傅立叶变换显微红外光谱技术在良恶性肿瘤研究中的应用

傅立叶变换显微红外光谱 (FTIRM)技术在物理、化学与分子结构研究领域中已被广泛应用 ,而医学方面的应用则是在 2 0世纪 90年代才逐步开展起来的。目前已对宫颈癌、结肠癌、肝癌、肺癌、皮肤癌与乳腺癌等细胞或组织进行了研究 ,并获得了一些有意义的结果 :(1)正常细胞组织与肿瘤细胞和组织 FTIR谱型、吸收频率、相对强度等谱学参数存在着明显的差异性 ,这些谱学差异性揭示了它们在分子水平上的组成和分子结构的差异性 ;(2 )红外光谱分析结果与病理诊断结果具有很好的相关性 ,提示红外光谱可用于肿瘤的良、恶性鉴别 ,肿瘤的分型和分级。…     

肝靶向药物Gal-HSA-5-FU对Bel-7402肝癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的了解合成的肝靶向药物半乳糖化人血清白蛋白与5-氟尿嘧啶偶联物(galactosylated human serum albu-min 5-fluorouracil conjugate,Gal-HSA-5-FU)对肝癌细胞Bel-7402细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用MTT法(噻唑蓝还原法)检测Gal-HSA-5-FU对细胞生长的抑制率和IC50,流式细胞术分析细胞周期变化,荧光染色法观察细胞凋亡。结果0.953~30.500mg.L-1Gal-HSA-5-FU分别处理Bel-7402细胞24、48、72h,细胞增殖被抑制,其增殖抑制率随药物质量浓度的增加和作用时间的延长而增高,其IC50值分别为(20.957±0.752)(、11.793±0.546)(、5.843±0.735)mg.L-1,48、72h的IC50值明显低于24h的IC50值,差异均有统计学意义(P<0.01)。相同质量浓度5-FU与Gal-HSA-5-FU作用24h,其IC50值差异无统计学意义(P>0.05)。Gal-HSA-5-FU作用Bel-7402 24h,S期细胞明显升高,G2/M期细胞明显下降。荧光染色偶见凋亡细胞。结论Gal-HSA-5-FU能抑制Bel-7402细胞增殖,且抑制作用具有剂量和时间依赖性;一定剂量的Gal-HSA-5-FU可能通过阻滞Bel-7402于S期而抑制其增殖。     

PTEN磷酸酶活性对人乳腺癌ZR-75-1细胞的迁移及粘着斑激酶磷酸化水平的影响

目的:探讨PTEN磷酸酶活性对ZR-75-1人乳腺癌细胞迁移及粘着斑激酶磷酸化水平的影响。方法:用有和无磷酸酶活性的两种PTEN表达质粒(W t和G 129)转染人乳腺癌细胞株ZR-75-1,用人工基底膜侵袭试验检测其转染前后的迁移能力,以W estern-b lot检测未转染的ZR-75-1和两种表达质粒的ZR-75-1磷酸化粘着斑激酶水平。结果:转染后有磷酸酶活性、无磷酸酶活细胞与未转染ZR-75-1细胞间侵袭抑制率、运动抑制率差异有显著性(P<0.01)。各组细胞间总FAK(粘着斑激酶)水平无明显差异,而W T-PTEN与G 129和ZR-75-1组FAK 397位酪氨酸磷化水平有明显差异。结论:PTEN具有抑制乳腺癌细胞ZR-75-1转移的作用,其机制可能与PTEN使FAK去磷酸化有关。     

高效液相色谱法简易测定血清中氨甲喋呤

氨甲蝶呤(MTX)主要用于治疗白血病、绒毛膜上皮癌、肺癌、乳腺癌及恶性淋巴瘤等。但MTX毒性反应严重,且其血药浓度个体差异大。监测MTX的血药浓度,不但可以指导临床安全用药,增强疗效,尤其在使用大剂量MTX/甲酰四氢叶酸(CF)解救疗法治疗时,还可指导救援剂的合理使用。     

纤溶酶原的分离纯化与抗血清的制备

纤溶酶原的分离纯化:经硫酸铵分段盐析、透析、Lys—Sepharose4B亲和层析、超滤浓缩、Sephadex G—15脱盐,从90ml人血浆中可分离制得8.03mg的纤溶酶原。SDS—PAGE电泳显示单一区带,分子量84400     

高效液相色谱法同时检测丙戊酸等5种抗癫痫药物在人血清和脑脊液中的浓度

本文报道一种用高效液相色谱同时检测人血清及脑脊液中丙戊酸、扑痫酮、苯巴比妥、苯妥英钠、卡马西平5种抗癫痫药物的方法.反相C_(18)柱,乙腈/甲醇/磷酸盐缓冲液为流动相,检测波长210nm,样品用硫酸铵饱和的1mol/L盐酸及少量乙腈处理。范围内线性关系好,日内、日间变异小于5％.方法简便、快速、高灵敏度,适合于药代动力学研究及临床监测.     

野生型PTEN基因重组腺病毒表达载体构建的改进及其鉴定

目的为改进构建野生型抑癌基因PTEN重组腺病毒表达载体的方法。方法用抑癌基因PTEN与带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV重组后转化含腺病毒骨架载体pAdEasy1的E.coliBJ5183(Ad-1 cells),以获得重组腺病毒质粒,经限制酶PacⅠ线性化后,转染293细胞,检测PTEN蛋白的表达,并以Ad-PTEN感染人乳腺癌MCF-7细胞后,测其感染率。结果获得PTEN基因的重组腺病毒表达载体(Ad-PTEN),受Ad-PTEN转染的293细胞发生肿胀或圆缩的形态改变,经PCR对传代的Ad-PTEN分析证实得到目的基因PTEN,荧光显微镜下能观察到293细胞内有绿色荧光。通过Western blot可检测到293细胞中PTEN蛋白高效表达。Ad-PTEN感染的人乳腺癌MCF-7细胞,感染率达80%~90%。结论PTEN重组腺病毒表达载体可在细菌体内进行同源重组而构建,方法较简便、快速,且生成的病毒滴度高、感染率高。     

重组抗LMP1单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建及表达

目的体外拼装人抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1单链抗体(LMP1 scFv)/截断的鱼精蛋白截短体(truncatedprotamine,tP)融合基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌中诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白。方法设计融合基因LMP1 scFv/tP,在LMP1 scFv/tP的5’和3’端设计EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点;在DNAWORKS程序指导下设计成22个相互互补的寡核苷酸序列,经PCR扩增获得融合基因LMP1 scFv/tP,再将目的基因片段亚克隆至pMD 18-Tsi mple载体中,经过酶切鉴定和测序验证。进一步将目的基因片段克隆至原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白并经SDS-PAGE和western blot验证。结果各寡核苷酸片段经PCR扩增后可见明确的产物带,将获得的LMP1 scFv/tP融合基因构建至原核表达载体pET32a,经IPTG诱导后成功表达目的蛋白。结论成功获得LMP1 scFv/tp融合基因,并在大肠杆菌中成功诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白,为该融合蛋白用于LMP1相关肿瘤的基因治疗奠定基础。     

基因治疗乳腺癌的研究进展

乳腺癌是一种常见的妇科肿瘤,约占全身恶性肿瘤的7%~10%,近20年来在我国的发病率逐渐升高,已严重威胁女性健康,仅次于宫颈癌。针对早期(Ⅰ、Ⅱ期)乳腺癌的治疗方法有外科手术切除、放疗、内分泌治疗以及使用抗肿瘤药物进行治疗(如紫杉醇、维甲酸类等),但对晚期乳腺癌的治疗效果     

以GFP为报告基因优化CNE-2Z细胞脂质体转染条件的实验研究

目的：为在脂质体介导基因转染人低分化鼻咽癌上皮细胞株CNE-2Z时获得较高转染效率，同时观寨GFP作为报告基因用于脂质体转染条件优化的可行性。方法：以GFP为报告基因，通过比较碱裂解法与PEG纯化法制备质粒；改变DNA、脂质体量及转染时间，在荧光显微镜下观察并计算转染效率。结果：在35mm培养皿中．2μgDNA与4μL脂质体转染CNE-2Z细胞8h，转染效率最高，且在显微镜下观察不到细胞的形态变化。结论：在35mm培养皿中，2μgDNA与4μL脂质体转染CNE-2Z细胞8h，可获得最佳转染效率，GFP可作为报告基因优化脂质体转染条件。