猪断奶后多系统衰竭综合征诊断方法的系列研究

本研究对猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的诊断方法临床症状和病理变化、病毒的分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、间接免疫荧光试验(IFA)、间接酶联免疫吸附试验(IELISA)、免疫组织化学试验(IHC)等进行了系列研究,这些方法适用于猪断奶后多系统衰竭综合征的诊断.     

禽脑脊髓炎病毒VP1基因的克隆及表达

应用RT-PCR方法,扩增出AEV Van-roekel株结构蛋白基因VP1,测序结果表明VP1基因全长810bp,编码270个氨基酸;和AEV 1143株相比,核苷酸同源性为94.2%,氨基酸同源性为99.26%.将VP1基因定向克隆到pGEX-6p-1载体谷胱苷肽转移酶基因的下游,并把重组质粒转入宿主菌BL21中,经IPTG诱导后,VP1基因得以表达.表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,确定表达的融合蛋白大小约为58Ku,且具有良好的反应原性.将表达产物纯化后免疫试验兔,琼脂扩散试验显示免疫血清能与禽脑脊髓炎琼脂扩散标准阳性抗原呈特异反应,表明重组VP1蛋白保留了天然蛋白的部分活性.     

猪断乳后多系统衰竭综合征诊断技术研究进展

猪断乳后多系统衰竭综合征（PMWS）是一种由猪圆环病毒2型（porcinecircovirus2，PCV-2）引起的新病。PMWS主要感染1—5月龄猪，发病率为4％-30％，致死率为70％-80％。断乳猪和生长猪临床表现为进行性消瘦、呼吸困难、皮肤苍白、黄疸、腹泻和体表淋巴结肿大。多种组织发生广泛的肉芽肿性炎症，肉芽肿性淋巴结炎、间质性肺炎、肝炎、间质性肾炎和胰腺炎。病理组织学变化主要是淋巴细胞组织不同程度的衰竭萎缩，淋巴细胞减少。世界许多养猪国家都发生了本病，我国也有流行。PMWS严重影响猪的生长发育，没有有效的治疗方法，尚无有效疫苗可供应用，因此本病的正确诊断尤为重要，现将有关进展综述如下。     

禽多杀性巴氏杆菌PCR诊断方法的建立

随着现代分子生物学和生物信息学的发展,PCR技术已经在病原检测方面得到了广泛的应用.试验旨在利用PCR技术建立一种禽巴氏杆菌病原的快速、特异性强的检测方法.     

SYBR Green Ⅰ荧光RT—PCR检测新城疫病毒的研究

新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种高度接触性、急性、败血性禽类传染病.NDV为副黏病毒科副黏病毒亚科禽腮腺炎病毒属单股负链RNA病毒.近年来,新城疫呈现散发性和非典型性流行.在临床上,非典型的新城疫在呼吸道症状上和禽流感(AI)、鸡传染性支气管炎(IB)、鸡传染性喉气管炎(ILT)极为相似,因此给本病的确诊增加了难度,故开发出快速、灵敏、特异的诊断方法显得极为重要.     

鸡新城疫V_4株油乳剂灭活苗免疫效果观察

鸡新城疫V_4株油乳剂灭活苗接种1月龄SPF来航鸡,进行了正常免疫剂量的安全性试验和接种前后血凝抑制抗体效价的动态监测。结果,此灭活苗是安全的;接种后10d产生免疫力,效价为6.8log2,40d效价达高峰10.3log2;210d其效价仍为6.4log2。同时在免疫接种后40d进行了攻毒试验,5/5保护。     

波纳病

波纳病(Borna disease,BD)是由波纳病病毒引起的马的一种传染性脑脊髓炎,亦称马地方流行性脑脊髓炎。本病因于1894年在德国波纳地区严重流行而得名。本病在德国曾周期性发生,以后在东欧、中东及北非相继发生。现已在美国、德国、荷兰、波兰、以色列、伊朗、北非和日本都检出了临床健康而血清学阳性的马匹。有关本病的报道最早可以追朔到1660年,文中描述了一种马的头痛病,此病可导致马反应迟钝和听力丧失。后来有研究报道该病还具有嗜睡、抑郁、焦躁不安等症状。1822年有报导较为详尽的描述这种脑部炎症。1900年前后,因本病在德国波那城周…     

猪圆环病毒Cap蛋白羧基端特异性单克隆抗体的制备

利用IPTG诱导表达含有猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白羧基端421-37nt的重组大肠杆菌pGEX-PCV421-37,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)粗分离,免疫BALB/c小鼠,利用PCV2感染PK15细胞筛选PCV2特异性单克隆抗体.共获得5株,腹水的IFA效价范围为1:1 600～1:8 000;除单抗26H5-A3为IgG1亚型外,32A8-G5、33G10-F4、12B5-G3和14E12-A6全部为IgM型;全部轻链都属κ型.     

小反刍兽疫病毒芯片式数字PCR检测方法的建立及应用

为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）检测方法,建立了一种芯片式数字PCR（cdPCR）检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75 /1疫苗株N基因序列设计1对引物,PCR扩增大小为166 bp片段,构建pMDTM18-N标准质粒并优化反应条件,建立了PPRV N基因cdPCR检测方法,并与实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果显示：当质粒标准品浓度在1.22×（105~102）copies/μL范围时,cdPCR检测方法比普通RT-PCR灵敏度高1 000倍,且稳定性好,特异性强;当标准品浓度在1.22×（105~10-3）copies/μL范围时,cdPCR与RT-qPCR相比具有相同的特异性,但灵敏性比RT-qPCR高100倍;与RT-qPCR 测定结果（13.29±6.74）copies/μL相比,cdPCR的最低检测限更低,约为（0.44±0.14）copies/μL;cdPCR对47份临床样本的PPRV核酸阳性检出率（25.5%）高于RT-qPCR（17.0%）。结果表明,建立的cdPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为预防PPR早期流行提供了一种快速有效的诊断和定量检测方法。