猪瘟病毒Shimen株p80基因的克隆及其真核表达质粒的构建

根据已发表的猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,CSFV)Alfort株和Brescia株的全基因组序列,设计2对引物P1/P2和B1/B2,在B1和B2的5'端分别加上XhoI和ApaI位点,以CSFVShimen株细胞毒为材料一步法提取总RNA,并以此为模板采用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR),成功地扩增到约2.0kb的片段,将此PCR产物回收后与pMD18-T连接、转化,获得重组质粒,经PCR扩增,限制性酶切(BamhI/HindШ)和序列部分测定鉴定为阳性重组质粒P80-T。将P80-T分别经XhoI和ApaI酶切消化、回收后,与经XhoI/ApaI酶解的真核表达载体PEGPF-C1连接、转化,获得重组质粒,经PCR,XhoI和ApaI限制性酶切和序列测定鉴定为真核表达质粒P80-P,目的基因的插入位置、方向和读码框完全正确。为下一步在哺乳动物细胞中表达猪瘟病毒p80蛋白奠定了基础。     

马立克氏病肿瘤细胞表面抗原的提取与鉴定

用MDVGA株感染1日龄SPF雏鸡,饲养至发病后获得MD肿瘤细胞,采用木瓜蛋白酶消化法从MD肿瘤细胞上提取马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,经间接荧光抗体染色和间接ELISA鉴定,证明获得的粗提物中含有马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,为进行马立克氏病肿瘤相关的表面抗原的进一步研究奠定了基础。     

IFN-γ对PCV-2增殖效果的影响

在病毒培养物中添加IFN-γ,研究提高PCV-2病毒滴度的最佳培养方法。以不同活性单位的IFN-γ和不同浓度的NH4Cl配合使用分别添加至培养基,用免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)对病毒毒价(TCID50)进行测定;于72h后分别测定添加与不添加IFN-γ接毒细胞的细胞周期。结果显示,500U/mL IFN-γ和75mmol/L NH4Cl处理PK-15后病毒的TCID50达到最大值5.9;且无论在病毒接种细胞前还是接种后添加IFN-γ均大幅提高病毒增殖力,而且两者提高幅度相同;细胞周期测定显示,最适量的IFN-γ和NH4Cl配合使用后,细胞增殖活性增加。说明,重组IFN-γ可以提高PCV-2在PK-15中的病毒增殖滴度。     

疫情爆发下《兽医公共卫生学》课程教学改革探讨--以西北农林科技大学为例

非洲猪瘟疫情爆发使我国面临的兽医公共卫生问题日益严峻,同时,新冠肺炎疫情防控对本科教学工作提出挑战。新形势下高校教师应充分认识到创新工作思路的必要性。作者根据自身的教学与实践经验,根据农业院校《兽医公共卫生学》课程安排现状以及该课程在兽医领域的重要性,提出将该门课程纳入必修课学习的建议,同时对该门课程的教学内容、教学形式、考核方式以及教师队伍的建设等进行改革和探讨,让学生在特殊时期对知识点融会贯通,引导学生对兽医公共卫生学的认知从被动吸收转变为主动学习,培养出符合新时代社会发展需求的兽医公共卫生人才。