豆类丝核菌中生物碱的提取及苦马豆素含量测定

将豆类丝核菌菌株 7-1、7-3接种于改良 Czapek′s培养基 ,置 2 5～ 2 7℃培养箱培养 1 4d。收集菌丝体 ,自然干燥后乙醇索氏提取 ,回收乙醇至糖浆状 ,H2 O∶ CH2 Cl2 (3∶ 1 ,v/v)萃取 ,水层调 p H1 0后 ,再用 H2 O∶CH2 Cl2 (3∶ 1 ,v/v)萃取 ,水层调 p H7,浓缩后上 73 2型强酸性阳离子交换树脂 ,用 1 mol/LNH4 OH洗脱 ,收集氨洗液 ,调 p H7,浓缩后冻干 ,得到一种浅黄色粉末。取苦马豆素标准品 1 0 0 μg及浅黄色粉末提取物 1 0mg,分别用 1 ml吡啶溶解 ,取 0 .1 ml加 BSTFA0 .1 ml,5 0℃水浴 3 0 min。取反应液 1 μl,直接进样作 GC。结果表明 ,在相同的气相色谱条件下 ,在相同出峰时间 (1 .2～ 8min)内 ,标准品的峰形与总生物碱的峰形完全一致 ,可以判定生物碱中含有苦马豆素。根据计算得出菌株 7-1、7-3生物碱中苦马豆素含量为 5 .90 3 mg/g和 7.0 0 6mg/g。     

噬菌体抗体库技术研究进展

噬菌体抗体库技术是利用PCR扩增出抗体的全套可变区基因,将抗体分子DNA片断如Fab或单链抗体(ScFv)与噬菌体外壳蛋白基因PⅢ或PVⅢ连接,使融合蛋白表达于噬菌体颗粒的表面,经过“吸附-洗脱-扩增”过程富集筛选特异性抗体。这一技术将抗体基因型和表型联系在一起,使识别抗原的能力和噬菌体的可扩增性统一起来,较好的模拟了体内的抗体产生的过程,成为一种高效的筛选体系。本文就噬菌体抗体库技术的原理、构建、筛选及其应用研究进展做一综述。     

苦马豆素人工抗原免疫山羊的安全性试验

试验通过分析疯草毒素人工抗原(疫苗)SW BSA免疫山羊时对机体肝功、肾功的影响,进行安全性评价。将30只羊随机分为对照组(6只)、免疫A组(12只)、免疫B组(12只),免疫组依次进行基础免疫、首免、加强免疫,每次免疫前进行采血,分析血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、尿素氮(BUN)、α苷露糖苷酶(AMA)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)的变化,同时检测尿液中有无SW。结果表明,免疫组与对照组的血清GPT、GOT、BUN、AMA、AKP、LDH差异均不显著(P>0.05),尿液中未检查出SW。     

甘肃棘豆化学成分研究Ⅲ．酸水氯仿提取部位成分分析

甘肃棘豆草粉11kg，用乙醇热回流，回收溶剂，得到浸膏，然后用1mol／L HCl溶液酸化后抽滤，滤液氯仿萃取4次，回收氯仿，得到20．0g酸性氯仿提取部位。将20g样品上硅胶层析柱，用石油醚、氯仿：石油醚(V／V)1：1、3：2、2：1、4：1、氯仿、氯仿：乙酸乙酯(V／V)20：1、10：1、乙酸乙酯、氯仿：甲醇：氨：水(V／V)70：26：2：2甲醇梯度洗脱。每20mL收集一份，共收集785份，TLC检测，合并相同部分，共得到26个组份。酸性氯仿提取物部位，经GC-MS分析，结果表明，酸性氯仿提取物中共有23种化学成分，其中17种已确定结构，另外6种有待进一步分析确定。     

猪细小病毒NS基因原核表达与多克隆抗体制备

旨在制备抗猪细小病毒(PPV)非结构蛋白共有氨基酸的NS多肽多克隆抗体。根据GenBank(MK993540)公布的PPV基因组序列,克隆其非结构蛋白NS1、NS2共有基因序列(NS基因),并进行生物信息学分析。进而将NS基因克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-NS,转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达,利用镍柱亲和层析技术纯化表达的重组多肽,用重组多肽免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,PPV杨凌株NS基因长258bp,编码86个氨基酸的多肽,是具有亲水性的非跨膜NS多肽,具有大量的B细胞线性表位。NS多肽在37℃、0.8mol/L IPTG条件下,诱导6h有大量的可溶性表达。免疫印迹试验结果显示,该多肽具有较好的抗原性。用纯化NS多肽免疫小鼠后获得鼠抗NS多肽的血清抗体效价为1∶12800。用制备的NS多克隆抗体检测纯化的NS重组多肽及真核表达的NS1蛋白,均能检测出相应特异性条带,为进一步研究NS蛋白在PPV致病过程中的作用奠定了基础。     

猪流行性腹泻病毒的RT-PCR鉴定及其 M、N和E基因的序列分析

对引起仔猪严重腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)进行RT-PCR检测,并对PEDV部分基因进行克隆和序列分析。从陕西省某发生严重仔猪腹泻的养猪场采集肠道内容物,利用RT-PCR技术成功检测到PEDV感染。克隆检测到的PEDV M、N和E基因片段,并将该基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与其他不同来源的PEDV毒株进行比较分析。结果表明,克隆的M、N和E基因与其他已经发表的PEDV毒株核苷酸的同源性分别为96.3%～99.9%、95.2%～99.5%和96.1%～96.9%,氨基酸同源性分别为95.6%～99.6%、96.1%～99.5%和96.1%～98.7%;系统进化树结果表明,试验检测的PEDV与国内分离株的PEDV株亲缘关系更近。可见:陕西省养殖场存在猪流行性腹泻病毒感染,其M、N和E基因变异不大。     

省级精品资源共享课程《动物病理解剖学》建设的实践与思考

动物病理解剖学是动物医学专业的一门重要学科,也是基础兽医学和临床兽医学的桥梁。在省级精品资源共享课程"动物病理解剖学"建设过程中,该课程教学团队在教学、科研和人才培养等方面,注重理论知识与实践技能的相互结合,发挥多学科交叉融合的教学团队优势,通过运用多种现代化网络传播手段,对传统的教学资源进行更新升级,改革以往的教学体系、教学方法和教学模式,形成了以"一个平台,两大特色,三项改革"为主导思想的动物病理解剖学教学方法和教学模式的创新,在实践教学过程中取得了良好的教学效果。     

萆Xie中薯蓣皂甙的分离及其对鸡痛风的作用

从萆Ｘie中分离出一种白色针状结晶,经ＴＬＣ和ＭＰ鉴定为薯蓣皂甙。萆Ｘie粉经乙醇提取后制成水剂,比色法测定薯蓣甘质量浓度为４．７８５７g．Ｌ＾－１将３０只痛风鸡随 鸡分成３组,每组１０只,第Ⅰ组为对照;第Ⅱ组每日用肾肿清按１０g．kg＾－１的比例拌料饲喂;第Ⅲ组每日饮水中添加５２．５mＬ皂甙水剂。每间隔３d颈静脉采血３～５mＬ /只,分别测定血液尿酸、血清钙、血清磷的含量。结果表明,第Ⅱ,Ⅲ组血液尿酸含量比     

检测CSFV、PRRSV和JEV感染的多重RT-PCR方法的建立及初步应用

为了建立1种能够应用于临床样本可以同时检测CSFV、PRRSV、JEV 3种RNA病毒感染的多重RT-PCR方法。根据GenBank收录的CSFV、PRRSV、JEV的基因组全序列,选择3种病毒的特异性保守区序列设计了3对特异性引物,优化多重RT-PCR反应条件,建立了能够同时检测3种病毒混合感染的多重RT-PCR诊断方法。特异性分析表明,应用该方法分别从CSFV、PRRSV、JEV毒株以及3种病毒的混合物中扩增出大小分别为777、451、605bp的3条特异性条带,其他对照组检测均为阴性;敏感性分析表明,该方法最低检测量分别为14.2、10.0、8.0pg的CSFV、PRRSV、JEV的RNA;初步应用性试验表明,52份疑似病料中PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为46.1%、21.1%和1.92%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为21.1%。CSFV、PRRSV和JEV混合感染阳性率为3.84%。本试验建立的多重RT-PCR检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,可以有效检测CSFV、PRRSV和JEV的混合感染。