RAPD标记在油菜核不育两系及其杂种纯度检验上的研究Ⅰ.DNA快速制备及纯度检测

DNA分子标记技术是检测遗传差异的一项新技术,特别是RAPD标记技术应用更加广泛,DNA质量是保证RAPD分析成功的关键.本文采用改良SDS法对油菜叶片总DNA进行了提取,经琼脂糖凝胶电泳和紫外光光度计分析,结果表明:1、所提取的DNA浓度和纯度都高,可以作为分子生物学研究所用,并为本实验后续的PCR扩增奠定了良好的材料基础;2、不同时期叶片DNA的含量不一样,苗期幼叶DNA含量比青荚期无柄叶DNA含量高.     

种子纯度和品种真实性鉴定中提取玉米DND方法的比较分析

本文通过比较和分析了SSR分子标记技术的三大类DNA提取方法CTAB法、SDS籽粒快速提取法、快速碱煮法，在种子纯度和品种真实性检验中的效果，发现鉴定玉米品种真实性和种子纯度最理想的DNA提取方法是CTAB小量提取DNA法，对于快速检测的理想DNA提取方法是快速碱煮法。     

DNA指纹用于杂交水稻种子纯度和真伪鉴定的研究进展

本文简要阐述了RAPD、RFLP、AFLP、SSR等几种主要的建立DNA指纹图谱的分子标记技术及其在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中的研究和应用情况,同时评述了这几种分子标记技术各自的优缺点,并就水稻DNA提取方法的改进、PCR扩增反应程序和反应体系的优化、扩增产物的检测以及DNA指纹在杂交稻种子纯度和真伪鉴定中的准确性等问题进行了讨论。DNA指纹在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中具有广阔的应用前景,关键是要建立一套完善的、标准化的技术体系,进一步简化实验操作程序,降低成本,真正做到简单快速、准确可靠,使DNA指纹能用于规模化、商业化的种子质量鉴定之中。     

基于分子标记稳定性的甜叶菊组培苗DNA提取方法优化

本试验采用甜叶菊组培苗叶片为材料,以RAPD分子标记检验水浴温度与时间、取样重量以及优化步骤等三个DNA提取影响因素,进而以SRAP和MSAP分子标记技术对RAPD结果进行验证,以提高甜叶菊组培苗DNA提取效率。结果表明,水浴温度、时间为70℃30 min(A2),取样量为0.1 g(B2)时,提取到常规步骤9的上清液V(C4)即可满足常规分子标记要求,且提取时间可减少1~1.5 h。     

RAPD及SRAP 2种标记对苦瓜‘如玉5号’杂交种纯度的鉴定

为获得理想的方法鉴定‘如玉5号’苦瓜杂交种子的纯度,以苦瓜杂交一代品种‘如玉5号’及其父母本为材料,利用RAPD(随机扩增多态性DNA)及SRAP(相关序列扩增多态性)2种技术进行其基因组总DNA指纹分析,以获得F1代杂交种与其亲本差异目的基因条带。经过对3种苦瓜新鲜幼嫩叶片总DNA提取,RAPD-PCR和SRAP-PCR扩增以及扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分析,在供试的52条RAPD引物及144对SRAP引物中,共筛选出2对SRAP引物(Me2-Em9、Me3-Em8)能区分杂交种与其母本种子,1条RAPD引物(R10)能区分杂交种与其父本种子,通过SRAP(引物Me3-Em8)及RAPD(引物R10)2种分子标记技术对来自于河西走廊3地‘如玉5号’苦瓜种子进行检测,结合田间观察,结果表明,该方法成本低,操作简单,能很好地对‘如玉5号’苦瓜杂交种子的纯度鉴定。     

DNA分子标记在作物杂交种纯度鉴定中的应用

作物杂交种的纯度鉴定是实现植物新品种保护及种子商品化生产的关键技术环节,对农业生产的经济效益和社会效益具有重要影响。本文全面的归纳了近年来DNA分子标记技术在作物杂交种纯度鉴定中应用,并具体分析了RAPD、SSR、AFLP、SARP、In Del和SNP等分子标记技术在杂交种纯度鉴定中的特点,显示其在作物杂交种的纯度检测上的广阔应用前景。     

RAPD在玉米品种鉴定和纯度分析中的应用

以7个优良玉米自交系和它们的7个单交种为材料,从种子中提取DNA,进行RAPD扩增,探索利用RAPD标记鉴定玉米品种和纯度分析的可能性。研究结果表明,自交系间、杂交种间、自交系和杂交种间均有明显差异,利用3个引物可将14个材料完全分开。RAPD技术用于玉米品种鉴定和纯度分析是可行的。     

黄瓜基因组DNA提取与RAPD分析

采用SDS法、尿素法、改良SDS法、氯化苄法和CTAB法对黄瓜的基因组DNA进行提取。结果表明，改良SDS法提取的黄瓜叶片DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点，其A260／A280在1．7－1．9之间，DNA的产量为450μg/g。用该法提取的黄瓜DNA适合进行RAPD分析。     

玉米种子纯度快速分子检测技术研究

种子纯度检测是产品质量检测的中心，检验种子纯度是促进农业发展和维护种业秩序的必经之路。随着信息化发展，种子纯度快速分子检测技术不断更新优化，如何使用现代化纯度快速分子检测技术验证玉米种子纯度是值得思考的问题。文章阐述了机器视觉技术、分子标记技术、DNA快速提取法，分析了玉米种子纯度快速分子检测技术应用方法，结合试验结果得出玉米种子纯度快速分子检测技术步骤以及梯度要求。     

利用SSR技术快速准确鉴定杂交玉米种子纯度

利用一种快速、廉价的DNA提取方法,提取了两个玉米杂交种及其亲本的DNA用于SSR分子标记分析。分析结果显示,10对被分析的引物中有4对在两个杂交种双亲之间显示出多态性,可以用于相应的杂交种纯度分析。另外,分别利用同工酶技术和SSR分子标记技术同时分析了来自这两个杂交种的种子样品的纯度,分析发现,对于一个杂交种,两种方法都能可以鉴定,并且两者检测的结果是一致的,但是对于另外一个杂交种,由于其父母本非常接近,同工酶不能将其区分。因此,这些结果显示SSR分子标记技术可以很好地用于杂交玉米种子的纯度鉴定,即使是这个杂交种是来自两个非常接近的自交系的。     

随机扩增多态DNA技术在食用菌研究中的应用

RAPD(Bandom Amplified Polymorphic DNA)，即随机扩增多态DNA，是1990年由威兰斯(Willams)和韦尔什(Welsh)两个研究小组几乎同时建立和发展起来的一种新型遗传标记技术。由于其具有独特的检测DNA多态性的方式及快速、简捷、高效等优点，因而在短短的时间内RAPD技术已渗透到有关基因研究的各个领域。本文简单介绍RAPD技术在食用菌研究中的应用。     

橡胶草基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

为探索适合橡胶草基因组DNA的提取方法和RAPD反应体系。采用改良CTAB法提取橡胶草叶片总DNA,得到的DNA能满足RAPD分析需要。通过单因子实验法分析DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶以及Mg2+浓度对RAPD扩增结果的影响,建立了适合于橡胶草RAPD分子标记的最佳反应体系,即20 μL体系中包括：模板DNA30 ng、Taq DNA聚合酶1.75 U、dNTPs浓度0.25 mmol/L、Mg2+浓度2.0 mmol/L、引物浓度0.5 μmol/L、10×PCR Buffer 2.0 μL。RAPD扩增反应程序为：94℃预变性5 min,94℃ 30 s,37℃ 30 s,72℃ 70 s,45个循环,最后72℃延伸10 min。该反应体系具有较好的稳定性及可重复性。     

SSR分子标记在玉米种子纯度鉴定中的应用

SSR是建立在PCR技术上的一种广泛应用的分子标记，具有含量丰富、多态性高、共显性等优点。本文简要介绍了SSR分子标记技术的原理和特点，重点介绍了SSR分子标记技术在玉米种子纯度鉴定上的研究进展，并就其在玉米种子纯度方面的应用潜力进行了探讨。     

雷公藤叶片DNA提取及RAPD反应体系建立

摘要］目的：筛选并建立雷公藤叶片基因组DNA的RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）技术最优反应体系。方法：采用改良的CTAB法提取叶片总DNA,然后通过对RAPD反应体系中最主要的退火温度、引物浓度、dNTP浓度、DNA模板浓度以及Tag DNA聚合酶浓度等5个因子逐个进行单因子优化。结果：20μl PCR反应体系中,雷公藤叶片基因组DNA RAPD最优反应体系为,最佳温度36℃,引物浓度为1.1μmol/L,dNTP浓度1.25mmol/L,DNA模板浓度3790 ng/L,Tag DNA聚合酶用量为5.625 U/L。     

一种橡胶树叶片基因组DNA快速PCR扩增方法

为解决现有的橡胶树基因组DNA提取方法步骤繁琐、耗时长等问题,摸索出一种橡胶树叶片基因组DNA快速PCR扩增方法。通过比较分析快速提法与CTAB法,结果显示快速提取方法提取的基因组DNA完整性很高,同时也适用于RAPD分型分析。相比传统的基因组DNA提取、PCR扩增等其它分子生物学流程,快速PCR扩增方法操作简单、简单快速、成本低廉,尤其适用于大批量样品的基因分型分析。     

DNA分子标记技术在农作物品种鉴定上的应用

文章概述了利用DNA分子标记技术(RFLP、RAPD、SSR、AFLP、ISSR和STS等)进行品种鉴定的原理、特点和研究概况,从DNA分子水平上进行品种鉴定具有准确可靠、成本低、自动化、不受环境影响等优点,DNA分子标记技术在品种鉴定方面具有广阔的应用前景。     

五味子的DNA提取及RAPD鉴定研究

采用CTAB、SDS、改良CTAB法对五味子总DNA提取进行研究,并对总DNA进行电泳分析和含量测定,结果表明以改良CTAB法提取五味子叶片DNA纯度最好,以此DNA为模板可获得条带清晰、重复性好的RAPD扩增结果。从14条重复性好的引物中共扩增出67条带,平均每个引物4.8个片段,多态性位点数为58,比例为86.6%。UPGMA聚类分析的结果与五味子形态学分类结果相似,10份五味子优系在遗传相似系数0.69处可划分为3个类群,该RAPD技术体系可以很好地用于10份五味子种质资源的鉴定。     

RAPD分子标记技术在甘蔗育种上的应用

PAPD（随机扩增多态性DNA）是一项新兴的分子标记技术。该技术与其它分子标记技术如RFLP、DNA指纹图谱、SSCP等相比具有如下特点：1）对受试基因组无特定的要求，无需知道模板DNA序列的信息；2）不需要使用放射性标记；3）仅需毫微克数量级的DNA样品，一般1次扩增只需10一50ng的DNA；4）扩增引物随机设定，可从许多物种中检测出大量的多态DNA；5）检测灵敏度高，操作简单快捷，适合大量样本的快速分析。因而，RAPD技术正越来越广泛地应用于分子系统学研究、品种鉴定、基因组研究、遗传连锁图谱的构建、基因定位等研究领域。     

太行花DNA提取的优化和适用分子标记检测

比较了常规CTAB法、改良CTAB法和SDS法对太行花叶片总DNA的提取效果,并对改良CTAB法提取的DNA在多种分子标记中的适用性进行了测试。结果表明：常规CTAB法提取的DNA难以完全溶解,且有褐化现象;SDS法提取的DNA产率及纯度都很低;改良CTAB法提取的DNA产率高且稳定,无明显降解,杂质少,OD260/OD280比值在1.8左右。以改良CTAB法提取的DNA为模板,应用叶绿体和线粒体通用引物扩增出了特异性的高效产物,ISSR和RAPD引物对总DNA的扩增也获得理想结果。因此,改良CTAB法适用于太行花总DNA提取,其产物能满足核、叶绿体和线粒体基因组分子实验的要求。     

块根淀粉磷差异木薯种质资源的RAPD遗传背景研究

通过RAPD遗传背景研究方法,从分子水平对木薯块根淀粉磷差异种质资源进行分析,为木薯块根淀粉高磷品种的选育打下基础。以国家木薯种质圃筛选出的30个块根淀粉磷差异木薯品种为材料,采用改良CTAB法提取DNA,通过18条RAPD引物对材料进行PCR扩增,利用NTSYS软件对扩增结果进行了遗传关系分析。结果表明：采用改良的CTAB法提取的DNA可以用于RAPD分析;利用18条RAPD引物扩增共得出条带131条,其中多态性条带126条,多态性百分率为96.2%;其中没有发现与磷含量相关的特异性条带,块根淀粉磷含量相近的木薯品种间不能明显聚类;30个品种间的遗传相似性系数GS大于0.71。通过对RAPD结果进行分析,未发现块根淀粉磷含量差异的木薯品种间存在明显的遗传关系,也未发现与磷元素差异相关的特异基因。