发病率、病死率较高，严重危害养猪业的发展。关于新生仔猪猪瘟的发生，多认为是母猪怀孕期间感染猪瘟病毒而通过垂直传播的方式引起仔猪感染，但到目前为止未见有关新生仔猪垂直感染猪瘟病毒的直接证据。     

复合活菌制剂对断奶仔猪生长性能及血清溶菌酶含量的影响

选择长白二元杂交断奶仔猪90头进行试验,断奶日龄为35d。共分为五个组,每组设3个重复,每个重复随机选取健康仔猪6头。试验1组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌);试验2组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌);试验3组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌);试验4组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌)。对照组饲喂基础日粮。其中复合制剂中益生菌活菌数为l09cfu/g。饲养30d后观察复合活菌制剂对断奶仔猪生长性能及血清溶菌酶含量的影响。结果:在日增重、饲料效率及血清溶菌酶方面,试验1组和2组显著高于对照组(P<0.05);在腹泻率方面,试验组均显著低于对照组(P<0.05)。研究表明,在仔猪日粮中添加复合活菌制剂可提高每头断奶仔猪平均日增重及饲料效率,降低腹泻的发病率,且增高了仔猪血清溶菌酶含量,提高了仔猪的免疫机能,从而提高了经济效益。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌毒力因子及荚膜基因的PCR检测

为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)的因型特征,本实验利用聚合酶链式反(PCR)方法,对S.aureus的3个标准株和30个临床分离株的凝集因子A、凝固酶、溶血素等33种致病因子进行了检测.结果表明各分离株在毒力因子方面存在一定差异.这些差异的检测将为进一步研究S.aureus的致病性和有效防治提供参考.     

牛多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H的表达与纯化

试验对多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)基因进行克隆、鉴定,并在原核系统中表达。以多杀性巴氏杆菌(CVCC448)强毒株基因组为模板,扩增OmpH基因,连接T载体,经测序鉴定正确后与表达载体pET-28a连接构建重组表达质粒OmpH-pET28a,将此重组质粒转化入表达宿主E.coli BL21菌株内,抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以IPTG进行诱导,表达产物通过镍离子亲和层析纯化,之后进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果显示,OmpH基因的编码区为978 bp,编码326 个氨基酸残基,融合蛋白分子质量约为37 ku。Western blotting检测结果显示,表达的重组蛋白OmpH可与鼠抗多杀性巴氏杆菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。多杀性巴氏杆菌OmpH基因的成功表达,为进一步研究其免疫作用奠定了基础。     

猪用复合微生态制剂制备及保存期内活菌数研究

为了确定两种猪肠道益生菌的同体发酵效果,以及复合微生态制剂在不同保存条件下的活菌数变化.对猪肠道益生菌干酪乳杆菌、罗伊氏乳酸杆菌进行同体发酵,测定其活菌数,然后按照一定比例将两种益生菌与液体发酵的纳豆芽孢杆菌冻干菌粉混合制成复合微生态制剂;测定该制剂在4℃和室温保存状态下14 d内及半年内益生菌活菌数量的变化.保存14...     

一株产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其酶促反应适宜条件初步研究

为了分离、筛选产纤维素酶益生菌,确定其酶促反应适宜条件,利用羧甲基纤维素钠等作为筛选培养基,结合刚果红染色法,从玉米青贮饲料样品中筛选产纤维素酶益生菌,并通过形态学和系统进化树方法鉴定分离菌。同时对培养时间、pH和温度等酶促反应条件进行了研究。结果表明,筛选出1株可降解羧甲基纤维素,并产生清晰透明圈的菌株。经形态学观察和16SrRNA基因序列分析,鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。粗酶液中滤纸酶活为1.5U/mL,外切葡聚糖酶活为1.3U/mL,内切葡聚糖酶活为6.4U/mL,β-葡萄糖苷酶活为2.3U/mL。酶促反应的适宜条件为pH 5.5,温度50℃,粗酶液为培养3d后发酵液上清。解淀粉芽孢杆菌分离株具有一定的产纤维素酶能力,在玉米秸秆生物降解与利用方面具有潜在的开发价值。     

黑龙江省某规模化奶牛场牛病毒性腹泻病毒qRT-PCR结合双抗夹心ELISA的检测

为了对黑龙江省规模化奶牛场牛病毒性腹泻/黏膜病进行检疫净化,试验应用qRT-PCR法检测了黑龙江省4个规模化奶牛场(A～D场)奶牛耳组织样品(共1 286份,58组),qRT-PCR法检测得到的阳性组样品再用双抗夹心ELISA进行每份样品的检测。阳性牛间隔1个月用RT-PCR方法复检。结果表明:A场牛病毒性腹泻病毒阳性率为0.5%(1/193),B场为0.1%(2/875),C场为1.8%(1/55),D场未检测出牛病毒性腹泻/黏膜病抗原阳性牛(0/163)。间隔1个月,用RT-PCR方法复检,阳性符合率100%。说明qRT-PCR结合双抗夹心ELISA方法适合于规模化奶牛场牛病毒性腹泻/黏膜病的快速、特异性的检疫净化。