抑制性消减杂交技术在对虾基因克隆中的应用

抑制性消减杂交技术是一项筛选、分离未知差异表达基因的试验方法,该技术具有快速、简便、灵敏、特异、高效,所需起始样本量较少等优点。利用该技术构建对虾组织消减cDNA文库,鉴定差异表达相关基因及其表达特性。通过对对虾差异性表达的免疫相关基因、抗病基因及其他性状基因的了解,旨在为进一步研究对虾抗病机理奠定基础,为利用抗病基因进行抗病育种提供一个有效途径,为提高对虾的经济效益提供前景。     

犬尿石症诊断与治疗研究

随着经济的发展,宠物犬的饲粮水准不断提高。由于饲粮结构的不合理造成尿石症发病率逐年增加,病犬表现尿急、尿频、尿血或排尿困难,甚至尿闭。依2004年到2006年门诊95例犬尿石症资料,对发病率、年龄、性别、日粮、品种间的关系进行分析。结果表明,犬尿石症发病主要集中在2岁~5岁,发病率较高的犬种是京巴,雄性犬发病率略高于雌性犬。通过日粮调查,日粮中蛋白含量越高其发病率越高。临床统计发现,犬膀胱结石发病率最高,其次是膀胱尿道混合型,单纯尿道结石最少。手术是治疗犬尿石症有效手段,治愈率达到81%以上。早期尿道结石采用保守疗法效果较好。     

TGF-β1基因真核表达载体的构建及在猪脐静脉内皮细胞中的表达

应用RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞扩增转化生长因子β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）全基因,构建含有TGF-β1基因及EGFP报告基因的真核表达质粒pEGFP-C1-TGF-β1。采用脂质体法转染体外培养的猪脐静脉内皮细胞（SUVECs）后,通过直接荧光观察pEGFP-C1-TGF-β1融合蛋白在细胞中的分布定位,并通过RT-PCR、间接免疫荧光方法检测TGF-β1基因在SUVECs中的表达。结果在转染后1周观察到绿色荧光,RT-PCR、间接免疫荧光法检测TGF-β1表达均为阳性。本研究成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pEGFP-C1-TGF-β1,且TGF-β1基因在SUVECs中获得表达。     

猪支气管黏膜上皮细胞的分离培养和传代研究

利用气管-支气管扎结灌注酶冷消化法分离气管黏膜上皮细胞,比较胰蛋白酶和链霉蛋白酶消化效果,并研究含不同细胞生长因子和血清浓度的培养体系来寻找经济、易重复的气管上皮细胞最适培养技术。用抗8/18细胞角蛋白免疫组化法鉴定气管上皮细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡来分析本研究中气管上皮细胞最大传代次数。研究结果表明胰蛋白酶消化气管所得的目的细胞量小、活性差、细胞贴壁和生长困难,链霉蛋白酶灌注冷消化法可获得数量大、活性高、纯度好的目的细胞;基础的上皮细胞培养体系中含低浓度血清、转铁蛋白和人表皮生长因子可以有效保证气管上皮原代和传代生长。本研究所分离的气管上皮细胞可连续传到第6代,传代细胞活性好、纯度高,可为进一步的气管上皮细胞永生化研究提供材料和奠定技术基础。     

三维子宫组织的构建及形态学观察

本研究旨在体外构建含有3种细胞的三维子宫组织。体外成功分离和培养兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞,将3代以内的平滑肌细胞以1×10^7/mL与3 mg/mLⅠ型鼠尾胶原和Matrigel（4∶1）的混合物混合,迅速接种在自制的模具中,置于37℃、体积分数5%CO2培养箱中待其凝固,以同样的方法接种1×10^7/mL子宫内膜基质细胞,待其凝固后接种上皮细胞悬液,将其置于37℃,体积分数5%CO2培养箱中培养。采用HE染色和免疫组织化学染色方法观察和鉴定三维子宫组织。结果表明,在体外成功地构建了含有3种细胞结构的类似于在体子宫组织的三维子宫组织;HE染色观察,在静态外力作用下,培养10 d的子宫组织细胞呈明显的按拉伸方向排列;细胞在细胞外基质中自由移动,上皮层呈弯曲状;免疫组织化学染色可以观察到具有3层细胞结构的子宫组织,弯曲的上皮层细胞呈柱状。可见子宫内膜细胞和平滑肌细胞能在细胞外基质中生长;建立了一套由3种细胞组成的类似于在体子宫组织结构的三维子宫培养体系;为胚胎植入机理的研究提供良好的体外模型。     

大肠杆菌毒力因子研究概况

致病性大肠杆菌的毒力因子主要有黏附素、毒素、外膜蛋白 ( OMP)及铁转运系统等。在大肠杆菌侵袭宿主组织并引起其发病的过程中 ,这些毒力因子相互协调、发挥作用。文章对毒力因子的致病作用、致病机理、免疫原性及其在疾病防制中的应用几个方面的研究概况作了综述 ,为防制大肠杆菌病、研制新型高效的大肠杆菌疫苗提供了理论依据。另外 ,文章还介绍了近年来已相继研制成功的全菌体疫苗、纯化菌毛疫苗、单价或多价基因工程菌毛疫苗以及重组肠毒素双价基因工程苗、OMP亚单位疫苗等。展现了新型疫苗的研制 ,给防制大肠杆菌病带来了新的前景以及大肠杆菌作为工程菌的应用对畜禽其他疾病防制的推动作用     

疯牛病发病机理和跨物种传播研究进展

疯牛病（BSE）是严重危害畜牧业和人类健康的一种传染性疾病。该病以侵害中枢神经系统为特征。由于该病的临床症状和组织病理学变化等已为人们所熟知，本文仅就疯牛病病因、发病机理、及跨物种传播作一综述。     

奶牛铜绿假单胞菌的分离与鉴定

从奶牛颈部脓肿中分离出一株革兰氏阴性杆菌,经生物学特性研究和生理生化试验鉴定为铜绿假单胞菌.该菌对小鼠有很强的致病性,药物敏感性试验对氟哌酸、氧氟沙星、先锋必等抗生素高度敏感;对庆大霉素、氨苄青霉素、链霉素等抗生素有耐药性.     

妊娠期子宫中的血管发生和血管新生

足够的营养和子宫中丰富的血液循环是胎儿正常生长发育所必需的条件。通过血管舒张和新的血管发育,子宫脉管系统发生改变以适应胎儿需求的增加。近年来的研究证实,多种因素包括血管内皮生长因子、碱性成纤维生长因子及其受体参与血管发生的调节。文章主要介绍了妊娠早期子宫和胎盘中血管发生和血管新生的机制及其影响因素。