虾夷马粪海胆致病菌强壮弧菌的PCR检测方法

强壮弧菌Vibrio fortis是虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius的一种致病菌.为建立强壮弧菌的PCR检测方法,根据强壮弧菌gyrB基因的高度变异区序列设计引物,筛选出特异性强的3对引物VF-6、VF-7及VF-8,分别对强壮弧菌S0907及20株参比菌株进行PCR扩增,结果显示,3对引物均对强壮弧菌扩增出与预期大小一致的目的基因片段且参考菌株无扩增条带.以不同稀释度的菌悬液制备的DNA模板进行PCR扩增,结果显示,3对引物VF-6、VF-7及VF-8可检测的最低细菌浓度分别为4.1×104、4.1×103、4.1 ×102cfu/mL;对不同稀释度的细菌DNA模板进行PCR扩增,结果显示,3对引物VF-6、VF-7及VF-8可检测的最低DNA含量分别为1.4、0.14、0.014 pg/μL.试验结果表明:3对引物的特异性均较好,但灵敏度存在差异,其中以VF-8为引物的PCR检测方法最佳;使用以VF-8为引物的PCR检测方法对实验室养殖海胆及其生境样品进行初步检测,健康海胆、养殖海水及投喂的海带均为阴性,而自然海域海水中带有一定量的强壮弧菌.     

虾夷马粪海胆CYP51基因cDNA的克隆及其SNPs分析

采用RT-PCR、PCR-SSCP等分子生物学技术和关联分析等方法对虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius CYP51基因的cDNA序列进行了克隆和单核苷酸多态性分析.结果表明:虾夷马粪海胆的CYP51基因包括一个1491 bp的开放阅读框,编码496个氨基酸;其开放阅读框的第161个核苷酸处存在1个单核苷酸多态性,即核苷酸发生了A→G突变.关联分析结果表明,该单核苷酸多态性与虾夷马粪海胆的体质量、性腺质量之间存在显著相关性(P＜0.05).本研究中首次克隆了虾夷马粪海胆CYP51基因的cDNA序列并进行了SNPs分析,研究结果可为虾夷马粪海胆的分子标记辅助育种提供参考.     

大泷六线鱼鳍、吻端和肾脏组织原代培养的研究

应用组织块培养法,研究了大泷六线鱼Hexagrammos otakii鳍、吻端和肾脏细胞在含有体积分数为20％胎牛血清(FBS)的L-15、DMEM和DMEM/F12 3种培养基中的生长情况,以及人碱性成纤维细胞(bFGF)、硫酸软骨素、Ⅰ型胰岛素样(IGF-Ⅰ)3种生长因子对细胞贴壁率和迁出率的影响.结果表明:大泷六线鱼鳍、吻端和肾脏细胞适宜的体外培养体系为DMEM/F12培养基+20％ FBS,pH为7.2,温度为25℃;在最适培养基中分别添加5.0 ng/mL bFGF、20 μg/mL硫酸软骨素、40 ng/mL IGF-Ⅰ时,3种组织的贴壁率和细胞迁出率均最高;鳍、吻端和肾脏组织分别经培养21、15、18 d后长满单层,主要为成纤维样细胞;采用低渗滴片法制备染色体,3种组织原代细胞的染色体数目为48条.本研究为大泷六线鱼鳍、吻端和肾脏组织细胞系的构建和生物学特性的研究奠定了基础.     

浓缩方法及保存条件对小球藻藻膏脂肪酸的影响

研究了不同浓缩方法 （离心法、明矾絮凝法和壳聚糖/海藻酸钠混合溶液絮凝法）对蛋白核小球藻Chlorella pyrenoidesa粗脂肪和脂肪酸含量的影响,以及在不同保存条件下（常温、冷藏和冷冻）藻膏脂肪酸含量的变化规律。结果表明：1）离心浓缩组（简称离心组）粗脂肪的质量分数占干物质的23.38%,壳聚糖/海藻酸钠混合絮凝浓缩（简称壳/海组）为14.12%,明矾絮凝浓缩组（简称明矾组）仅为4.17%,3组的粗脂肪含量之间均存在显著差异（P〈0.05）。2）用3种浓缩方法得到的藻膏中均检测出相同种类的脂肪酸,其中主要脂肪酸为16：0、16：1和20：5n-3。但3组之间各种脂肪酸含量存在不同程度的差异,明矾组的多不饱和脂肪酸总量（38.55%）分别为离心组（50.87%）和壳/海组（52.23%）的76%和74%,而饱和脂肪酸总量（31.74%）约为离心组（20.33%）和壳/海组（19.07%）的1.6倍和1.7倍。3）小球藻藻膏分别在常温（14.5～18.5℃）下保存3周、4℃下保存8周、-24℃下保存半年时,其脂肪酸种类保持不变,大部分脂肪酸的含量也无明显变化;但在-24℃下保存1年时,20：5n-3脂肪酸和多不饱和脂肪酸分别由初始值的41.81%和50.87%减少至39.50%和47.84%,而单不饱和脂肪酸则由初始值的27.54%增加至30.20%。     

卜氏晶囊轮虫休眠卵全卵膜的超微结构观察

在扫描电镜下研究了卜氏晶囊轮虫Splanchnabrightwelli休眠卵卵膜的亚显微结构,并对卵膜与休眠卵功能的关系进行了探讨。结果表明：卜氏晶囊轮虫休眠卵卵膜分三层,其中第一层卵膜（S1）包括两小层,即外表有乳状突起的第一小层（ML）和弹簧状的第二小层（SL）,ML层外表乳状突起之间有的有小桥相连,有的无小桥相连,而SL层纵面观似弹簧状,外表面（与ML层卵膜接触的面）有较大的突起和较多的孔,内表面（与第二层接触的面）较光滑且突起较小;第二层卵膜（S2）纵面观均匀致密;第三层卵膜（S3）紧包胚胎,外表面光滑。从本试验结果推测,晶囊轮虫休眠卵第一层的第二小层卵膜的弹簧状结构装置,很可能是晶囊轮虫休眠卵休眠期间存放休眠卵产出气体的地方。     

仿刺参肠多糖提取物对小鼠实体瘤的抑制作用

采用碱解、酶解和醇沉淀法提取仿刺参Apostichopusjaponicus肠组织中的粗多糖（简称肠多糖）,通过构建小鼠I-122肝癌实体瘤模型,采用腹腔给药途径,研究了不同剂量的肠多糖[200、100、50mg／（kg·d）]对小鼠实体瘤的抑制作用,并测定了小鼠的脾脏指数、胸腺指数以及血清中肿瘤坏死因子（TNF—α）和白细胞介索2（IL-2）的含量。结果表明：肠多糖对患H22肝癌小鼠的实体瘤具有显著的抑制作用,肠多糖高剂量组小鼠的瘤质量与肿瘤对照组差异极显著（P〈0．01）,肠多糖中、低剂量组的瘤质量与肿瘤对照组差异显著（P〈0．05）,肠多糖高、中、低剂量的抑瘤率分别为90．1％、85．2％和71．7％;各肠多糖组小鼠的脾脏指数与肿瘤对照组均无显著差异（P〉0．05）,但随着肠多糖剂量的上升,小鼠的脾脏指数也上升;各肠多糖组小鼠的胸腺指数均高于肿瘤对照组,除肠多糖低剂量组外其余各组均与肿瘤对照组差异显著（P〈0．05）;肠多糖高剂量组小鼠血清中的IL-2含量极显著高于3个对照组（P〈0．01）,而肠多糖中、低剂量组血清中的IL-2含量与肿瘤对照组、给药健康对照组均无显著差异（P〉0．05）;肠多糖高、中、低剂量组小鼠血清中的TNF—α含量与3个对照组均无显著差异（P〉0．05）。     

高分辨溶解曲线及其在检测海洋经济贝类SNPs的应用前景

介绍HRM的技术原理以及在检测SNPs中的应用进行综述,对其在海洋经济贝类检测SNPs的应用展望,希望可以为海洋经济贝类的遗传多样性和育种、增产提供一定基础。     

泥鳅鳍细胞系的构建及特性分析

采用组织块培养法对泥鳅Misgurnus anguillicaudatus鳍组织细胞进行原代培养,并采用胰蛋白酶消化法传代,目前已传63代。原代培养和早期传代培养所用培养基为DMEM/F12,并添加体积分数为20%的胎牛血清(FBS)、10 ng/mL人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、20 ng/mLⅠ型胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)和10μg/mL硫酸软骨素。30代以后所用培养基为20%FBS-DMEM/F12,在CO2培养箱(5%,25℃)中培养,培养的鳍细胞形态为成纤维细胞样,群体倍增时间为56.85 h,特征染色体数目为50条;细胞经液氮冷冻保存30 d,解冻复苏后,存活率为81.31%±1.46%。病毒敏感性试验结果表明,泥鳅鳍细胞系对鲤春病毒血症病毒(SVCV)敏感,病毒滴度为105.62TCID50/mL,而对鱼类诺达病毒(YGNNV)不敏感。泥鳅鳍细胞系的建立丰富了鱼类细胞系的种类,并为泥鳅毒理学、病毒学的研究提供了科学依据。     

皱纹盘鲍SRAP反应体系的正交优化

采用L16(45)正交试验设计方法,对影响皱纹盘鲍Haliotis discus hannai SRAP反应体系的Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、模板DNA以及Taq酶活性进行了优化,建立了适用于皱纹盘鲍的SRAP反应体系。优化后的反应体系(10μL)包括Mg2+1.5 mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物0.2μmol/L,Taq酶活性0.25 U,模板DNA 20 ng。采用不同模板和引物对体系进行验证,表明优化后的反应体系能够高效地扩增出可识别条带,为进一步应用SRAP标记对皱纹盘鲍进行遗传分析奠定了基础。     

温度、盐度对香螺幼螺耗氧率和排氨率的影响

采用实验生态学方法,研究了不同温度和盐度对壳长为(3.41±0.25)cm的香螺Neptunea cumingii幼螺呼吸和排泄的影响。结果表明:温度和盐度对香螺幼螺耗氧率、排氨率、氧氮比(O∶N)均有极显著影响(P<0.01);在一定盐度范围内,试验组香螺幼螺的耗氧率和排氨率均随盐度的升高呈现出先增加后降低的趋势,当盐度为19³4时,耗氧率随盐度的升高而增加,超过34时,随盐度的升高而不断降低;当盐度为1934时,耗氧率随盐度的升高而增加,超过34时,随盐度的升高而不断降低;当盐度为19²9时,排氨率随盐度的升高而增加,超过29时,随盐度的升高而不断降低;耗氧率(RO)和排氨率(RN)与盐度(S)的相关方程分别为RO=-0.0006S2+0.0382S-0.4622(R2=0.9115)和RN=-0.0001S2+0.0049S-0.0451(R2=0.5529);在温度试验中,试验组香螺幼螺耗氧率和排氨率随温度(T)的升高也呈现出先增加后降低的趋势,耗氧率与排氨率最高时对应的温度分别为20、25℃,相关方程分别为RO=-0.0014T2+0.0514T-0.2074(R2=0.8017)和RN=-0.0013T2+0.0078T+0.0109(R2=0.8260)。研究表明,香螺幼螺生存的最适宜温度为20℃,适宜盐度范围为2929时,排氨率随盐度的升高而增加,超过29时,随盐度的升高而不断降低;耗氧率(RO)和排氨率(RN)与盐度(S)的相关方程分别为RO=-0.0006S2+0.0382S-0.4622(R2=0.9115)和RN=-0.0001S2+0.0049S-0.0451(R2=0.5529);在温度试验中,试验组香螺幼螺耗氧率和排氨率随温度(T)的升高也呈现出先增加后降低的趋势,耗氧率与排氨率最高时对应的温度分别为20、25℃,相关方程分别为RO=-0.0014T2+0.0514T-0.2074(R2=0.8017)和RN=-0.0013T2+0.0078T+0.0109(R2=0.8260)。研究表明,香螺幼螺生存的最适宜温度为20℃,适宜盐度范围为29³4。