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我国犬瘟热病毒的生态学调查研究 总被引:25,自引:0,他引:25
本研究应用电子显微镜技术检查了17个毛皮动物和野生动物的676份材料,从犬,貂,貉,狐熊,小熊猫,大熊猫,狼,狮,虎,猞狮、金猫等12种动物病料中,检出含有CDV材料487份。应用间接ELISA、免疫荧光和中和试验等技术检测了8种动物158份血清,其中从犬,狐,小熊猫、虎、金猫,狼等6种动物的106份血清中检出了抗CDV抗体。应用RT-PCR和基因探针检查了4种动物的37份材料,其中有29份阳性。 相似文献
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为了建立一种快速、敏感、特异的检测犬冠状病毒(CCV)的方法,利用感染CCV的犬肾传代细胞包被酶联反应板,以辣根过氧化物酶标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)作为第2抗体,建立了检测CCV抗体的间接ELISA方法。抗原的包被量为每孔3×104个染毒细胞,酶标抗体的工作浓度为1∶40。试验发现,包被的病毒抗原经甲醇固定30min后可以提高试验的敏感性,减少病毒抗原的使用量。与中和试验比较证实,2种抗体检测方法的测定结果呈正相关 相似文献
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首次对犬冠状病毒V1野毒株核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定.根据GenBank中报道的CCV Insavc-1株N基因序列,设计了1对特异性引物,对分离的CCV V1野毒株进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的阳性PCR片段经纯化后与pGEM-T连接得到重组质粒pTN1,进行核苷酸序列测定,并与GenBank中CCV标准毒株Insavc-1 N基因进行了比较.结果该基因全长为1 146 bp,编码382个氨基酸,两者核苷酸的同源性为91.7%;推导的氨基酸序列的同源性为90.2%,显示出较高的保守性.在V1野毒株推导的N蛋白N端156-179位存在一个SRXX富集区,与小鼠肝炎病毒相应区域相同,推测可能是RNA结合区.另外,推导的该蛋白氨基酸序列其疏水性和抗原表位与标准毒株Insavc-1 N蛋白存在一定的差异;在氨基酸组成上,该蛋白丝氨酸和赖氨酸含量高达9.84%,提示该蛋白具有高度螺旋和缠绕的分子结构. 相似文献
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犬瘟热病毒F1基因的原核表达与初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
将犬瘟热病毒(CDV)F1基因定向克隆入pET-28a( )载体.构建了原核表达质粒pET-28F1。pET-28F1转化宿主菌BL21(DE3)plysS.在IPTG的诱导下.可高效表达目的基因,表达量达菌体蛋白总量的23.52%。Western blot分析表明,所表达蛋白能与抗CDV阳性血清发生特异性的抗原-抗体反应。以E.coli表达的CDV F1蛋白为抗原.HRP标记的兔抗犬IgG为二抗.建立了检测抗CDV抗体的间接ELISA方法。试验表明.应用CDV F1蛋白作为抗原检测抗CDV抗体具有特异性高、抗原易纯化、成本低等特点。 相似文献
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用PCR技术鉴定犬传染性肝炎病毒强、弱毒株的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
根据Genebank中发表的犬传染性肝炎病毒 (ICHV)标准强毒株Glaxo和人工驯化的弱毒疫苗株CLL的保守序列间大小不同 ,按照引物设计的原则 ,设计合成了一对通用引物。该对引物可由ICHV强毒株扩增出 569bp的片段 ,而弱毒株可扩增出 2 4 4bp的片段。对PCR产物分别进行电泳、酶切和测序 ,证明PCR产物片段大小、酶切位点和核苷酸序列与设计的产物完全一致。正常DK细胞上清和犬传染性喉气管炎病毒 (CAV 2 )强、弱毒株细胞培养物均不能被该引物扩增 ,说明具有良好的特异性。其检测到的病毒量分别为 1 5TCID50 、 31TCID50 、说明该技术具有很高的敏感性。可用于ICHV强、弱毒株的鉴定和ICH的诊断 相似文献
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对MDCK细胞上驯化克隆产毒量高的大斑株 (LP)的第 5 0代毒和 75代毒进行了实验免疫研究 ,结果表明该毒株具有安全性好 ,通过静脉和口鼻接种CAV易感犬 ,无任何致病反应 ;用10 4 .0 TCID50 以上的该毒免疫CAV易感犬 ,即获得 97.5 %以上的免疫保护 ;将其在CAV易感犬连续传 5代 ,其安全性与原毒相同 ,表明该毒株在 5 0~ 75代之间遗传性稳定 ,免疫原性良好 ;与CPV和CDV弱毒联合免疫 ,结果与各弱毒单独免疫所产生的抗体无差异 ,说明该毒株不但可以单独用于免疫 ,也可与其他弱毒联合免疫。是一株较好的疫苗候选株 ,具有开发应用价值。 相似文献
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犬瘟热疫苗弱毒的复壮与免疫试验 总被引:4,自引:0,他引:4
将一株犬瘟热疫苗株病毒通过Vero细胞20代(CDV/R-20)后又通过敏感犬的腹腔巨噬细胞,获得一株免疫原性更高的弱毒株(CDV/R-20/8)。接种同样剂量104TCID50的CDV/R-20/8和CDV/R-20的犬,产生出血清中和(SN)抗体价的几何平均数分别为1:54和1:26。前者为后者的2倍多。接种105TCID50的CDV/R-20/8能完全保护犬(10/10)抵抗CDV强毒的攻击,接种104TCID50的保护9/10犬,而对照犬5只全部发病,其中4只死亡。犬体内SN价可持续一年之久。冻干培养物在4和-30℃中可分别保存9个月和12个月而效力不减。 相似文献
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犬细小病毒基因型的调查 总被引:16,自引:3,他引:16
采用 PCR方法扩增了 13株犬细小病毒 ( canine parvovirus,CPV) VP2基因的 2个片段 ,通过序列测定和 DNAS-tar软件分析 ,结果显示 ,我国的 CPV分离株也存在基因变异现象 ,除发现 CPV- 2、CPV - 2 a、CPV- 2 b突变株外 ,还发现在 CPV- 2 a基础上进一步进化产生的 2个新的变异株。在我国 ,CPV- 2曾在 2 0世纪 80年代早期流行 ,但 1986年后分离到的 CPV以 CPV- 2 a为主 ,在 2 0 0 2年送检的 8份病料中分离到 4株 CPV- 2 a和 4株 CPV- 2 b。PV/貉 / CC/ 1/ 86在CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 30 0 G→ S替换 ,PV/犬 / JL / 1/ 0 2在 CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 5 6 4 S→ N替换 ,其确切的生物学意义尚不清楚。我国的 CPV分离株与参考毒株的核酸同源性超过 98% ,没有形成明显的中国CPV分支 ,进化方式与文献报道的进化方式一致 相似文献