牛传染性鼻气管炎病毒内标荧光定量PCR检测方法的建立与应用

根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列,设计高度保守的引物和荧光探针,并扩增包含有荧光PCR扩增区域的核酸片段,通过凝胶纯化回收,将该片段克隆至pMD18-T载体,经鉴定后获得目标模板。通过碱基重排和引物设计,用搭桥法PCR扩增,获得BHV1荧光定量PCR内标模板。对内标模板的添加量和反应条件进行优化,建立了含有内标物的荧光定量PCR检测体系。该体系可以检测到10个拷贝/PCR反应的重组质粒,对BHV1可检测到0.01TCID50的病毒粒子,灵敏度比常规PCR和病毒分离高10～100倍,与不加内标的荧光PCR检测灵敏度相当。更重要的是,内标模板可以对反应体系进行监测,指示并校正假阴性结果,从而达到提高PCR检测准确率的目的。对临床收集的40份牛精液(其中8份已经鉴定为阳性)和10份牛鼻腔拭子(其中2份已经鉴定为阳性)用该体系进行检测,均得到预期结果。该方法的建立可用来对临床样品中BHV1的快速检测和实验室的质量控制。     

太白蓼乙酸乙酯提取物的药效学研究

通过抗腹泻、抗炎、对免疫功能调节、体外抑菌和抗病毒等相关试验,研究了太白蓼乙酸乙酯提取物(PTKE)及PTKE柱层层析进一步分离物EB的药效学作用。结果表明,PTKE对蓖麻油和番泻叶所致的小鼠腹泻均有极显著的抑制作用(P0.01);对乙酸所致家兔肠黏膜毛细血管通透性增高有极显著抑制作用(P0.01),对腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高及皮内注射二甲苯致皮肤毛细血管通透性增高也均有显著的抑制作用(P0.05);饮水中分别加入50、100、150 mg/kg的PTKE水溶液观察其对雏鸡免疫功能的影响,结果显示,在雏鸡生长的14～42日龄,各试验组雏鸡胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数与对照组相比差异显著或极显著(P0.05或P0.01);EB质量浓度为156μg/L时,其对脾脏、胸腺、法氏囊和外周血淋巴细胞的增殖显著高于细胞对照组(P0.01);PTKE和EB对临床分离鸡的2株大肠埃希菌和1株沙门菌具有一定的体外抑制作用;EB对新城疫病毒在鸡胚内增殖具有一定的抑制作用。以上结果提示,太白蓼提取物有明显的抗腹泻和抗炎作用,并能促进雏鸡免疫器官发育及淋巴细胞的增殖,具有一定的抑菌和抗病毒作用。     

猪血管内皮细胞中与猪瘟病毒相关microRNA的初步筛选

本试验旨在筛选猪脐静脉血管内皮细胞(SUVECs)内作用于猪瘟病毒(CSFV)的microRNA。通过构建CSFV3′和5′非翻译区(Untranslated region,UTR)的双荧光素酶报告基因载体,经生物信息学预测可能与CSFV相互作用的microRNA,然后瞬时共转染重组载体与microRNA的抑制物,最后通过发光检测仪测定荧光素酶活性。结果表明,成功构建了CSFV5′非翻译区(373 bp)和3′非翻译区(252 bp)的报告基因载体,并合成了4条预测出的microRNA(ssc-mi R-let7c、ssc-mi R-106a、ssc-mi R-18、ssc-mi R-139)的抑制物,共转染后发光检测仪检测到荧光素酶的活性被不同程度抑制。本研究发现microRNA作用位点主要在CSFV的3′-UTR,而且以上4种microRNA都对CSFV3′-UTR有不同程度的抑制作用,其中ssc-mi R-18的抑制作用比较明显。     

树立营销意识拓宽电力市场——吉木萨尔供电有限责任公司认真开展增供扩销工作

2000年是新疆电力行业的增供扩销年，为努力开拓用电市场，建立适应市场发展的营销体系，使增供扩销有一个新的突破，吉木萨尔供电公司 2000年以来在供电企业经营管理方面，解放思想、转变观念、不断调整经营策略，以优质服务方便客户，大力开展增供扩销活动，从而使该公司的电力营销工作得以顺利进行，企业效益稳步上升，呈现出良好的发展势头。 　　这个公司管辖 3座 35千伏变电所， 35千伏线路 60千米， 11条 10千伏线路近 600千米，有用户两千多户，年供电量 4 500万千瓦时左右，属准东电业局下属的吉木萨尔县唯一的一家供电企业，担负…     

小鼠卵母细胞体外成熟过程中wee 1和cdc 25基因的表达

已知 wee 1基因产物是成熟促进因子 ( maturation promoting factor,MPF)活性的负调节者〔7〕,而 cdc2 5基因产物是 MPF活性的正调节者〔2〕。后来在小鼠和人类的体细胞发现了cdc2 5的等效基因和 wee1基因〔3～ 6〕。但哺乳动物卵母细胞长期被阻滞在第一次成熟分裂的前期 ,是否因 MPF的活性受到 wee1基因产物的抑制 ,而促性腺激素等解除这种抑制是否由 cdc2 5基因表达所引起 ,目前尚未见报道。本试验目的在于研究小白鼠卵母细胞成熟过程中 wee1、cdc2 5基因的表达规律 ,为揭示哺乳动物卵母细胞成熟过程中分子生物学调控机理提供科学资料…     

增益素对鸡新城疫免疫效果的试验

在畜禽传染病的免疫预防实践中，经常会遇到免疫效果不好、保护率不高的情况，给养殖业带来了较大的经济损失。西安亨通光华制药有限公司试制的增益素，为新一代免疫增强剂。为验证增益素的免疫增强效果，我们进行了增益素对鸡新城疫免疫效果的试验，现将结果报告如下。 1材料 1.1药物 　　增益素，即α－甘露聚糖肽， 10g/瓶，由西安亨通光华制药有限公司提供。 1.2疫苗 　　新城疫Ⅱ系苗和油乳剂灭活苗，农业部兰州生物药厂生产。 1.3新城疫强毒株 　　由西北农业大学动物科学与动物医学院分离并低温保存。 1.4试验动物 　　60只 10日龄新…     

绿色回归的效应

在苦苦跋涉了几个世纪，甚至更长的时间之后，当人们依然在脚下的黄土地上收获着微薄的希望仍在贫困中徘徊之时，渴望会变得越来越迫切，但他却仿佛又很遥远……地处昕水河上游的蒲县，是一个黄土残垣沟壑密布、水土流失极为严重的山区贫困小县。１９７７年前，全县１５１...     

RNAi技术与与生物医学研究进展

随着基因组计划的实施,人类步入生物医学研究的崭新时代--后基因组时代,人们的关注点开始集中于革命性的基因新技术,RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术就是倍受关注的一个焦点.     

RNAi技术与生物医学研究进展

随着基因组计划的实施，人类步入生物医学研究的崭新时代——后基因组时代，人们的关注点开始集中于革命性的基因新技术，RNA干扰（RNA interfereqce，RNAi）技术就是倍受关注的一个焦点。RNAi现象是指通过与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA（dsRNA）特异性抑制靶基因的转录后表达而引起的基因沉默现象。     

转录靶向猪瘟病毒3''''-UTR shRNA细胞株的初步建立

利用质粒载体在细胞内转录并加工成siRNA的方法，设计3对针对猪瘟病毒3＇-UTR不同位点的干扰片段，分别与干扰载体pGenesil-1连接，转化DH5a，筛选阳性克隆得到重组干扰质粒pGene-1，pGene-2和pGene-3，脂质体介导转染重组干扰质粒于PK-15细胞，G418抗性筛选得到转录靶向猪瘟病毒3＇-UTRshRNA的PK-15细胞株，为今后应用RNAi研究猪瘟病毒Y-UTR调控病毒复制的功能以及抑制猪瘟病毒增殖的研究奠定了基础。