牦牛巴氏杆菌病的诊断报告

2002年，陕西省凤县某地购进的牦牛出现不明原因的死亡，在流行病学调查和毒物学分析的基础上，对采集的病料进行病原的分离与鉴定。结果表明，引起牦牛死亡的病原为巴氏杆菌。报告如下。     

牛病毒性腹泻病毒链特异性SYBR Green荧光定量PCR方法的建立及应用

为了对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)复制过程中正、负链RNA进行定量检测,通过生物学软件DNAStar和Primer express 3.0设计BVDV正、负链RNA特异性反转录引物并在其5′端添加非病毒核苷酸标签序列以区分BVDV正、负链RNA。同时设计荧光定量PCR引物与非病毒核苷酸标签序列组成引物对,建立了BVDV链特异性荧光定量RT-PCR(ssRT-qPCR)方法,对其敏感性、重复性、特异性进行评估并利用所建立BVDV ssRT-qPCR对不同接毒剂量下BVDV在细胞内复制过程中正、负链RNA进行定量检测。结果表明,以构建的pMD18T-BV+和pMD18T-BV-质粒为标准品建立的BVDV正链特异性荧光定量RT-PCR方法[ss(+)RT-qPCR]和负链特异性荧光定量RT-PCR方法[ss(-)RT-qPCR]在10~2～10~7拷贝范围内具有良好的线性关系,线性相关系数分别为0.998 1和0.995 3;敏感性试验结果显示,ssRT-qPCR敏感性较好,ss(+)RT-qPCR最低检测下限为10拷贝,ss(-)RT-qPCR最低检测下限为100拷贝。重复性试验结果显示,所建立的ssRT-qPCR批内和批间的变异系数为均小于1%,方法重复性良好。特异性试验显示,所建立的ssRT-qPCR方法与牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒等不存在交叉反应,特异性较好。利用建立的ssRT-qPCR对不同感染剂量下细胞内BVDV正、负链RNA进行定量分析,结果显示以10、0.1 MOI剂量接种BVDV于MDBK细胞后,BVDV正、负链RNA变化呈现先升后降再逐渐上升的趋势。以1 MOI剂量感染MDBK细胞,BVDV正、负链RNA的动态变化趋势略有差异,整体呈上升趋势。10、1 MOI接毒剂量接种细胞后,BVDV正、负链RNA在感染后36 h基本维持稳定水平,以0.1 MOI接种细胞后BVDV正、负链RNA在感染后24 h即达到稳定水平。BVDV链特异性检测进一步验证了所建立方法的适用性。该研究建立了BVDV链特异性荧光定量RT-PCR方法并利用该方法对BVDV在细胞内复制过程中正、负链RNA的动态变化过程进行描述,为研究宿主蛋白抗病毒机制、BVDV基因组RNA复制及调控机制等研究提供了研究手段。     

屠宰生猪肺脏健康状况评估及主要病原的检测

肺部感染引发的不同程度的肺脏病变在屠宰生猪的宰后检验中常有发现。本试验对某规模化生猪养殖企业屠宰生猪连续10周采集肺脏,每次取约300份肺脏,共3 000份肺脏进行健康评价,并每次选择8份病变肺脏(共80份)进行猪呼吸道疾病常见病原的核酸检测,通过分析可能引起屠宰生猪肺部感染的病原,以期为生猪的疾病防控、动物产品安全评估提供基础资料和参考。结果显示,3 000份肺脏中评估为健康的有1 822份,占60.7%(1 822/3 000);病变肺脏有1 178份,占39.3%(1 178/3 000);病变类型主要为炎症、肉变。80份病变肺脏中猪圆环病毒2型(PCV2)核酸阳性有16份,副猪嗜血杆菌(HPS)阳性有39份,猪链球菌(SS)阳性有36份,猪肺炎支原体(Mhp)阳性有4份;PCV2与Mhp、HPS、SS混合阳性率分别占到PCV2阳性数量的12.5%、56.25%、81.25%;未检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪流感病毒(SIV)、巴氏杆菌(Pm)和猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)等病原。本次评估结果表明,屠宰生猪肺脏病变比例较高,引起肺脏发生病变的呼吸道病原主要为HPS、SS、Mhp和PCV2,且以和PCV2的混合感染居多。     

延安市鸡新城疫免疫抗体水平测定与分析

为了解延安市各县(区)鸡新城疫的免疫情况和疫苗免疫效果,于2017年春季和秋季分别对延安市甘泉、志丹、吴起、宝塔等13个县(区)的鸡新城疫疫苗免疫鸡进行了新城疫免疫抗体水平检测,并对测定结果进行分析,做出相应的评价,同时在各县(区)进行了调查。结果表明,采集的1 573份新城疫疫苗免疫鸡血清新城疫抗体总体合格率为83.73%,说明延安市13县(区)新城疫免疫抗体合格率较高;但活禽交易市场所采集鸡血清和雏鸡血清鸡新城疫免疫抗体合格率分别为68.93%和75.26%,抗体合格率相对较低,且抗体水平也较低,存在潜在的风险,应该引起足够的重视。经过二免和三免后鸡新城疫免疫抗体水平较高,说明生产中进行二免和三免的免疫操作程序是有必要的和值得推广的。     

高通量转录组测序技术在猪肉品质研究中的应用进展

猪肉中基因的表达决定了蛋白质的种类、结构和功能,从而决定了肉品质,而肌内脂肪(IMF)和肌纤维(MF)是影响肉品质的关键物质。本文主要综述了高通量转录组测序技术在研究猪肉品质相关的IMF和MF转录组的应用,重点阐述了其研究进展。     

羊干酪样淋巴结炎PCR检测方法的建立

参照已发表的伪结核棒状杆菌16S rRNA序列,设计合成了1对引物,用此引物进行PCR扩增,建立伪结核棒状杆菌的PCR检测方法。用此方法对羊链球菌、马尔他布鲁氏菌、结核分支杆菌进行PCR扩增结果对比,确证该方法的特异性。同时,用建立的PCR方法检测病料,检测结果与病原菌的分离鉴定结果进行比较,以确证其准确性。结果表明,分离菌株与参考株的同源性分别为96.8%和97.1%;检测17份病料,阳性率为70.6%,与病原菌的分离鉴定结果完全一致。     

猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及其应用

参照国内外已发表的猪圆环病毒2型（PCV-2）的ORF1的基因序列及其相关的PCR检测方法设计一对引物,扩增目的片段为493bp。通过对PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性试验,建立了一种PCV-2的PCR检测方法。应用此方法对临床样品进行了检测,阳性检出率达51.18%。该方法具有快速、敏感、特异等优点,可用于PCV-2的检测和流行病学调查等。     

猪血管内皮细胞体外生长特性的研究

试验以体外分离培养的猪血管内皮细胞为材料，研究了细胞的生长曲线、不同基础培养基对细胞生长的影响及胰岛素在生长液中的适宜含量。结果表明，传代猪血管内皮细胞接种后有ld左右的滞留期，然后细胞进入对数生长期，可持续2d，第5d进入平台期，第8d细胞开始脱落死亡；与MEM相比，M-199更适合于用作培养猪血管内皮细胞的基础培养基；在不用贴附基质和内皮细胞生长因子(ECGF)的条件下，生长液中加入胰岛素，可明显促进细胞的生长和增殖，胰岛素的最适用量为8μg／mL。     

母牛生殖激素水平异常与屡配不孕的关系

随着生殖内分泌学研究的深入发展,越来越多的实验表明,家畜的正常怀孕依赖于母体生殖激素水平的正常以及它们之间的协调作用,一旦这种正常水平和协调作用遭到破坏,就会导致不孕或流产。牛的屡配不孕远多于其他家畜,因此对这方面的研究较多且较深入。现有的研究结果提示,母牛发情周期中 LH 峰出现较迟,LH 峰值和峰值外的水平较低,就会造成黄体发育不良,进而导致孕酮分泌不足,最终因外周血中孕酮水平低下和与雌二醇的比例失调而引起屡配不孕。     

促卵泡素及其在家畜产科中的应用

促卵泡素(卵泡刺激素或卵泡成熟素,FclliCular Stimulating Ho■m■ne.简称FSH)是腺垂体(垂体前叶)所分泌的促性腺激素之一。约在80年前,就曾有人用腺体移植和腺体浸液的注射证明了腺垂体和性腺的相互影响,但直到30年代,尤其是50年代后才对垂体促性腺激素进行了广泛和深入的研究,而近年的研究又在很大程度上阐明了中枢神经系统,特别是丘脑下部对垂体促性腺激素分泌和性腺机