泥鳅线粒体DNA控制区结构分析及遗传多样性研究

采用PCR和DNA测序技术对4个泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus）群体的线粒体DNA控制区序列进行比较，研究其遗传多样性和控制区的结构。结果显示，用于分析的线粒体DNA控制区片段序列为918～920bp。32个序列中共发现了56个多态位点，其中32个转换位点，19个颠换位点，5个转换与颠换同时存在的位点，定义了32种单倍型。同时对控制区结构进行分析，识别了其终止序列区（ETAS）、中央保守区（CD）和保守序列区（CSB）的关键序列。4个地理群体的单倍型多样性（Hd）、核苷酸多样性（Pi）和平均核苷酸差异数（K）分别为0．992、0．012和10．698。群体间的平均Kimura双参数遗传距离（Kimura 2-parameter distance，K2-P）、遗传分化指数（Fst）、基因交流值（Nm）和分子方差分析（AMOVA）均表明4个泥鳅群体具有较高的遗传分化，基因交流贫乏。利用核苷酸序列构建的NJ分子系统树揭示4个群体分为2个谱系，除范县群体外，其余各群体间相互交叉聚集。     

虹鳟杂交胚胎(2n♀×3n♂)的发育状况及其DNA倍性分析

雄性三倍体虹鳟(Oncorhyncus mykiss)可以发育至生理成熟并表现出较强的雄性副性征,性腺发育基本正常；雌性三倍体虹鳟性腺几乎不发育,并且存在着类雄性化的发育趋势.本研究拟通过对虹鳟杂交胚胎(2n♀×3n♂)发育状况及其DNA倍性的分析,进而确认三倍体虹鳟是否具有与二倍体虹鳟类似的生育能力并分析其原因.选取经两个世代家系选育的虹鳟优良品系二倍体雌性虹鳟作为母本,以热休克方法人工诱导的优质雄性三倍体虹鳟为父本,常规人工采集精卵授精,获得三倍体雄性与二倍体雌性杂交胚胎,观察杂交胚胎的发育进程,通过流式细胞仪检测杂交胚胎的DNA含量,进而与二倍体雌雄交配获得的胚胎对照确定杂交胚胎的倍性.结果表明,杂交胚胎的受精率、发眼率和孵化率均显著地低于对照组,杂交胚胎多数在发眼期之前死亡,破膜的胚胎在仔鱼期上浮前全部死亡.杂交胚胎的DNA含量分布范围较大,大致可以分为两个水平,接近84％的胚胎的DNA含量介于二倍体与三倍体之间,约为对照组DNA含量的2.5倍；约有16％的胚胎的DNA含量在三倍体和四倍体之间.本研究认为,染色体非整倍体化可能会引起杂交胚胎细胞核质不相容,进而导致基因表达调控紊乱,从而使杂交胚胎不能正常发育,无法完成由母体卵黄供给的内源营养向外源营养的转换,成为导致杂交胚胎发育过程中大量死亡,以及杂交仔鱼在破膜之后开始进食之前全部死亡的一个重要原因.     

合成生物学中的DNA组装技术探究

研究合成生物学的目的在于通过工程学的研究思路来设计出新的生物系统,或者是改造之前的存在缺陷的生物系统。这是一门新兴的学科,具有较大的发展潜力。从目前的技术发展来看,其在生物医药、农业以及环保等方面发挥着较大的作用。而在合成生物学当中,DNA组装技术是其中的较为关键的一门技术。如果将这门技术发展完善,那么合成生物学技术发展的速度将会更快。因此,对合成生物学中DNA的组装技术进行了简单的探讨,并且研究了其发展的意义和作用。     

苹果炭疽菌DNA改良提取法及PCR体系的优化

以苹果炭疽病胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)为试材,采用改良的SDS法、改良的CTAB法和改良的尿素法等对基因组DNA进行了提取和比较,并对ITS1-5.8S-ITS2区基因PCR扩增体系中模板的添加量以及退火温度进行了调整和优化。结果表明:采用这3种方法均能提取得到目的 DNA,但采用改良的SDS法提取的基因组DNA产率最高、质量最好;当在25μL PCR体系中添加0.75μL粗提DNA 10倍稀释液以及退火温度设定为51℃时PCR产物的质量最高。     

外源DNA导入小麦后的变异系生物学特性及胚乳蛋白的研究

应用受粉后的花粉管能通道Ｃ４作物高梁ＤＮＡ和抗逆性强的长穗偃麦草ＤＮＡ导入小麦，结果在不同组合中出现了不同类型的广泛变异，在三个组合中已选育出几个稳定遗传的优良变异系，其生物学性状大多是介于原受体和供体之间。主要特性是叶功能期延长，籽粒千粒重和单株粒重增加，增产显著，抗锈病能力增强等，其胚乳蛋白电泳图谱发季了明显变化，在变异系中产生了新的蛋白质组分，而且Ａ区和Ｂ区增加的是蛋白质群，相反原受体６８－     

食用菌分子转化研究状况

遗传育种是提高食用菌产量和质量的有效途径之一。传统的遗传育种方法周期长、见效慢，现代分子转化技术则提供了一种更为高效快捷的育种方式。最早报道的食用菌转化是1991年Challen等利用PEG法把外源DNA导人双孢蘑菇的原生质体中，获得转化子；随后又相继报道了几例食用菌如双孢蘑菇、平菇、草菇、杨树菇和香菇的转化试验。但至今尚未建立起有效的食用菌转化系统。目前在食用菌的转化研究中存在的问题主要有：（1）假阳性菌落的干扰；（2）外源DNA整合率不高；（3）外源基因整合后表达率不高；（4）转化子不稳定。其中影响转化的主要因素是低整合率和低表达率。遗传育种是提高食用菌产量和质量的有效途径之一。传统的遗传育种方法周期长、见效慢，现代分子转化技术则提供了一种更为高效快捷的育种方式。最早报道的食用菌转化是1991年Challen等利用PEG法把外源DNA导人双孢蘑菇的原生质体中，获得转化子；随后又相继报道了几例食用菌如双孢蘑菇、平菇、草菇、杨树菇和香菇的转化试验。但至今尚未建立起有效的食用菌转化系统。目前在食用菌的转化研究中存在的问题主要有：（1）假阳性菌落的干扰；（2）外源DNA整合率不高；（3）外源基因整合后表达率不高；（4）转化子不稳定。其中影响转化的主要因素是低整合率和低表达率。遗传工作者围绕如何提高整合率和表达率，不断改进转化方法、转化材料、标记基因、启动子，以期提高转化率，建立一个完善的转化体系。现就筛选标记、启动子、转化方法、整合方式及将来研究方向等方面，用具体的研究实验分析食用菌转化工作现状、取得的成绩和存在的问题。     

RAPD标记在油菜核不育两系及其杂种纯度检验上的研究：I.DNA快速制备及纯度检测

DNA分子标记技术是检测遗传差异的一项新技术，特别是RAPD标记技术应用更加广泛，DNA质量是保证RAPD分析成功的关键。本文采用改良SDS法对油菜叶片总DNA进行了提取，经琼脂糖凝胶电泳和紫外光光度计分析，结果表明：1、所提取的DNA浓度和纯度都高，可以作为分子生物学研究所用，并为本实验后续的PCR扩增奠定了良好的材料基础；2、不同时期叶片DNA的含量不一样，苗期幼叶DNA含量比青荚期无柄叶DNA含量高。     

五个鲜食玉米新品种的DNA指纹图谱研究与应用

利用SSR标记技术，对5个鲜食玉米新品种及其亲本的DNA指纹图谱进行了研究。从88对SSR引物中，筛选出37对在鲜食玉米中表现多态性丰富、带型清晰明显且稳定的引物，分析了鲜食玉米自交系的遗传多样性，建立了各品种的特征DNA指纹图谱及数字指纹，可以有效用于种子质量检测。     

11种兰属植物DNA的提取及RAPD-PCR实验体系的建立与优化

采用改进的CTAB-DNA提取方法，从11种兰属植物的嫩叶中提取总DNA。所得的DNA样品的A260／A280值在1．7～1．9之间，琼脂糖凝胶上主带清晰，较少降解，样品纯度高，DNA量大。另外，对影响RAPD-PCR的Mg^2＋、dNTPs、Taq酶、引物浓度等因素进行了优化。确定优化的反应体系为：75ng模板DNA，1×Buffer，2．5mmol／LMg^2＋，0．15mmol／LdNTPs，0．75UTaq酶，引物浓度0．4μmol／L，反应总体积为25山。该体系在20个供试兰属实验材料中获得较好的扩增结果。     

从水稻单粒糙米中快速制备基因组DNA的方法

本方法用粳稻和籼稻单粒糙米作材料制备基因组DNA,在制备过程中,加入2%CTAB破裂液直接磨碎,无需加入液氮研磨,获得浓度接近40 ng/μL,可直接用于PCR扩增的基因组DNA.与从嫩叶中提取的DNA相比,其质量无明显的差异.