猪细小病毒NS基因原核表达与多克隆抗体制备

旨在制备抗猪细小病毒(PPV)非结构蛋白共有氨基酸的NS多肽多克隆抗体。根据GenBank(MK993540)公布的PPV基因组序列,克隆其非结构蛋白NS1、NS2共有基因序列(NS基因),并进行生物信息学分析。进而将NS基因克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-NS,转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达,利用镍柱亲和层析技术纯化表达的重组多肽,用重组多肽免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,PPV杨凌株NS基因长258bp,编码86个氨基酸的多肽,是具有亲水性的非跨膜NS多肽,具有大量的B细胞线性表位。NS多肽在37℃、0.8mol/L IPTG条件下,诱导6h有大量的可溶性表达。免疫印迹试验结果显示,该多肽具有较好的抗原性。用纯化NS多肽免疫小鼠后获得鼠抗NS多肽的血清抗体效价为1∶12800。用制备的NS多克隆抗体检测纯化的NS重组多肽及真核表达的NS1蛋白,均能检测出相应特异性条带,为进一步研究NS蛋白在PPV致病过程中的作用奠定了基础。     

钙盐沉淀-O_3-UBAF深度处理畜禽养殖废水试验

畜禽养殖废水有机物、氨氮含量高,属于高浓度难降解废水。为了提升畜禽养殖企业应对环境保护压力的能力,试验采用钙盐沉淀-O_3-UBAF组合工艺将化学法、高级氧化、高级好氧处理相结合来深度处理畜禽养殖废水。结果表明:在进水pH值为8.7,氯化钙添加量为125 mg/L(反应60 min+沉淀120 min),臭氧氧化接触时间为60 min,臭氧添加量为40.5 mg/L,上流式曝气生物滤池A段(UBAFA)水力停留时间为3 h,气水比为4∶1,上流式曝气生物滤池B段(UABFB)水力停留时间为4.0 h,气水比为2.5∶1时,处理出水的化学需氧量(COD_(cr))及氨氮、总氮、总磷、悬浮物(SS)浓度分别小于90,17,30,2.5,20 mg/L,完全满足《畜禽养殖业污染物排放标准》(GB 18596—2001)相关指标的排放限值要求。该系统抗反冲洗干扰能力较强,75 min系统出水水质就能恢复正常。