河北塞罕坝中央财政森林抚育补贴试点项目实施情况诌议

长期以来由于政策和资金的制约,塞罕坝林场林业发展不均衡,2009年林场以国家森林抚育试点项目为契机,坚持“因地制宜、综合治理、全面绿化”的方针,加强生态建设,维护生态安全,致力于林业生态工程建设,在林业三大体系建设上实现了和谐发展.     

梅花鹿TLR10基因克隆与序列分析

为系统了解梅花鹿免疫系统,用Trizo法提取梅花鹿肝脏总RNA,采用兼并引物RT-PCR方法克隆了梅花鹿TLR10基因并进行了系统的生物信息学分析.RT-PCR结果显示,dTLR10基因完整ORF区长2439 bp,编码812个氨基酸(GenBank序列号为:HQ260630).同源分析显示,dTLR10基因序列与其他物种TLR10基因高度同源,与同属于偶蹄目反刍类的牛和羊同源性高达95％以上.蛋白功能结构域分析显示,不同物种间TLR10蛋白结构域数量及分布上高度相似,蛋白三维结构预测比较显示,dTLR10蛋白胞外区结构与人类TLR10结构相似,两者均表现为经典的马蹄形结构.     

肉羊心型脂肪酸结合蛋白基因第2外显子多态性与肉质性状相关分析

文章以杜泊×小尾寒羊为研究对象,采用PCR-SSCP方法对H-FABP基因exon2进行SNP检测,结果发现,g.939 A→G、g.980 G→A、g.1013 A→C、g.1018 T→C四个突变。与部分肉质性状、脂肪酸、氨基酸相关分析发现,基因型BB对剪切力有显著负效应(P<0.05),基因型BB对棕榈酸含量有显著正效应(P<0.05),基因型BB型对硬脂酸、亚油酸含量有极显著负效应(P<0.01),基因型BB对谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸含量以及氨基酸总和均有显著负效应(P<0.05),对脯氨酸含量有极显著负效应(P<0.01)。     

CAPN1基因4685位点与肉质嫩度相关性研究

[目的]探索延边黄牛与草原红牛钙蛋白酶I(CAPN1)基因4685位点对肉质嫩度的影响。[方法]采用PCR-RFLP技术对草原红牛、延边黄牛CAPN1基因第14内含子区4685位点进行基因多态性与肉质嫩度进行分析,验证该位点在吉林省地方品种牛中的作用。[结果]该位点与肉质嫩度相关检测指标(蒸煮损失、肌纤维直径、剪切力、滴水损失等)密切相关,均表现为T等位基因的存在能够显著提高个体的嫩度水平,但该位点与pH无关。4685位点与屠宰性状(净肉重、胴体重、净肉率等)无关,仅与眼肌面积存在一定的相关性。[结论]延边黄牛与草原红牛CAPN1基因4685位点与肉质嫩度存在密切相关。     

具有HI活性的抗H5亚型流感病毒特异性单克隆抗体的研制

以H5N1亚型禽流感病毒分离株A/Duck/Zhejiang/11/00(H5N1)(DZJ/1100)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/c小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/O细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得三株能稳定分泌抗血凝素特异性HI单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为DD7、FG10、CG12.三株杂交瘤细胞株产生的小鼠腹水和细胞培养液上清的HI滴度分别是213、215、211和27、8、23.与其他具有血凝活性的禽类病毒以及其他14个HA亚型的禽流感病毒的交叉HI试验表明:这三株单抗具有良好的禽流感病毒亚型特异性;与其他H5亚型流感病毒分离株的HI试验和中和试验证实这三株单抗具有良好的交叉性(分别为7/8、8/8、8/8)和中和活性(6/8、8/8、8/8).该亚型特异性单克隆抗体的研制成功为H5亚型禽流感病毒的疫情病原学快速诊断提供了坚实的物质保障.     

兽用生物制品的支原体污染检验及注意事项

制备支原体污染检验培养基所使用原材料水、血清、无机盐类、乳蛋白水解物、琼脂的质量要求、制备培养基方法，检验操作及检验中注意事项。     

葛根素对Akt通路调控3T3-L1脂肪细胞分化的影响

为了研究葛根素（puerarin）对3T3-L1前体脂肪细胞分化的影响,探索其在成脂分化过程中的潜在作用机制,试验在脂肪形成过程中将0、10、50 μmol/L葛根素加入到诱导分化培养基中诱导分化,分别通过油红O染色法及甘油三酯酶法检测葛根素对3T3-L1脂肪细胞的脂滴积累、甘油三酯的影响;采用实时荧光定量PCR检测脂肪细胞中CCAAT-增强子结合蛋白α（C/EBPα）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的mRNA表达量,Western blotting检测脂肪形成相关转录因子及Akt信号通路的蛋白水平的表达量。结果表明,10 μmol/L葛根素极显著增加了成熟脂肪细胞中脂滴和甘油三酯（TG）的积聚,极显著促进了脂肪形成相关转录因子C/EBPα和PPARγ的mRNA和蛋白水平的表达量（P<0.01）。进一步研究发现,与对照组相比,葛根素的刺激可增强Akt信号通路Ser473蛋白的磷酸化表达水平,表明葛根素对成脂分化过程的促进作用很大程度上是通过Akt信号通路的磷酸化来实现的。综上所述,葛根素能够促进3T3-L1前体脂肪细胞的分化,改善胰岛素敏感性,其作用机制与激活Akt信号通路Ser473位点的磷酸化水平有关。本试验结果可为研究胰岛素的效应机制提供新见解,为胰岛素抵抗相关疾病的治疗提供新思路。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因及猪IL-18基因共表达真核表达系统的建立

采用RT-PCR方法扩增了JL/07/SW毒株GP5蛋白和猪IL-18基因。将该基因克隆入真核表达载体pEG-FP-N1,获得重组质粒pEGFP-GP5和pEGFP-IL18-GP5。将重组质粒转染Marc-145细胞,通过Western blotting和green fluorescent检测产物的表达情况。结果显示,所构建的2个重组质粒在Marc-145细胞中能进行有效的转录。结果表明,所构建的重组质粒pEGFP-GP5和pEGFP-IL18-GP5在Marc-145细胞中得到表达,为进一步研究PRRSV基因工程疫苗奠定了基础。     

关于计算机辅助教学运用于分子生物学教学的研究

通过多年的分子生物学教学研究工作,分析了传统教学手段的弊端,提出了将计算机辅助教学技术运用于生物学教学过程理念,阐述了计算机辅助教学技术的优越性、高效性、交互性等突出优点。同时,结合实际多年教学经验提出了计算机辅助教学的相应体会。     

草原红牛m-calpain基因的多态性及其与肉质性状的关系

对草原红牛m-calpain的30 ku调节亚基的DNA序列通过PCR扩增得到1 830 bp大小的产物,这个产物序列包括从外显子4到外显子7的全部序列(包括它们之间的内含子序列).利用限制性内切酶 HhaⅠ对PCR产物进行酶切,并利用最小二乘线性模型初步探索了不同基因型与肉质性状间的关系.结果表明:在31头草原红牛群体中检测到2个等位基因A和B,2个等位基因的频率分别为0.355和0.645;检测到3种基因型AA、BB和AB,3种基因型的频率分别为0.161,0.452和0.387.草原红牛m-calpain基因中BB基因型对牛肉嫩度剪切力值有较大的影响(P<0.05); AA基因型对大理石花纹评分值有较大的影响(P<0.05).