某牛场犊牛呼吸道疾病的诊断与药敏试验

2017年3月份,黑龙江省五常市某规模化奶牛场发生犊牛急性肺炎,为了确诊其病因,无菌采取7份呼吸道症状犊牛鼻拭子进行细菌分离鉴定,同时进行生化试验、PCR鉴定和药敏试验。结果表明:共分离得到3株细菌,符合大肠杆菌、巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌生化特性;PCR引物能有效扩增巴氏杆菌OmpH基因、溶血性曼氏杆菌lkt A基因和大肠杆菌Sta基因;分离的大肠杆菌对恩诺沙星、环丙沙星、阿米卡星中敏,巴氏杆菌对恩诺沙星、阿莫西林、青霉素高敏,溶血性曼氏杆菌对阿米卡星、头孢唑林、青霉素高敏;经检查7份鼻拭子中大肠杆菌感染1份,溶血性曼氏杆菌感染1份,巴氏杆菌感染5份。说明该牛场细菌污染严重,应引起重视。     

鼠伤寒沙门氏茵鞭毛蛋白FIiC的原核表达及纯化

对鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白FliC的基因进行克隆、鉴定和原核表达,为鞭毛蛋白佐剂作用的研究奠定基础。以鼠伤寒沙门氏菌8014菌株基因组DNA为模板,PCR扩增Flic基因,产物与T载体连接,经测序鉴定正确后与表达载体pQE30（＋）连接构建重组表达质粒Flic—pQE30,将此重组质粒转化人表达宿主E．coliXLI—Blue菌株内抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以1PTG进行诱导后,表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行SDS—PAGE和Westernblot分析。测序结果显示,FliC为完整的编码区基因1485bp,编码495个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为56kDa。经SDS—PAGE分析表明,以37℃、1mM的IPTG诱导5h,表达效果最好,诱导产物是与理论值相符的56kDa的融合蛋白。经western—blotting检测,表达的重组蛋白FliC可与小鼠抗鼠伤寒沙门氏菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的反应原性。成功进行了鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白nic基因的克隆表达,为进一步研究其免疫佐剂作用奠定了基础。     

免疫猪群中新生仔猪感染猪瘟病毒的研究

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性接触性传染病,是目前危害我国养猪业发展的主要疫病之一。2003年,黑龙江省某猪场发生母猪产出木乃伊胎、畸形胎儿、死胎及有颤抖症状的弱仔猪等现象。仔猪剖检可见皮下水肿,腹腔积水;病猪全身脏器有不同程度的出血点,黏膜和浆膜有出血点;肾脏颜色变淡,肠道黏膜有出血点,淋巴结水肿并有出血点,切面周围出血,有的呈大理石状。为了弄清其发病原因,对发病猪进行了实验室检测,结果报道如下。1材料与方法1.1病料某猪场5头母猪的血清及其所产3窝2日龄弱仔猪的血清和2窝未吃初乳的仔猪血清,并无菌采集所产死胎的脾脏…     

大肠杆菌K99和F41菌毛抗原的不同缓冲液热处理提取方法比较的研究

本试验用Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液（Ｔ）、ＰＢＳ缓冲液（Ｐ）、生理盐水（Ｓ）和２Ｍ尿素ＰＢＳ缓冲液（Ｕ）以热处理的方法提取大肠杆菌Ｋ９９和Ｆ４１菌毛抗原，并用硫酸铵盐析纯化Ｋ９９以及用１Ｎ醋酸滴定和氯化镁沉淀分别纯化Ｆ４１。根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和蛋白质含量测定结果，四种缓冲液对Ｋ９９的提取量依次是Ｕ＞Ｓ＞Ｐ，而Ｔ检不出Ｋ９９；对Ｆ４１的提取量依次是Ｕ＞Ｔ＞Ｐ＞Ｓ。Ｋ９９纯化后取得了满意的纯化结果，Ｆ４１纯化后大量上样做电泳时仍有微细的污染带出现，而且氯化镁沉淀后造成Ｆ４１严重损失。Ｋ９９和Ｆ４１纯化前后的各个样品经超声波处理、０．５％脱氧胆酸钠处理和未处理的原液与自家因子血清做琼扩试验以及Ｋ９９和Ｆ４１做交叉琼扩试验，均具有良好的特异性，而且以超声波处理后的样品做琼扩试验效果最佳。     

牛γ干扰素基因的表达及其多克隆抗体的制备

为了获得牛γ干扰素表达产物及其多克隆抗体,利用分子生物学软件分析GenBank公布的牛γ干扰素的氨基酸序列,针对这一基因序列设计了一对特异性引物,并从牛脾脏淋巴细胞提取基因组总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增出IFN-γ基因,与pMD18-T载体连接后进行酶切、PCR扩增以及序列测定和分析,并将...     

2010年黑龙江猪高热病流行病学调查

2010年黑龙江省多个地区暴发猪“高热病”,为明确其病因及流行特征,对来自大庆市、齐齐哈尔市、佳木斯市,绥化市等地区送检的43例病例(70头病死猪),应用病原学、血清学和PCR方法进行诊断,对确诊的病例进行流行病学回顾性研究.结果表明,小养殖户或小型猪场发病率较高,发病高峰期集中在9～12月份,发病日龄集中在1～3月龄仔猪(54.16％);病死猪以败血症为主,43例病例中猪链球菌病23例( 53.49％),猪瘟8例(18.60％),副猪嗜血杆菌病8例(18.60％),猪繁殖与呼吸综合征6例(13.95％),圆环病毒病4例(9.30％),混合感染发病率高达58.13％.以上结果表明,猪“高热病”病因复杂多样,防制工作任重而道远.     

猪粪便无害化处理技术及应用展望

随着我国经济的迅猛发展和人们生活质量的不断提高,猪肉需求量日益增大。有关资料表明,我国肉类产量以每年10%以上的速度递增,1991年肉类产量首次超过美国,以后连续几年保持世界第一[1]。     

牛产气荚膜梭菌肠毒血症的诊断

宝泉岭管局新华农场某队和二九一农场某队饲养的肉牛和奶牛，临床表现突然发病，食欲减退，反刍停止；死亡牛剖检可见心脏表面刷状出血，肝脏肿大，前胃黏膜易脱落，有点状和片状出血。真胃黏膜水肿、脱落或有弥漫性出严重出血。根据流行病学调查和血，脾肿胀不明显，被膜下或边缘部有出血点，肠管外观呈暗红色，内容物呈西红柿酱样，肠黏膜实验室诊断，鉴定为由A型产气荚膜梭菌引起的肠毒血症。报告如下。     

奶牛乳房炎链球菌分离株的鉴定及药敏试验

对从黑龙江省部分奶牛场患乳房炎奶牛乳汁中分离的10株疑似链球菌进行了培养特性、菌落形态、染色特性、生化试验等研究，确定5株为无乳链球菌，3株为停乳链球菌，2株为乳房链球菌。溶血试验结果表明，10株链球菌中有8株出现溶血现象，其中无乳链球菌有3株呈β溶血，2株呈α溶血；停乳链球菌均呈α溶血；乳房链球菌为y溶血。动物致病性试验结果表明，停乳链球菌BHI培养液腹腔接种小白鼠0.6ml,18-24后致死率达100%;接种无乳链球菌的小白鼠均有不同程度的发病,但未见死亡；乳房链球菌对小白鼠无致病性.药敏试验结果表明、链球菌对临床上常用的青、链霉素及磺胺类药物均已产生不同程度的耐药。而红霉素、喹诺酮类药物则表现出较好的抑菌效果。