脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1基因敲低人肺癌细胞A549构建及其对线粒体功能影响

目的 建立脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1(APE1)基因敲低人肺癌细胞A549,并初步观察线粒体功能变化.方法 APE1基因shRNA序列与pSIREN-RetroQ慢病毒载体经酶切连接重组体(pSIREN-RetroQ-shAPE1),再与病毒包装质粒共转染293T细胞;收集病毒液并感染A549细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株A549shAPE1.免疫印迹法检测稳定细胞株中APE1干扰效率.用双氧水处理A549 shCotrol和A549 shAPE1细胞24 h,分析细胞内ATP及活性氧(ROS)变化.结果 经PCR和测序鉴定成功构建重组慢病毒载体pSIREN-RetroQ-sh APE1,免疫印迹法证实A549 shControl和A549 shAPE1稳定细胞株构建成功;双氧水处理后,A549shAPE1细胞中ATP活性明显低于A549shControl细胞(P＜0.05),而ROS明显增加(P＜0.01).结论 APE1干扰可影响肺癌细胞中线粒体功能.     

高质量提取银杏种仁总RNA的改良方法

提取高质量的RNA是获取银杏(Ginkgo biloba L.)种仁药用蛋白基因以及从基因表达水平研究林木良种银杏种子发育和后熟的必要条件。现有提取方法难以获得高纯度的银杏种仁总RNA。本研究旨在改良现有提取方法,以满足抽提富含蛋白质、多糖、多酚等特殊材料高质量RNA的需要。文中将改进的CTAB法和Trizol一步法相结合,优化了试剂组合并改进实验细节,从银杏种仁中获得了高质量的总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28SrRNA、18SrRNA条带,亮度满足2：1比例关系。OD260/OD280比值在1.85~2.00之间。将提取的总RNA用于Northern杂交分析可检测到清晰的信号,而用于RT-PCR和5'-RACE也可获得清晰的目的条带。说明这种方法获得的总RNA完整度和纯度很高,完全可以满足下游分子生物学实验要求。     

旱地马铃薯不同覆盖种植方式的土壤水热效应及其对产量的影响

在大田条件下,以不同沟垄覆盖种植方式为处理,通过测定土壤含水量、耕层土壤温度和产量等,计算马铃薯耗水量和水分利用效率,研究旱作条件下马铃薯不同覆盖种植方式的土壤水热效应及其对产量和水分利用效率的影响.结果表明,马铃薯采用高垄膜覆盖沟覆草垄播能有效增加马铃薯生育前期地温,苗期日均地温较传统平播(CK)增加了0.5℃～2.23℃,0～ 100 cm土壤贮水量提高52.8 mm.6月底至7月中旬的伏旱期间,高垄膜覆盖沟覆草垄播处理0～25 cm土层日均地温较全地膜覆盖处理降低3.6℃～6.9℃,较CK仅增加0.6℃～0.8℃;0～100 cm土层土壤贮水量较全膜覆盖处理增加6.2～ 8.3 mm,较CK增加27.3 mm.表明采用高垄膜覆盖沟覆草垄播种植,可改善伏旱期间的土壤水热状况,有利于马铃薯的生长发育,产量和水分利用效率较其它覆盖种植方式分别提高8.39％～58.38％和8.46％ ～67.97％.因此,高垄膜覆盖沟覆草垄播处理实现了水温对马铃薯生长的协同作用,能显著提高马铃薯对自然降水的利用效率和产量.     

酶解法协同超声波法提取山楂中总黄酮的工艺条件优化

采用纤维素酶酶解法协同超声波法提取山楂果实中的总黄酮.通过单因素试验和正交试验对提取工艺进行优化,优化后的工艺条件如下:纤维素酶用量为30 mg/g,酶解温度为50℃,酶解时间为1.5h,酶解液为20倍量的35％乙醇,酶解pH值为5,在40℃条件下超声提取30 min;在此条件下的总黄酮提取率为8.48％.酶解法协同超声波提取法的提取率比单独使用超声波法高29.5％,比单独使用酶解法高13.2％.     

植物性杀虫剂防治小麦吸浆虫研究

从防治小麦吸浆虫（Ｓｉｔｏｄｉｐｌｏｓｉｓ ｍｏｓｅｌｌａｎａ Ｇｅｈｉｎ）施用化学农药对农田生态系统的影响、植物性杀虫剂对吸浆虫的防效和对天敌的保护作用三方面研究了植物性杀虫剂在小麦吸浆虫防治中的作用,结果表明,在小麦吸浆虫防治中,应用植物性杀虫剂,不仅对吸浆虫有较好的防效,而且可减少化学农药对农田生态系统的影响,其中,２９％净叶宝对吸浆虫的效果较好,对面虫的防效可达７７．７％－９０．１％。     

苦烟制剂、BV制剂扑杀松墨天牛成虫及防治松材线虫病试验

试验结果表明,植物源药物苦烟制剂对带疫松墨天牛成虫具有强烈的击倒作用。400倍苦烟制剂在24h时内对松墨天牛成虫击倒率为100％;BV制剂(白僵菌和轮枝菌)对带疫松墨天牛具有42．9％的致死作用。同时,发现BV制剂还具有除治松材线虫病的明显效果。从2001～2003年,在奉化发病林地内使用BV制剂后,林地内的松树枯死率逐年下降,2001年下降率61．86％,2002年为35．2％,2003年为54．8%,而对照林地枯死松树下降率约为0。认为苦烟和BV混合制成的苦烟菌剂是有待开发的对环境安全的防治松材线虫病药物。     

两种新型除草剂对麦田恶性杂草防除效果

推广使用高效、安全的麦田除草剂是控制节节麦等麦田恶性杂草严重发生的经济有效的措施之一，本试验采用田间试验方法研究了AEF1300603OF(3％世玛油剂)及WG13A13．6WG对麦田恶性杂革的防治效果。试验结果表明，WG13A13．6WG对麦田杂草防除效果显著，其最佳用量为25～35g／667m^2。在小麦返青期，对节节麦防效达85％～95％，对蜡烛草的防效达85％～90％，对播娘蒿、荠菜的防效达100％，对猪殃殃、婆婆纳等抗性较强的杂革防效也在90％～100％，均高于AEF1300603OF的防除效果。收获首田间调查发现防效趋势与首期调查结果一致。而且WG13A13．6WG防除杂草后使小麦的增产幅度在16．27％～25．48％。     

陕南茶树主要病虫害绿色防控技术集成与示范应用效果

茶饼病、茶网蝽、茶小绿叶蝉等病虫害是制约陕南茶产业健康发展的主要因素。近年来,通过健身栽培、免疫诱抗、理化诱杀、生物药剂组合等绿色防控技术试验研究,集成了适合陕南茶叶生产的“以健康生态为本,免疫诱抗、理化诱控与生物药剂为主,绿色化学药剂应急防控为辅”的茶树病虫害绿色防控技术模式。依托茶企业、茶叶合作社等新型生产主体,示范推广绿色防控技术,病虫害防治取得明显效果,实现了茶叶产量和品质双提升。     

猕猴桃园绿盲蝽发生动态及性诱防控效果初报

通过性诱监测明确了绿盲蝽在陕西周至猕猴桃园3月下旬至11月上旬发生为害。其中,越冬代和1代若虫在猕猴桃萌芽初期、幼果期为害致叶片出现“破叶疯”和果肉木栓化;成虫在5月、7月和9—10月发生量较大。结合防控试验示范提出了“性诱+科学用药组合”防控技术模式,即萌芽初期(3月下旬)药剂防治越冬代若虫,开花前至采收期(5—10月)应用性诱剂诱捕器控制成虫,采果前后(9—10月)根据虫口密度药剂防治成、若虫1～2次。     

景天三七总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺研究

以景天三七为试材,研究了AB-8、HPD-100、D-101、DM-301、DM130 5种吸附树脂对景天三七总黄酮的静态吸附及解吸性能,并以景天三七总黄酮纯度为指标,通过单因素试验考察其吸附和洗脱条件,研究DM-301大孔吸附树脂分离纯化景天三七总黄酮的最优工艺条件。结果表明:优选的工艺条件为上样液pH为3.0,质量浓度约为1.63mg/mL,吸附速率2BV/h,用70%乙醇溶液以2BV/h解吸速率解吸,解吸液体积为5BV时解吸较完全,纯化后干浸膏中总黄酮由原来的8.99%提高到25.60%,树脂富集倍数约为3倍;DM-301型大孔树脂用于富集景天三七总黄酮效果较好,优选的工艺操作简单、方法可靠。