RNAi技术与生物医学研究进展

随着基因组计划的实施，人类步入生物医学研究的崭新时代——后基因组时代，人们的关注点开始集中于革命性的基因新技术，RNA干扰（RNA interfereqce，RNAi）技术就是倍受关注的一个焦点。RNAi现象是指通过与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA（dsRNA）特异性抑制靶基因的转录后表达而引起的基因沉默现象。     

微量提取培养细胞总RNA的研究

从20世纪90年代开始,人类对基因组的研究进入到功能基因组时代,对RNA,特别是mRNA的研究已越来越受到人们的重视,因此RNA的提取技术也得到了极大的提高。本研究在对Chomlzynski介绍的异硫氰酸胍—酚—氯仿一步法进行改良的基础上,对比分析了3种微量提取培养细胞总RNA的方法,经琼脂糖凝胶电泳技术检验,发现利用水饱和酚分级法、RNA酶抑制剂—酚法提取RNA的效果较好,所得RNA适用于各种研究。     

分子病毒学相关技术在预防兽医学上的应用

病毒（Virus）是广泛存在于人类、动物、植物及微生物体内的一类细小生物，结构非常简单，外面包以蛋白质组成的衣壳，核心为一种核酸DNA或RNA。这种核酸DNA或RNA储存着病毒生命特性的全部遗传物质——基因组。动物分子病毒学的研究于20世纪80年代末由结构基因组时代发展到功能基因组时代或称为后基因组时代。随着对动物分子病毒学研究的深入，     

营养在基因表达中的作用(上)

在过去20年中,分子生物学领域取得了长足进步。我们正处于加快揭示生物代谢调控的基本原理和生物技术应用于科学研究的潜力的时代。分子生物学概念愈来愈多地被用于食物成分和作为基因表达控制因子的必需养分的研究中。本篇综述报道利用分子生物学技术解决与营养有关问题的几个例子。现有的分子生物学方法,除了可用于估测细胞和组织中的DNA含量外,还可估测转移RNA(tRNA)、核蛋白体RNA(rRNA)和信使RNA(mRNA)的变化。这些方法包括分离细胞DNA、RNA和多腺苷酸RNA的柱色     

长链非编码RNA及其在家畜中的应用与展望

在哺乳动物基因组中,绝大多数被转录成为非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA),其中,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是数目最多的,也是功能最复杂的一类非编码RNA。研究表明,长链非编码RNA可以从染色质水平、转录和转录后水平对基因的表达进行调控。长链非编码RNA在剂量补偿效应、基因组印记、细胞分化和组织形成等多个方面发挥着重要作用。在此将着重介绍长链非编码RNA的概念、作用机制及其在家畜方面的应用,最后对长链非编码RNA在家畜育种方面的应用进行展望。     

+链RNA肿瘤病毒的病原性与复制

正链RNA肿瘤病毒为逆转病毒科(Retroviridae)。病毒粒子内含有逆转录酶,这种酶能使RNA逆转为DNA,然后再由DNA转录为RNA。正链RNA肿瘤病毒可引起一些动物和人的肿瘤疾病,如某些动物种中的白血病或肉瘤。弹     

正链RNA病毒复制酶结构与功能研究进展

正链RNA病毒是家族非常庞大,可以感染多种动、植物及人的一类病毒。研究这类病毒的复制机理和调控方式对于阐明病毒的致病机制,以及研制新型抗病毒药物和疫苗等具有重要意义。RNA依赖性RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）是正链RNA病毒进行复制的关键蛋白酶,研究其结构与功能是了解病毒复制机理的前提和基础。本文即对近年来关于正链RNA病毒RdRp的结构与功能研究进展情况进行综述。     

RNA干扰与基因沉默

1995年康奈尔大学的Guo等在利用反义RNA技术特异性阻断秀丽新小杆线虫(C．elegans)中的par-1基因表达时，意外发现在对照组中给线虫注射正义RNA，同样也抑制了par-1基因的表达。1998年华盛顿卡耐基研究所的Fire和麻省理工学院的Mello证实了Guo等观察到的正义RNA抑制基因表达的现象，其主要原因是由于体外转录所得RNA中污染了微量双链RNA(dsRNA)，但把体外转录得到的单链RNA(ssRNA)纯化后注射到线虫体内，     

RNAi导致基因沉默的机制和应用进展

RNAi主要通过双链RNA(dsRNA)被核酸酶切割成21~23 nt的干涉性小的RNA,即siRNA,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现的；RNAi需要多种蛋白质因子以及ATP参与,而且具有生物催化反应特征；RNAi具有高效性和高度特异性,作为一种关闭特定基因的新技术,为基因功能研究提供了一个快速、简便的方法,在后基因组时代应用前景广阔。     

环状RNA——一个新的非编码RNA的功能与特性

环状RNA,是近年来受到广泛关注的一种内生非编码RNA,其特征是具有共价闭合环状结构,没有5’帽子和3’寡聚A尾。虽然环状RNA合成和功能机制尚不是完全清楚,许多研究显示,其可能作为人类疾病诊断和治疗的分子标记,在许多疾病,尤其是肿瘤的发展过程中发挥重要作用。环状RNA在动物疾病的诊断和防治方面研究还很少,本文综述了环状RNA的生物功能和特性,为在畜牧兽医研究中,运用环状RNA提供一些理论基础。     

猪囊尾蚴总RNA的提取与mRNA的分离

目的为比较对猪囊尾蚴总RNA提取与mRNA分离方法的优点。方法采用Promega公司的SV总RNA分离体系、RNAgents总RNA分离体系和hioDev—Tech的TRIZOL LS试剂,对猪囊尾蚴总RNA进行了提取;用Promega的PolyA Ttract mRNA分离体系和Amersharn的Quickprep微量mRNA纯化试剂盒对mRNA进行分离。结果表明经改良的TRIZOLLS试剂,提取猪囊尾蚴RNA效果好,而PolyA Ttract mRNA分离体系分离的mRNA含量高,纯度好。结论所分离的mRNA适合于构建cDNA表达文库。     

基因敲除和RNAi在畜牧兽医领域的研究及展望

进入21世纪,生命科学已经进入后基因组时代,大规模的基因功能研究正成为生命科学研究的热点,基因组技术的重要性也越来越明显。论述了基因敲除和RNA干涉两方面技术,并对其在畜牧兽医领域的应用进行了展望,提出了利用基因敲除和RNA干涉技术,能够更清楚地研究和发现基因新的功能,同时还可以用于制备疾病动物模型,用于科学研究和新药的筛选,为畜牧兽医带来广大的前景。     

谷子RNA干扰相关酶类基因家族的鉴定与分析

Dicers酶类、Argonautes蛋白以及RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerases, RDRs)是RNA干扰(RNA interference, RNAi)机制中重要的核心蛋白,但在谷子(Setaria italica)中尚无系统报道。为了研究谷子中与RNA干扰相关酶类基因的特征,本研究对谷子的RNA干扰相关酶类基因家族进行了蛋白质理化性质、亚细胞定位预测、蛋白质保守基序、基因保守结构域、基因家族成员间系统发育关系以及组织特异性表达谱分析。研究共发现24个与谷子RNA干扰相关酶类基因,包括7个DCL (Dicers),13个AGO (Argonautes),4个RDRs。系统进化树分析表明,这些家族被分为3个进化支。同一家族基因成员具有共同的保守结构域。虽然大多数基因可同时在不同发育时期的叶、茎和穗中表达,但其在各时期的穗和茎中的表达量最高。本研究为详细探讨这些基因在谷子生殖和生长发育中的表观遗传修饰作用提供了理论依据。     

谷子RNA干扰相关酶类基因家族的鉴定与分析

Dicers酶类、Argonautes蛋白以及RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerases,RDRs)是RNA干扰(RNA interference,RNAi)机制中重要的核心蛋白,但在谷子(Setaria italica)中尚无系统报道.为了研究谷子中与RNA干扰相关酶类基因的特征,本研究对谷子的RNA干扰相关酶类基因家族进行了蛋白质理化性质、亚细胞定位预测、蛋白质保守基序、基因保守结构域、基因家族成员间系统发育关系以及组织特异性表达谱分析.研究共发现24个与谷子RNA干扰相关酶类基因,包括7个DCL(Dicers),13个AGO(Argonautes),4个RDRs.系统进化树分析表明,这些家族被分为3个进化支.同一家族基因成员具有共同的保守结构域.虽然大多数基因可同时在不同发育时期的叶、茎和穗中表达,但其在各时期的穗和茎中的表达量最高.本研究为详细探讨这些基因在谷子生殖和生长发育中的表观遗传修饰作用提供了理论依据.     

外源双链RNA与抗病毒效应的研究进展

对于大多数病毒来说,只要其侵染宿主细胞往往会在复制自身子代基因序列的过程中产生一种中间产物,双链RNA。起初,研究人员认为双链RNA是一种毒素,但是随着研究的深入进行,发现双链RNA是一种高效的干扰素诱导剂,可以作为免疫调节因子或者相应病毒的模拟分子来抵抗病毒的侵染。这就使得双链RNA具有病原体相关分子模式的特点,而且可以作为机体产生主动免疫来抗击病毒侵染的"信号灯"。双链RNA是在病毒侵染细胞后产生的,随着受感染细胞的崩解而释放到细胞外环境,从而刺激周围正常细胞产生相应的抗病毒效应。     

RNA干扰技术及其在猪繁殖与呼吸综合征治疗中的应用

RNA干扰(RNAi)技术是近年来发现的由双链小RNA(siRNA)介导的以序列特异性方式诱导同源mRNA 降解的新技术.由于其特异性和有效性,已被认为是一种重要的特异性基因阻断技术.将RNA干扰技术应用于猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)治疗中能明显抑制病毒复制,为猪繁殖与呼吸综合征的预防和治疗开辟了一条新途径.文章就RNA干扰(RNA0技术和其在猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)治疗上的应用进行了综述.     

细胞自噬与小RNA病毒相互作用分子机制研究进展

细胞自噬是真核生物中普遍存在的、对细胞内物质进行循环更新,维持内环境稳态的一种自我保护机制。近年研究表明,细胞自噬能够参与小RNA病毒的感染过程,小RNA病毒感染细胞时,快速激活自噬途径,自噬可以通过递呈病毒抗原发挥抗病毒天然免疫功能;同时自噬体为部分小RNA病毒提供复制相关蛋白质和非细胞裂解性释放途径,促进病毒的复制。论文对近年来小RNA病毒感染和细胞自噬相互作用的研究进展进行综述,为进一步阐明小RNA病毒参与自噬调节的作用机制提供参考。     

慢病毒与microRNA研究进展

正MicroRNA (miRNA)作为一类重要的调控分子广泛存在于动植物体内并且对调控基因表达有着重要的作用。mi RNA是一类高度保守且长度为18～25个核苷酸(nt)的小分子,它不编码蛋白质但却可以通过与蛋白编码基因的m RNA互补结合调控基因的表达。在植物中,通过完全配对结合靶基因而裂解靶m RNA;动物中,通过与靶基因不完全配对结合而抑制蛋白质的翻译。1993年首次在线虫体内发现mi RNA编码基因-lin-4基因,其编码的22 nt     

禽脑脊髓炎病毒与其他小RNA病毒基因组序列比较分析

利用生物信息学方法对在基因文库中有完整注释信息的禽脑脊髓炎病毒(AEV)和其他小RNA病毒进行了基因组结构比较,发现小RNA病毒基因组结构的共性和个性;利用DNAMAN 5.0软件对小RNA病毒进行了基因组和蛋白多序列比对,并建立了蛋白质系统进化树。结果表明,AEV与甲肝病毒(HAV)的基因组结构最为相似;它们的基因组序列和蛋白序列的同源性最大,蛋白系统进化树的构建更进一步证明AEV与HAV的亲源关系最近;另外,经多序列比对发现猪肠道病毒A、鸭小RNA病毒TW90A型与猿猴小RNA病毒1型三者之间具有最大的序列同源性,并处于同一个进化树分枝,因此,建议将它们划分为一个新的小RNA病毒属,同时也为其他小RNA病毒科属种的划分提供了参考。     

长链非编码RNA在肌肉生成与脂肪发育过程中的研究进展

基因组DNA经过转录可以产生两大类RNA,编码蛋白的RNA和非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA)。其中,长链非编码RNA(lncRNA)受到了越来越多的关注。lncRNA可以通过多种机制,从转录水平,转录后水平以及表观修饰水平调节靶基因的表达,进而调控肌肉与脂肪的发育。本文将对lncRNA的基本特征及功能机制进行介绍,综述lncRNA对肌肉和脂肪组织发育的调控机制,并对lncRNA未来的研究进行展望,为研究者在lncRNA方面的研究提供有力的参考。