不同倍性泥鳅鳍细胞培养及染色体标本制备方法的研究

以天然二倍体、杂交三倍体(4n♀×2n♂)和天然四倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的鳍组织为材料,对短期培养的消毒方法、秋水仙素的浓度(1.0、1.5、2.0μg/mL)与处理时间(2、3、4 h)和低渗处理时间(30、40、50 min)等细胞培养技术,及染色体标本制备方法进行了研究。结果表明:选择100 g/L的碘伏溶液杀菌效果良好,对于细胞生长影响较小,尤以处理15 min时的效果最明显,细胞迁出迅速;在终止培养前3 h加入秋水仙素至终浓度为1.5μg/mL,天然二倍体、杂交三倍体和天然四倍体泥鳅鳍细胞中期分裂相染色体众数最高,分别为93.33%、90.00%、70.00%;25℃下低渗处理40 min时,可以获得大量图像清晰、长度适中、分散良好、染色体数目完整的染色体中期分裂相。本研究中初步建立了以鳍组织培养法作为材料来源快速制备不同倍性泥鳅染色体标本的方法。     

饵料中添加芽孢杆菌BC26对刺参幼参消化酶、免疫反应和抗病力的影响

将浓度为105、107、109CFU/g(饵料)的芽孢杆菌BC26添加到基础饵料中,用每一浓度的饵料投喂一组刺参幼参(1.374 g±0.558 g),对照组投喂基础饵料,每组均设3个平行,试验在12个盛有100 L过滤海水的塑料桶中进行,每桶放50头幼参,饲养试验共进行45 d。试验结束后,分析芽孢杆菌BC26对幼参肠道消化酶活力、免疫反应和抗病力的影响。结果表明:投喂芽孢杆菌BC26饵料的各组幼参肠道中的胰蛋白酶、脂肪酶活力,以及体腔液中的酚氧化酶、总一氧化氮合酶活力均极显著高于对照组(P<0.01);投喂浓度为107、109CFU/g(饵料)的芽孢杆菌BC26组幼参体腔细胞的吞噬活力极显著高于对照组(P<0.01);用病原菌灿烂弧菌NB13攻毒各组幼参,投喂芽孢杆菌BC26组的幼参发病率和死亡率明显低于对照组。研究表明,饵料中添加芽孢杆菌BC26可促进刺参消化和增强免疫功能,并提高其抗病力。     

虾夷马粪海胆溶菌酶基因SNP标记的开发及多态性分析

采用高分辨率熔解曲线分析技术（HRM）对虾夷马粪海胆溶菌酶基因进行突变扫描,筛选出26个SNP候选位点。其中,碱基置换类型位点16个,占位点总数的61.54%;碱基插入或缺失的位点6个,缺失的碱基数为1~4个不等,占位点总数的23.08%;碱基置换类型模糊以及三态位点4个,占位点总数的1538%。SNP在虾夷马粪海胆溶菌酶基因的cDNA中的分布频率约为2.85%,位于编码区的位点有18个,其中2个为错义突变。应用小扩增子基因分型法对5个SNP位点在2个不同地域群体的60个样本中进行分型分析,结果显示：5个SNP位点均含有2个等位基因,次等位基因频率分布范围为0.150 0~0.500 0,位点SILyz-7、SILyz-15和SILyz-20在两个群体间的次等位基因频率相差较大。研究结果表明,HRM是一种高效便捷的SNP分析方法,所筛选出的SNP标记可用于虾夷马粪海胆遗传育种的研究。     

德国镜鲤和不同倍性泥鳅银染核型的比较研究

采用PHA体内二次注射法及快速银染法对德国镜鲤和不同倍性的泥鳅进行银染核型的比较研究。结果表明,德国镜鲤中期分裂相及间期核中呈现出Ag-NORs的数目为1～2个,含有2个Ag-NORs频率最高,分别为80%和56%。二倍体泥鳅中期分裂相及间期核中呈现出Ag-NORs的数目为1～2个,含有2个Ag-NORs频率最高,分别为72%和60%。四倍体泥鳅中期分裂相及间期核中呈现出Ag-NORs的数目为1～4个,中期分裂相中含有3个Ag-NORs,频率最高为36%,间期核中含有2个Ag-NORs,频率最高为40%。德国镜鲤2n=100,核型组成为30m+26sm+30st+14t,NF=156。NOR的染色体在核型中位置和NORs在染色体上的位置是:sm组第8号染色体的短臂末端。二倍体和四倍体泥鳅NOR的染色体在核型中位置和NORs在染色体上的位置均是:m组第1号染色体的短臂末端。研究结果证实德国镜鲤与中国鲤鱼一样,是多倍化后经历二倍化过程演变而来,是二倍化的四倍体,即染色体数目为2n=100。四倍体泥鳅进行加倍后未发生二倍化或在二倍过程中,是遗传四倍体,染色体数目为4n=100。     

不同家系红鳍东方鲀形态差异研究

采用聚类分析、主成分分析和判别分析3种多元分析方法,结合传统形态学测定和框架测定,对红鳍东方鲀4个家系进行形态差异比较。主成分分析提取了9个主成分,累计贡献率为69.945%。通过对8个贡献率较大的形态变量进行逐步判别分析,建立了4个家系的判别公式,综合判别率为64.8%;聚类分析结果表明,家系3与家系4形态差异最小,可取其一。3种多元分析结果表明,红鳍东方鲀4个家系群体在形态上已经产生一定程度的差异,可以选取家系1、家系2、家系3进行进一步的选育。     

几种微生态制剂对刺参生长和养殖水体水质的影响

在刺参幼参培育水体中,定期加入由乳酸杆菌、海洋红酵母、芽孢杆菌、光合细菌4种微生态制剂按不同比例复合成的复合微生态制剂,通过测定幼参培育水体中的p H、化学需氧量(COD)、氨态氮、亚硝酸态氮、活性磷等水质指标和幼参的生长指标,探讨微生态制剂对幼参培育水体氨氮等水质变化的影响以及对幼参生长的影响。结果表明:在幼参培育水体中加入一定配比乳酸杆菌、海洋红酵母、芽孢杆菌和光合细菌,在一定程度上能降低水体中的氨态氮、亚硝酸态氮等有害物质。其中试验Ⅴ组(按配方5添加)对养殖水体中氨态氮、亚硝酸态氮等物质的调节作用和对幼参生长的促进作用最显著(P0.05)。     

不同时期刺参养殖池塘海水菌群结构分析

对辽宁省大连市瓦房店刺参养殖池塘海水菌群结构组成和变化情况进行分析,采集不同时期刺参养殖池塘海水,扩增细菌16S rDNA基因V3可变区序列,进行变性梯度凝胶电泳（DGGE）,分析指纹图谱,并对主要条带进行切胶、回收和测序。结果表明,不同时期海水各样品的多样性指数在1.994 5~2.230 5之间,均匀度差异不大,样品的丰富度在42~48之间。不同时期海水中3月和9月的菌群结构最为相近（80%）,6月与其他各时期聚类距离最大。对39个主要条带的测序结果表明,12个条带与未培养细菌相近,1个条带与放线菌纲（Actinobacteridae）的菌株相似,另外26个条带相似菌株分别归类为黄杆菌纲（Flavobacteria）、α-变形菌纲（Alpha proteobacteria）、γ-变形菌纲（Gamma proteobacteria）。黄杆菌纲、α-变形菌纲和γ-变形菌纲在各时期海水中均有出现,其中黄杆菌纲优势度最高,占23.8%~50.0%。不同时期养殖池塘海水菌群的结构相对稳定,但具体菌种存在差异。     

水族馆鲐鱼人工饲养试验

<正>鲐鱼(Pneumatophorus japonicus)又名青花鱼、鲭鱼、鲐鲅鱼等,鲈形目、鲭科、鲐属。身体粗壮,呈纺锤形,体背呈青蓝色,有不规则深蓝色横纹或斑纹,尾鳍基部每侧有两个纵隆起嵴。鲐鱼为海洋洄游性上层鱼类,游泳力强,游速快,并且有集群活动的习性,具有很高的观赏价值。鲐鱼分布于北太平洋西部的中国、朝鲜、日本及俄罗斯远东地区海域,鲐鱼     

口虾蛄胚胎发育的研究

在室内控温条件下对口虾蛄Oratosquilla oratoria的胚胎发育过程进行了观察。结果表明：口虾蛄从产卵到初孵假溞状幼体,需要经历受精卵、卵裂期、囊胚期、原肠期、膜内无节幼体期、膜内溞状幼体期6个主要时期;水温为（21±1）℃、盐度为29时,口虾蛄胚胎发育历时18 d;水温、洞穴、光周期、饵料等因素均能影响亲虾蛄抱卵和幼体孵化。     

泰国斗鱼的胚胎发育及温度对胚胎发育的影响

观察了泰国斗鱼Betta splendens受精卵的形态和胚胎发育的过程,研究了温度对胚胎发育的影响。试验设置5个温度组（20、23、26、29、32℃）,记录各温度下胚胎发育历时、孵化率和畸形率,共重复5次。结果表明：水温为20～32℃时,泰国斗鱼受精卵均能孵化,最适孵化温度为26～29℃。孵化温度T与孵化时间t呈负相关,相关方程为t=18878T-1.8528（R2=0.9811）;泰国斗鱼胚胎发育的生物学零度为11.08℃,有效积温为659.39℃.h。