PRRSV陕西分离株ORF5基因克隆、序列分析及原核表达

克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因,并进行序列分析及原核表达。根据GenBank公布的PRRSV ORF5基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV陕西分离株糖基化囊膜蛋白基因ORF5,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。再设计另外1对引物扩增ORF5缺失编码N端31个氨基酸残基的基因片段,将截短的ORF5基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行原核表达。结果扩增到603 bp的PRRSV全长ORF5基因,序列分析表明,分离株与北美型代表株VR-2332和欧洲型代表株LV氨基酸同源性分别为87.8%和54.5%。因此推测陕西分离株属于北美型。SDS-PAGE可检测到大小约为38 ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。West-ern-blot分析表明,重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。     

乙型脑炎病毒E基因在杆状病毒中的表达

利用PCR方法扩增日本乙型脑炎病毒(JEV)E全长基因,然后将其克隆到杆状病毒转座载体pBac-SC中,筛选重组质粒pBacSC-E,再转化入含有穿梭载体的感受态细胞DH10Bac,经抗性及蓝白斑筛选得到含E基因的重组杆状病毒DNA,以脂质体介导法将此重组杆状病毒DNA转染Sf9昆虫细胞,从而获得重组杆状病毒。用此重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞,经Western-blot检测表明,E基因在昆虫细胞中获得表达,表达蛋白的分子量约53 ku,与预期结果大小一致,且能与日本乙型脑炎阳性血清发生特异性反应,这为进一步研究JEV亚单位疫苗和诊断抗原奠定了基础。     

不同揭膜培土技术对云烟87品质的影响

采用田间试验研究了不同揭膜培土技术对云烟87的生长发育、经济性状、物理指标及化学成分的影响。结果表明：与不覆膜的烤烟相比,经过揭膜处理的烤烟在叶片面积、有效叶片数、株高、茎围方面有一定的优势;产量和产值均有不同程度的提高;初烤后叶片的叶长、叶宽及单叶重均有所增加;且在化学品质方面更为协调。总体而言,移栽后地膜覆盖至旺长期揭膜可以显著提高云烟87的品质。     

武平现代烟草农业在线培训系统的构建及应用研究

利用计算机网络技术的基本原理和方法,将烟草种植理论、实用技术与在线培训系统、在线考评系统、专家系统进行集成,整合构建武平现代烟草农业在线培训系统,初步形成了栏目齐全的课程知识网络和数量丰富、题型多样的试题库,满足了基层多元化培训的需要,解决了传统培训考试中课程设计、人员组织、培训组织等方面的难题,节约了大量的人力、物力和财力,为现代烟草农业信息化建设、高素质现代烟草农业从业人员队伍的培养、烟草商业系统学习型企业的创建提供了技术支持和实践经验.     

大学本科生毕业论文存在的问题及对策

分析了目前本科生毕业论文存在的主要问题,并结合实践,就如何提高本科生毕业论文质量提出了相应的对策。     

烟秆替代木屑栽培真姬菇初探

利用烟秆屑替代木屑作为真姬菇生产配方中的部分原料,试验表明,烟秆屑可成功替代木屑栽培真姬菇,促进菌丝生长,缩短生产周期并提高生物转化率;随着烟秆屑在料中替代比例提高,白色真姬菇产量有一定提高,但差异不显著;产品经检测,符合无公害食品标准。     

HPLC分离甘肃棘豆中苦马豆素

甲醇浸泡甘肃棘豆粉 ,回收甲醇浸泡液至浸膏 ,1 mol/L HCl溶解后上 73 2型强酸性阳离子交换柱 ,1 mol/L NH4 OH洗脱并挥发至干 ,得到总生物碱。总生物碱经氨性氯仿提取后 ,通过高效液相色谱柱分离 ,色谱条件是 :反相 ( C1 8硅胶 )柱 ,在 2 5min内用 5%～ 1 0 0 %甲醇线性梯度洗脱 ,苦马豆素一般出现在 80 %～1 0 0 %的范围内 ,表现为一个宽峰。高效液相色谱柱分离后回收溶液得到一种白色细针状结晶 1 .0 4 mg,植物中的提取率为 0 .0 0 52 %。经 TLC、MP、IR、MS鉴定分析 ,确定所分离到的结晶为苦马豆素     

苦马豆素-BSA免疫山羊的血清相关酶评价

 【目的】通过评价SW-BSA免疫山羊的血清相关酶，探索SW-BSA免疫接种后对动物机体组织器官的保护作用。【方法】将24只山羊随机分为免疫对照组、免疫攻毒组和攻毒组，其中免疫对照组和免疫攻毒组接种SW-BSA，免疫攻毒组和攻毒组拌料饲喂10 g/kg BW/d甘肃棘豆草粉攻毒。【结果】血清GOT、GPT、LDH、AKP、BUN、AMA和抗体效价的检测结果表明，免疫攻毒组山羊较攻毒组山羊LDH活性升高延缓28 d，AKP活性升高延缓14 d，AMA活性降低延缓21 d，BUN活性升高延缓14 d，GOT活性升高延缓28 d。攻毒后免疫攻毒组山羊抗SW抗体水平降低，但在攻毒的第21天有一反弹，之后逐渐下降。【结论】这些酶活性延缓变化和抗体水平变化，说明在甘肃棘豆攻毒的前30 d内，SW-BSA能够有效地延缓SW对山羊肝脏、心脏和肾脏等组织器官的损伤。     

MSB1细胞上MATSA的分离鉴定及纯化

将培养收获的M SB 1细胞用磷酸盐缓冲液洗涤3次后,调整细胞浓度为2×106/mL,然后每毫升细胞悬液加2 IU木瓜蛋白酶和1 mm o l/L的L-胱氨酸溶液0.1 mL,混匀后37℃作用1 h以分离M SB 1细胞表面M AT-SA。对木瓜蛋白酶处理前后的M SB 1细胞进行间接荧光抗体染色以检测M ATSA的分离情况。获得的M ATSA粗提物经超滤浓缩和Sephadex G-75凝胶纯化后,用SDS-PAGE检测纯化的结果。试验结果表明,从M SB 1细胞表面分离到M ATSA,经电泳获得了纯化的M ATSA,其相对分子质量约为35 ku。结果为M ATSA单克隆抗体的制备及其相关的研究奠定了基础。     

CD58分子在新城疫疫苗免疫中的佐剂效应探讨

应用从猪红细胞提取的 CD58分子协同新城疫 疫苗 ,免疫 18日龄尼克红公鸡 ,以β-微量法测定ND抗体效价。并在免疫后 39d用 F4 8E9强毒株攻毒。结果表明 ,CD58能促进 ND抗体的提前产生 ,使应答负期明显缩短 ,并且试验组 ND抗体效价显著高于对照组 (P<0 .0 5 ,或 P<0 .0 1)。攻毒后 7d内 ,试验组鸡死亡率为 16 .7% ,对照组为 5 3.3%。